毛果杨半胱氨酸蛋白酶基因PtCP3的基因克隆和原核表达分析     

要笑云  张强  撖静宜  王莹  曹山  蒋璐瑶  李丽红  李慧  陆海 《中国农学通报》2016,32(14):50-55

为研究毛果杨半胱氨酸蛋白酶基因PtCP3的酶学特征和生理功能,本实验对PtCP3进行了基因克隆和原核表达分析。从毛果杨(Populus trichocarpa Torr.Gray)中克隆得到半胱氨酸蛋白酶基因PtCP3,将其克隆至pMD-18T载体。进一步构建原核表达载体pET30a-PtCP3,并在大肠杆菌(Escherichia coli)中成功诱导表达重组蛋白,然后通过包涵体洗涤法对目的蛋白进行纯化。测序结果表明,PtCP3基因CDS序列全长1074 bp,含有木瓜蛋白酶的保守催化位点和组织蛋白酶B的保守结构域。序列分析结果显示,半胱氨酸蛋白酶基因PtCP3编码357个氨基酸,预测N-末端含有长度为27个氨基酸残基的信号肽序列,去除信号肽后蛋白酶大小为36.515 kDa,理论等电点为7.44。SDS-PAGE电泳结果显示,可以检测到大小约为42 kDa的目的条带,并可通过包涵体洗涤法在体外得到了高表达量、单一的重组蛋白PtCP3。  相似文献   

植物端粒与端粒酶研究进展     

刘 《北京林业大学学报》2010,32(5):163-167

端粒是位于真核生物染色体末端的DNA序列,而端粒酶具有修复延伸端粒的功能,端粒和端粒酶对于维持真核生物染色体的完整性至关重要。在参阅了大量文献资料的基础上,结合课题组的研究工作,对国内外关于端粒、端粒酶的研究进展情况予以汇总,特别突出端粒、端粒酶在植物生长发育中的调控作用,为人类更好地了解和开展有关端粒和端粒酶的研究工作提供借鉴。  相似文献   

杨树14-3-3基因家族的分子进化及表达模式研究     

刘妍婧  王彩玲  陆海  杨海灵 《北京林业大学学报》2010,32(3):1-7

14-3-3蛋白在植物细胞信号传导中发挥重要的作用,探索木本植物14-3-3蛋白家族的进化模式对深入理解该基因家族的功能有重要的指导意义。本文采用生物信息学的方法,在基因组水平上搜索和鉴定了12个杨树14-3-3蛋白基因,其中ε类有7个,非ε类有5个。通过对杨树14-3-3基因家族的系统进化、序列相似性、基因结构和染色体位置分析,发现杨树14-3-3基因的扩张主要是通过最近的一次全基因组加倍事件产生的。在全基因组加倍事件中共产生5对重复基因对,Ka/Ks分析显示这5对重复基因对处于较强的净化选择压力。RT-PCR分析显示在杨树12个14-3-3基因中有8个在不同组织中均表达,另外4个基因的表达部位发生了变异。因此,杨树14-3-3基因家族的分子进化及表达模式的研究结果预示着基因重复后其功能发生了分化。  相似文献   

PP333对柠檬成花、花量及花质的影响     

秦煊南  谢陆海  周仁刚  陈谣春 《中国南方果树》1994,(3)

在四川重庆于１０月２３日和ｌｌ月３日对８年生枳砧尤力克柠檬用３００×１０（－６）或４５０×１０（－６）ＰＰ３３３进行叶面喷施，可极显著或显著地促进成花，提高花量和正常花的比例，对次年着果也有良好效果。  相似文献   

毛白杨酵母单杂交体系的建立     

刘蕾  胡旭东  张强  蒋璐瑶  李丽红  要笑云  陆海 《广西农业科学》2015,46(3)

