鸽Ⅰ型副粘病毒病的诊断与防治     

方忠意  崔保安  陈红英 《中国兽医杂志》2006,42(11):64-65

2005年10月份，郑州市某肉鸽场发生以肠炎、严重腹泻和神经症状为特征的传染病，经流行病学调查、病理剖检和实验室诊断，确诊为鸽Ⅰ型副粘病毒感染，报告如下。  相似文献   

胞外区基因的克隆、可溶性表达和纯化     

李新生    杜向党  陈红英  高风山  李云岗  夏春 《中国畜牧兽医》2007,34(9):53-57 

 从鸡脾脏中提取总 RNA,以总RNA为模板,5’-ATC TAG AGG TAC CGG ATC C-(T)₁₅-3’为反转录引物,采用TaKaRa AMV反转录酶合成First-strand cDNA (fcDNA)。根据GenBank中登录的鸡的BF2基因胞外区序列,设计了含EcoRⅠ和 HindⅢ 酶切位点的2对引物,分别扩增鸡BF2的胞外区基因。PCR产物经纯化回收后,插入到含LacZ基因的原核克隆载体pGEM-T Easy中,转化至大肠杆菌JM109感受态细胞,经EcoRⅠ和Hind Ⅲ双酶切及PCR鉴定,筛选出阳性克隆。再把所克隆的片段亚克隆到表达载体pMAL-p2X vector,构建重组质粒p2X/BF2（1-5）。将重组表达质粒转化入大肠杆菌TB1感受态细胞,筛选阳性克隆,经IPTG诱导表达后,进行聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)分析。结果表明,本研究克隆了5类鸡BF2的胞外区基因序列,试验结果证明本研究已成功克隆并可溶性表达了5类BF2胞外区蛋白质分子,全长约807~819 bp,编码约269~273个氨基酸。采用淀粉树脂柱亲和层析和DEAE凝胶过滤方法对表达产物进行了纯化,并对纯化的表达产物进行了western blot鉴定。本研究为进一步利用BF2的胞外区在体外构建MHC Ⅰ类分子结合筛选抗原表位肽平台奠定了基础。  相似文献   

淮南猪IL-2全基因的克隆与遗传进化分析   总被引：1，自引：0，他引：1  

郭小参  崔保安  陈红英  杨明凡  管倩  吕晓丽  王东方 《华北农学报》2008,23(4)

参照GenBank发表的猪IL-2cDNA基因序列,设计l对引物,将河南地方品种淮南猪脾淋巴细胞在伴刀豆球蛋白A(Con A)的刺激下体外培养27 h后,提取激活淋巴细胞总RNA,进行反转录.聚合酶链反应(RT-PCR)扩增,克隆到pGEM-T Easy载体上并测序.测序结果显示,克隆的HuainanPIL-2 eDNA全长为516 bp,开放阅读框(ORF)包含465bp,编码154个氨基酸,分子量为17.4 kDa,等电点为5.27,疏水氨基酸38.3%,亲水氨基酸42.O%.碱件氨基酸11%,酸性氨基酸23%.此cDNA与已报道的猪IL-2同源性为100%,与猫、牛、鸡、狗、鸭、山羊、马、人、家鼠等的IL-2基因进行比较分析,核苷酸同源性分别为83.7%,82.6%,28.2%.80.6%,29.6%,83.4%,81.3%.82.O%,61.5%.  相似文献   

健康犬的生理生化值     

林远青  陈红英  欧海涛 《中国工作犬业》2003,(6):5-6

一、犬生理生化值的研究意义 犬的生理生化值是判断犬只健康的重要依据.关于犬的血液生理生化值,不同版本书籍提供的数据各有差异,给判断犬只是否患病造成了不必要的影响.为了提高犬病诊治的能力,并给同行们提供一些参考数据,笔者对不同品种的健康犬进行了部分生理生化指标的测定.  相似文献   

麻鸭IL-18成熟蛋白基因的克隆、表达及其表达产物的生物学活性检测     

陈红英  崔保安  夏平安  李新生  杨明凡  郑兰兰 《农业生物技术学报》2007,15(4):584-588

应用RT-PCR技术,直接从麻鸭(Tadorna ferruginea)脾淋巴细胞总RNA中扩增出麻鸭IL-18成熟蛋白(mDuIL-18)基因,克隆到pGEM-T Easy载体。测序结果表明获得了mDuIL-18基因,其大小为513bp,并将该基因亚克隆到原核表达载体pQE30。SDS-PAGE可检测到分子质量为19.76kD的重组蛋白,Western blot证实该重组蛋白可与兔抗鸡IL-18血清发生特异性反应。表达产物以包涵体形式存在,经变性和复性处理后明显促进鸭T细胞转化。用mDuIL-18(150或200ng/鸭)和禽流感病毒(AIV)疫苗免疫鸭2周后,血凝抑制(HI)抗体平均滴度达到7.5～7.7log2,而只用AIV疫苗免疫和用mDuIL-18(100ng/鸭)和AIV疫苗免疫的HI抗体平均滴度仅达到6.3～6.6log2,表明mDuIL-18提高AIV灭活油乳苗诱导的免疫应答。  相似文献   

