中国禽(番鸭)呼肠孤病毒YB株S4基因序列分析   总被引：5，自引：0，他引：5  

王劭  邓国华  吴异健  吴宝成  陈化兰 《中国预防兽医学报》2005,27(6):445-449

应用非免疫番鸭胚增殖中国禽(番鸭)呼肠孤病毒YB分离株,用LSTRIAZOL提取病毒RNA,反转录-聚合酶链反应(RT-PCR)扩增中国禽(番鸭)呼肠孤病毒YB分离株S4基因节段cDNA.将S4cDNA克隆到PMDl8-T载体上,并进行了鉴定和核苷酸序列测定.序列分析结果,克隆的S4cDNA共1 124bp,包括非编码区和完整的阅读框架.分子进化系统分析表明该毒株与禽呼肠孤病毒(鸡呼肠孤病毒)的亲缘关系较远,DRV-YB与DRV-89330同缘率为93.3%.  相似文献   

流感病毒M2基因变异与盐酸金刚烷胺耐药性的关系     

李艳华  王秀荣  田国彬  陈化兰  于康震  佟恒敏 《中国兽药杂志》2005,39(3):32-34

盐酸金刚烷胺是治疗流感的常用药物,但流感病毒极易产生耐药性并发生变异.本文仅就使用盐酸金刚烷胺后流感病毒M2基因的变异情况作一综述.  相似文献   

H5亚型禽流感病毒血凝素基因的克隆及表达     

黎玉梅  邓国华  冉多良  熊蕊  陈化兰 《黑龙江畜牧兽医》2007,(4):20-22

研究以RT-PCR方法从H5N1亚型禽流感病毒A/DKZJ/12/00(H5N1)中获得禽流感病毒HA部分基因,将目的基因定向克隆到原核表达载体pET-32a,将测序和酶切验证正确的阳性重组质粒转化大肠杆菌BL21,经IPTG诱导表达。结果表明该蛋白得到了可溶性的表达,表达蛋白的分子质量为25ku;Western-blot分析结果表明,该蛋白可以与禽流感H5阳性血清反应(禽流感的单克隆抗体所识别),检测HA的抗体时具有良好的免疫原性。  相似文献   

HSN1亚型禽流感病毒NA基因在重组禽痘病毒中的表达及其产物的免疫原性     

王全英乔传玲  张洪波吴运谱田国彬  陈化兰 《中国兽医科技》2007,37(4):312-315

将禽流感病毒A／Goose／Guangdong／1／96（H5N1）株的NA基因及LacZ报告基因克隆到禽痘病毒载体pSY681中，构建重组转移载体pSY（NA＋LacZ），将其转染鸡胚成纤维细胞，经蓝白斑筛选，纯化表达NA基因的重组禽痘病毒rFPV-NA，用其免疫SPF鸡，检测该重组禽痘病毒的免疫原性。结果显示，该重组禽痘病毒能够在体外培养细胞内表达具有生物学活性的NA蛋白，表达产物的分子质量约为55ku；用该重组禽痘病毒免疫SPF鸡后，能够使免疫鸡获得对H5N1和H7N1两种亚型HPAIV攻击的部分保护。表明，重组禽痘病毒rFPV—NA具有良好的免疫原性。  相似文献   

H5N1亚型禽流感病毒神经氨酸酶基因的表达及纯化     

黎玉梅  邓国华熊蕊冉多良  陈化兰 《中国兽医科技》2007,37(9):783-786

用RT-PCR方法从H5N1亚型禽流感病毒（AIV）A／Duck／Zhejiang／12／00中获得NA基因，将目的基因定向克隆到原核表达载体pET-32a中，将序列测定和双酶切验证准确的阳性重组质粒转化大肠杆菌BL21，用IPTG诱导，经SDS-PAGE和Western-blot分析，结果显示，重组蛋白得到了可溶性表达，表达的蛋白质分子质量为33ku；该蛋白可以与禽流感H5N1亚型阳性血清反应，具有良好的免疫原性；ELISA检测结果表明，用此纯化蛋白作为包被抗原检测H5N1亚型AIV神经氨酸酶抗体具有良好的灵敏性。  相似文献   

表达禽流感病毒H5HA、H7HA基因DNA疫苗的免疫原性研究     

张芳芳  姜永萍  刘光亮  陈怀涛  乔传玲  陈化兰 《中国预防兽医学报》2006,28(1):1-5

为研究双顺反子DNA疫苗对禽流感病毒（AIV）的保护作用，将H5和H7亚型AIV的HA基因克隆到同一表达栽体上，构建了双顺反子HA基因表达质粒pCI—H5HA—H7HA。以此质粒肌注免疫4周龄SPF鸡，首次免疫后3周加强免疫，同时设pCI—H5HA和pCI—H7HA联合免疫组及空白对照组，每周采血用微量血凝抑制法检测HI抗体。加强免疫后3周分别以100LD50的高致病力禽流感病毒（HPAIV）A／Goose／Guangdong／1／96（H5N1）和A／FPv／Rostock／34〈（H7N1）进行致死性攻击。结果显示各免疫组均可刺激鸡体产生H5、H7特异性抗体，pCI—H5HA—H7HA诱导产生的抗体对H5N1和H7N1的攻毒保护分别为50%和10％，而pCI—H5HA和pCI—H7HA联合免疫的攻毒保护均为70％。表明双顺反子质粒可诱导鸡产生较好或一定的保护，但免疫效果不够理想，推测与DNA的摄取及其体内表达有关，可望通过调整DNA疫苗的多种因素提高免疫效果。  相似文献   