[目的]通过建立酵母单杂交文库筛选出与毛白杨特异性调控元件结合的候选蛋白,为研究毛白杨木材合成相关基因奠定基础.[方法]采用模板基因PCR方法,分别将ABRE-box、AC-box及-317-Box三次重复序列连接至pAbAi诱饵质粒上,再将诱饵载体转入酵母中;使用磁珠法获得mRNA,采用SMART技术合成cDNA,以cDNA为模板进行LD-PCR并将产物纯化后与pGADT7-Rec载体共转化诱饵酵母,同时进行文库的构建与筛选.[结果]以pBI121质粒为模板扩增获得的ABRE/AC/-317-GUS片段约为650 bp.以Kpn I对重组质粒pAbAi-ABRE/AC/-317-GUS进行单酶切,获得约5000 bp的大片段与650 bp的小片段;测序结果表明,插入序列与ABRE/AC/-317序列一致且方向正确.在SD/Ura培养基中,当AbA为100 ng/mL时,酵母菌落数为0,建库时AbA为100 ng/mL.cDNA与pGADT7载体共转化的酵母Y 1HGold(pAC-AbAi)细胞稀释100倍后,在SD/-Leu培养基上长出89个克隆,含AC-box的诱饵酵母所建库容量为1.3×106,且无rRNA污染.酵母转化产物在SD/-Leu/AbA(100 ng/mL)培养基上长出18个克隆,大于250 bp的有13个克隆;测序和同源分析结果表明,成功筛选到5个候选蛋白,主要是蛋白激酶、核小体蛋白及功能未知蛋白,这些蛋白可作为与AC元件结合的候选蛋白.[结论]建立的毛白杨酵母单杂体系可用于进一步筛选与木材合成相关的基因.  相似文献   

GST-pull down技术筛选毛白杨天冬氨酸蛋白酶PtoAED3互作蛋白     

赵杰  王兵  骆梅  莫黎杰  李慧  刘迪  陆海 《北京林业大学学报》2021,43(5):64-74

  目的   天冬氨酸蛋白酶属于蛋白水解酶家族,为了解析毛白杨天冬氨酸蛋白酶PtoAED3在植物生长发育中的分子调节机制,利用GST-pull down联合质谱技术,对PtoAED3的互作蛋白进行鉴定和分析。   方法   通过同源克隆获得了毛白杨PtoAED3的CDS序列,构建含GST标签的原核表达载体pGEX-4T-PtoAED3。使用IPTG诱导GST-PtoAED3融合蛋白表达后,利用GST标签对PtoAED3蛋白进行纯化,纯化后的PtoAED3蛋白与毛白杨植株总蛋白共孵育,应用GST-pull down技术获得毛白杨总蛋白中与PtoAED3蛋白相互作用的候选蛋白,随后通过质谱技术对筛选到的候选蛋白进行鉴定与分析。   结果   通过质谱技术鉴定这些蛋白的氨基酸序列,共筛选出128 个与PtoAED3特异性结合的候选互作蛋白,这些互作蛋白涉及到细胞进程、代谢过程、应激反应、生物调节、发育过程等多个生物学过程。   结论   通过GST-pull down实验联合质谱技术,筛选出毛白杨中与PtoAED3互作的候选蛋白,为研究毛白杨PtoAED3与底物或复合物的互作及其影响毛白杨生长发育的分子调节机制提供了初步方向。   相似文献   

陇东地区保护性耕作推广探析     

张陆海 《农机科技推广》2006,(11):23-23

甘肃省陇东地区主要包括甘肃东部的平凉、庆阳两市。该区气候干燥、可灌溉面积少,90%的耕地为山塬旱地,水土流失面积占全市总面积的88.5%。甘肃省农机推广站近年来在该区组织开展了以保水、保土和保肥为主要内容的保护性耕作技术的试验示范工作,先后建成农业部保护性耕作示范县  相似文献   

甘肃省中药材生产机械化调查分析     

安宁  马小龙  张陆海  刘鹏霞 《农业机械》2022,(2):69-71+74

通过调查分析甘肃省中药材机械化发展现状及经验启示,探讨中药材机械化发展方面存在的问题,提出了中药材机械化今后发展方向和措施,对扩大全省中药材机械化种植,发展壮大全省中药材产业更好更快发展,农民增收、农村发展和农业经济的支撑力不断增强,推动新时期甘肃省精准扶贫和全面实现小康社会具有重要的现实意义。  相似文献