鸡传染性喉气管炎病毒gD基因的表达及间接ELISA检测方法的初步建立     

杨明凡  崔保安  张素梅  陈红英  李祥瑞 《中国兽医学报》2009,29(3)

将含有ILTV gD糖蛋白基因的重组质粒pMD-T-gD用EcoR Ⅰ和Hind Ⅲ双酶切后,回收目的片段,将其连接到原核表达载体pET-28a(+)中,构建重组表达质粒pET-gD.将pET-gD转化到宿主表达菌BL21中,用IPTG诱导表达,SDS-PAGE结果显示表达目的蛋白大小为55 000,Western blotting表明表达产物具有良好的免疫原性.表达的蛋白产物经纯化后作为ELISA包被抗原,以辣根过氧化物酶标记的羊抗鸡IgG作为二抗,初步建立了间接ELISA诊断方法,并确定了抗原最佳包被浓度为24.5 mg/L;最佳血清稀释度为1:80,初步确定ELISA判定标准为D450≥0.25判为阳性,小于0.25为阴性.  相似文献   

在平凡的岗位上执着追求     

陈红英 《中国工作犬业》2006,(3):10-11

我是广东省公安厅警犬基地的一名普通兽医和带犬民警。作为一位平凡的女民警,从警3年来,我一直默默无闻地奋斗在警犬技术工作岗位上,3年多的时间如转眼烟云,但对我这位女警犬技术工作者来说,逝去的时光是那样的清晰而充实。3年多的时间,使我对警犬的认识从陌生到熟悉、对警犬技  相似文献   

猪繁殖与呼吸综合征病毒和猪圆环病毒4型双重SYBR Green Ⅰ实时荧光定量PCR检测方法的建立     

张远航  董新莹  张玉勤  刘晓晨  李洪炫  陈曦艋  潘佳佳  陈红英 《中国兽医学报》2022,(11):2158-2163

分别靶向PRRSV ORF7基因和PCV4 ORF2基因的高度保守区,设计了2对特异性引物,建立了同时检测猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)和猪圆环病毒4型(PCV4)的SYBR GreenⅠ-based双重实时荧光定量PCR方法。PRRSV和PCV4在同一样品中的区别在于它们独特的熔解温度(Tm),PRRSV为84.5℃,PCV4为79.0℃,而对其他非靶向的猪常见病毒没有显示特定的熔解峰,且检测极限分别为PRRSV的81.5 copies/μL和PCV4的41.1 copies/μL。采用SYBR GreenⅠ实时荧光定量PCR和常规PCR方法对30例有呼吸和繁殖衰竭症状的猪临床样本进行检测,检测结果显示,PRRSV阳性率为20.0%(6/30),PCV4阳性率53.3%(16/30),且PRRSV阳性样品中PCV4检出率为50.0%(3/6),较常规PCR检测更灵敏。该方法可能是检测PRRSV和PCV4共感染的一种快速、灵敏和可靠的方法。  相似文献   

基于天然poIFN-α17突变的高活性猪干扰素α17m的制备及其体外抗病毒活性     

方剑玉  游一  席燕燕  张青娴  毛展展  徐彬  郎丽敏  陈红英  李绍钰 《中国兽医学报》2024,(5):921-927

为获得高抗病毒活性的猪α亚型干扰素(porcine interferon α,poIFN-α),将天然的poIFN-α17进行突变和合成,并将突变后的猪poIFN-α17基因命名为poIFN-α17m,合成poIFN-α17和poIFN-α17m基因后将其克隆入pVB220大肠杆菌表达载体,将该载体转化DH5α感受态细胞,进行温度诱导表达后,收集菌体进行SDS-PAGE。将表达的蛋白采用Ni琼脂糖凝胶纯化后,采用Western blot检测重组poIFN-α17和poIFN-α17m的反应原性,在PK-15细胞上检测其对VSV和PRV的抗病毒活性,检测重组poIFN-α17和poIFN-α17m蛋白对下游干扰素刺激基因(interferon stimulating genes, ISGs)Mx1、OAS1、ISG15的诱导激活作用。结果显示,成功构建了pVB220-IFN-α17和pVB220-IFN-α17m表达载体,实现了poIFN-α17和poIFN-α17m在大肠杆菌中的表达。该蛋白具有良好的反应原性,且重组poIFN-α17m在PK-15细胞上对水泡性口炎病毒(vesicul...  相似文献   

从群居性谈犬的行为   总被引：1，自引：0，他引：1  

陈红英  高民群  黄宇雄 《中国工作犬业》2005,(5):12-13

正确了解犬的行为特征及其产生的原因,可以帮助我们更好的认识它们,掌握与其相处的方法,扬长避短,最大限度地发挥犬在我们工作、生活中的作用。  相似文献