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11.
【目的】研究鹅卵泡基质层TLR家族基因表达谱及其对LPS不同处理时间后的反应性。【方法】在大群散养条件下,实时观察鹅产蛋过程,分别在产蛋后8和2 h以及产前4、16和28 h注射LPS,并在产蛋后8h屠宰,即LPS作用0、6、12、24和36 h,每个时间点各5只鹅。屠宰时,取卵巢,观察卵泡外观形态,并分离F1-F5级卵泡基质层。试验鹅自由饮水、自由采食、自然光照。LPS处理0、24和36 h的单个F1-F5级卵泡基质层或卵泡用于基因表达分析,而其他LPS处理的每只鹅等级卵泡基质层RNA等质量混合后用于基因表达分析。采用普通PCR方法检测10种鸟类TLR家族基因的在鹅等级卵泡基质层的表达谱,其中以脾脏组织为阳性对照,以不加c DNA模板为阴性对照。根据RT-PCR的表达谱结果,采用Real-time PCR检测不同等级卵泡基质层TLRs表达水平以及不同LPS处理时间对基质层TLRs表达水平的影响。对不同等级卵泡和不同LPS处理时间对基质层TLRs表达的数据,采用单因子方差分析,Duncan法多重比较;对变性卵泡与对照组基质层TLRs表达水平的数据,采用T检验分析。【结果】(1)已公开的10种鸟类TLR家族基因,如TLRs 1A、1B、2A、2B、3、4、5、7、15和21基因均在等级卵泡基质层组织中表达。(2)随等级卵泡生长,TLRs 2A和15表达水平逐渐升高;F1级卵泡基质层TLR2A表达水平显著高于F3、F4和F5级卵泡,TLR15表达水平显著高于F5级卵泡;其他TLR家族基因,如TLRs 1A、1B、2B、3、4、5、7和21在不同等级卵泡基质层中的表达水平差异不显著。(3)在LPS处理0、6和12 h时,等级卵泡外观形态无明显变化,但在LPS处理24 h时,3只鹅的等级卵泡呈深黄色胶冻状变性;在LPS处理36 h时,全部试验鹅等级卵泡呈深黄色胶冻状变性。(4)与对照组(LPS处理0 h)相比,TLRs 2A、4和5表达水平在LPS处理12和24 h时显著升高,TLR2B表达水平在LPS处理24 h时显著升高,TLRs 7和15表达水平在LPS处理6-24 h期间均显著升高,而TLRs 1A、1B、3和21表达水平在LPS处理6-24 h期间差异不显著。(5)与等级卵泡基质层相比,在LPS处理24和36 h的变性卵泡中,TLRs 1A、2A、2B、4、5、7和15表达水平显著升高,TLR3表达水平显著降低,而在LPS处理36 h的变性卵泡中,TLRs 1B和21表达水平显著升高。【结论】已发现的10种鸟类TLR家族基因均在种鹅等级卵泡基质层表达,且随LPS作用时间延长,等级卵泡形态结构发生变化,但TLRs表达水平逐渐升高。 相似文献
12.
拟除虫菊酯类和有机磷类杀虫剂常用来防治包括斜纹夜蛾在内的多种鳞翅目害虫，目前斜纹夜蛾已对这两类杀虫剂产生了不同程度的抗性，谷胱甘肽S-转移酶 (glutathione S-transferases，GSTs) 广泛参与害虫对杀虫剂抗性的形成。前期通过转录组技术筛选到斜纹夜蛾SlGSTO2基因在拟除虫菊酯高抗种群中显著上调表达，为进一步探究该基因的功能，将其在大肠杆菌中异源表达，并测定重组蛋白对拟除虫菊酯类和有机磷类杀虫剂的代谢活性，同时采用抑菌圈试验测定了其抗氧化活性 。 结果表明:重组蛋白SlGSTO2仅对三氟氯氰菊酯有微弱的体外代谢活性，而对氰戊菊酯、高效氯氰菊酯、辛硫磷和毒死蜱均无代谢活性；抑菌圈试验结果表明，表达pET-26b(+)/SlGSTO2的大肠杆菌可以显著降低不同浓度过氧化氢异丙苯的抑菌圈直径，说明SlGSTO2具有抗氧化活性。研究结果丰富了对斜纹夜蛾GSTs Omega家族基因的功能认知。 相似文献