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苹果褪绿叶斑病毒库尔勒分离物外壳蛋白基因的克隆、原核表达及特异抗血清的制备 总被引:1,自引:0,他引:1
利用RT-PCR获得苹果褪绿叶斑病毒(ACLSV)库尔勒香梨分离物外壳蛋白(CP)基因。经序列分析表明,库尔勒香梨(Pyrus sinkiangensis Yu)分离物CP基因由582个核苷酸组成,编码一个由193个氨基酸组成的蛋白质(GenBank accession No.AY669389)。将其克隆到表达载体pET-28a(+)中,转化大肠杆菌(Eschedchia coli)BL21,筛选得到阳性克隆pET-ACP。用IPTG诱导表达,SDS-PAGE电泳分析表明,预期的22kD外壳蛋白在大肠杆菌中得到大量表达。回收原核表达的目的蛋白,免疫家兔,制备了ACLSV外壳蛋白的特异性抗血清。Western blot分析表明,所制备的抗血清可用于检测样品中的ACLSV。 相似文献
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新疆地区四种草莓病毒病原的检测 总被引:4,自引:0,他引:4
【目的】研究新疆草莓病毒病病源种类及田间发生情况,建立主要病毒病原多重RT-PCR检测体系,为无病毒草莓生产提供理论和技术支持。【方法】利用已报道的4种草莓主要病毒病原4对特异性引物,分别对新疆主要草莓种植区采集表现疑似病毒病症状的草莓样品共450份,采用单一反转录PCR(RT-PCR)及多重PCR对采集的样品进行检测,分析新疆草莓病毒病的发生情况。【结果】感染新疆草莓有3种主要病毒,南北疆15个不同栽培区均能检测出这3种病毒,每个采集地的病毒检出率均在26%以上。所有样品中病毒总检出率为64.22%;其中,草莓镶脉病毒(strawberry vein banding virus,SVBV)检出率最高,为51.78%;草莓斑驳病毒(strawberry mottle virus,SMoV)检出率为23.78%,草莓轻型黄边病毒(strawberry mild yellow edge virus,SMYEV)检出率为9.33%,草莓皱缩病毒(Strawberry crinkle virus,SCV)没有检出。病毒复合侵染率达18.45%,两种病毒病复合侵染检出率为16.67%,三种病毒病复合侵染检出率为1.78%;所有样品中对3种病毒的多重RT-PCR与单一RT-PCR检测结果一致。【结论】新疆草莓受SVBV、SMoV和SMYEV三种病毒危害,单一病毒病感染率以及两种以上病毒复合侵染侵染率都较高,在无病毒种苗的培育和生产中加强病毒检测。 相似文献