禽流感病毒A/PFV/Restock/34(H7N1)HA基因在昆虫/杆状病毒系统中的表达   总被引：3，自引：0，他引：3  

李贺  孟庆文  冉多良  于康震  陈化兰  李永强  吴东来 《中国预防兽医学报》2006,28(3):294-297

经RT-PCR扩增了禽流感病毒A/PFV／Restock／1／34（H7N1）1．7kbHA基因的cDNA，将其克隆到pMD18-T中并测序。在去除编码HA信号肽的核苷酸序列后，亚克隆到杆状病毒转移载体pBlueBacHis，筛选到重组质粒命名为pBlueBacHisH7HA，测序正确后与线性化的杆状病毒DNA（Bac-N-Blue^TMDNA）共转染sf9昆虫细胞，挑取蓝色蚀斑，经三轮蚀斑纯化，获得数株重组杆状病毒rpBlueHisH7HA。提取重组病毒DNA，经PCR证明目的基因片段已插入到杆状病毒基因组中，血凝实验、SDS-PAGE和Western blot实验结果表明HA基因在重组杆状病毒感染的HFive细胞中获得了表达。  相似文献   

猪流感抗体间接ELISA检测方法的建立   总被引：12，自引：1，他引：12  

陈艳  辛晓光  杨焕良  李婷  李海燕  乔传玲  陈化兰 《中国预防兽医学报》2007,29(4):308-311

猪流感病毒A／Swine／Fujian／668／2001（H3N2）株感染的鸡胚尿囊液，经差速离心后，再经蔗糖密度梯度离心，提纯、纯化的猪流感病毒经NP-40处理并反复冻融，作为猪流感间接ELISA抗原，确立了间接ELISA检测方法。对29份HI试验猪流感为阴性的血清进行了检测，经统计学分析，确定间接ELISA判定标准，被检血清OD490nm值≥0．20判定为阳性。该方法对猪瘟等11种猪疫病阳性血清无交叉反应，批内和批间重复试验的吸收变异系数分别在3．34％～8．12％和6．2％～9．04％之间。与HI的符合率达到92．8％，经卡方检验（P〈0．01）比HI试验敏感。为猪流感抗体检测提供了快速、准确、简便的方法。  相似文献   

表达H5亚型禽流感病毒HA基因的DNA疫苗免疫保护效力研究   总被引：6，自引：1，他引：5  

姜永萍  于康震  邓国华  田国斌  乔传玲  陈化兰 《中国农业科学》2004,37(7):1071-1071

 表达高致病力禽流感病毒分离株A/Goose/Guangdong/1/96(H5N1) [GD/1/96(H5N1)]HA基因的DNA疫苗质粒pCIHA5具有良好的免疫保护性,为了将其开发并应用于实际,对其免疫保护效力进行了进一步的研究。结果表明,用10、40、70、100和150g pCIHA5和油苗1次免疫后,其免疫保护率分别为12.5%(1/8)、58.3%(7/12)、72.7%(8/11)、50.0%(6/12)、66.7%(8/12)和100%(12/12),其中70和100g剂量组的病毒分离结果  相似文献   

一株野鸟源H9N2亚型禽流感病毒的全基因组序列分析及致病性研究     

张芳  王晶  卢昆鹏  肖丽  彭志  崔鹏飞  关立峥  邓国华  陈化兰 《中国预防兽医学报》2015,37(1)

为进一步了解2014年分离自我国南方野鸟粪便中的一株H9N2亚型禽流感病毒(AIV)Wide Bird/Hu N/SC1400/2014(H9N2)(WB/400/14)的生物学特性,本研究对其进行全基因组序列测定、进化分析及SPF鸡、SPF鸭和BALB/c小鼠的感染性试验。序列分析显示:该分离株的HA裂解位点基序为333PAASDR↓GL340,其中不存在多个连续的碱性氨基酸,符合低致病性禽流感病毒(LPAIV)氨基酸序列特征。该分离株不同基因片段来源较复杂,分别与H9、H6、H4、H1、H11、H10、H3等多种亚型的LPAIV同源性较高,呈现明显的多样性。感染性试验显示,WB/400/14不能够在SPF鸡和小鼠体内有效复制,但病毒感染SPF鸭后能够在部分脏器中检测到病毒的存在,并且感染鸭能通够过咽喉和泄殖腔同时向外排毒,而同居感染鸭仅通过泄殖腔向外排毒,表明分离株在SPF鸭群中具有良好的水平传播能力。本研究为AIV的监测和防控提供实验依据。  相似文献