H1N1亚型流感病毒感染A549细胞的环状RNA表达分析     

蒋盛强  胡靖  陈红英 《畜牧兽医学报》2023,(11):4724-4734

通过对甲型H1N1流感病毒感染A549细胞前后表达的环状RNA进行鉴定,筛选病毒感染引起的差异表达环状RNA,为进一步研究环状RNA在流感病毒感染过程中的调控作用奠定基础。本研究从病毒感染和PBS处理的A549细胞中提取RNA,构建测序文库后进行全转录组测序。通过生信分析,鉴定了病毒感染前后宿主细胞表达的环状RNA。以未感染组为对照,使用EdgeR包,筛选条件：■、P value<0.05,筛选获得感染前后的细胞中差异表达的环状RNA。使用ClusterProfiler包对差异表达环状RNA的来源基因进行GO和KEGG分析。最后通过荧光定量PCR、外切核糖核酸酶处理、Sanger测序等手段验证了病毒感染前后宿主细胞内部分环状RNA的差异表达。结果表明：流感病毒感染细胞后,环状RNA的表达数目增加。感染组和未感染组分别鉴定到1 101和676个环状RNA表达,这些环状RNA广泛分布在所有染色体上,其中大部分(约60%)长度在300～1 000 nt,约20%的环状RNA长度超过2 000 nt。基于基因位置关系的分析发现,75%～82%的环状RNA源自外显子,12%～17%源自正链...  相似文献   

猪圆环病毒2型与猪支原体混合感染的诊断     

杨兴武  焦显芹  潘鑫龙  张宇耕  乔涵  陈红英 《安徽农学通报》2015,(7)

2015年1月,河南某地猪场60日龄仔猪出现腹泻、呼吸困难并伴有后肢端坐状咳嗽为主要特征的疾病。PCR检测PCV2和MH均为阳性,结合发病情况、临床症状和剖检变化,诊断为猪圆环病毒2型与猪支原体混合感染。  相似文献   

猪伪狂犬病毒与猪圆环病毒2型二重SYBR Green I实时荧光PCR检测方法的建立     

郑兰兰  张君涛  李明凤  郭显坡  陈红英  崔保安  魏战勇 《兽医大学学报》2014,(3):366-370,378

参照GenBank登录的相关基因序列,设计了2对引物分别用于扩增伪狂犬病毒（PRV）gH基N与猪圆环病毒2型（PCV2）ORF2基因的部分片段。将测序正确的PRVgH基因与PCV2ORF2基因片段克隆入pGEMTEasy载体,转化大肠杆菌DH5a,经测序鉴定后得到阳性重组质粒,作为标准品模板建立SYBRGreenI荧光定量PCR标准曲线和熔解曲线,并对其灵敏性、特异性和重复性进行验证。结果显示,PCV2与PRv荧光定量PCR的标准曲线的Tm值分别为80．8℃和86．7℃,熔解曲线特异,灵敏度分别可达215拷贝／μL和180拷贝μL,是普通PCR检测方法的100倍。结果表明,建立的PCV2与PRV荧光定量PCR检测方法实现了2种病毒的同时检测,能够对PRV、PCV2混合感染的临床病料进行快速诊断。  相似文献   

Taq Man实时荧光定量PCR检测猪伪狂犬病病毒方法的建立与初步应用     

赵丽  崔保安  陈红英  魏战勇  赵玉丛 《中国预防兽医学报》2009,31(2)

根据猪伪狂犬病病毒gE基因保守序列,设计合成引物和探针,优化反应条件,建立实时定量荧光PCR方法.实验结果表明,当50 pmol/L的引物O.3μL和5 pmol/L的探针0.5μL时,反应体系获得的CT值较小,而荧光强度增加值最大;制作的标准曲线显示各浓度范围内具有良好的线性关系;可检测到相当于20拷贝/μL的病毒DNA;与猪细小病毒、圆环病毒和猪瘟病毒等不发生交叉反应;敏感性比常规PCR电泳检测高约100倍.该方法具有快速、特异、敏感、可定量,并可同时检测大量样品等优点.  相似文献   

一例猪流感的RT-PCR诊断   总被引：1，自引：0，他引：1  

文英会  崔保安  刘内生  陈红英 《中国畜牧兽医》2009,36(1):102-103

2007年11月,河南省鹤壁市某猪场发生一起疑似猪流感的疾病。根据猪流感NP基因序列设计、合成1对引物,应用RT-PCR技术对病死猪的气管、肺脏等组织进行RT-PCR扩增,扩增出预期目的片段。结合临床症状和病理剖检变化确诊为猪流感感染。  相似文献   

鸳鸯鸭MHC-Ⅰ α链基因的克隆与分子进化分析     

孙凯  李新生  崔保安  陈红英  魏战勇  张蕾  宋亚鹏  阮武营 《中国畜牧兽医》2009,36(12):60-62

根据GenBank中登录（登录号：AB115244）的鸭MHC-Iα链序列设计并合成1对引物,采用RT-PCR技术从鸳鸯鸭脾脏组织中克隆出鸳鸯鸭MHC-Iα链基因,并进行T-A克隆和序列测定。结果表明,所获得的鸳鸯鸭MHC-Iα链基因长909 bp,编码303个氨基酸的多肽,含一个完整的鸳鸯鸭MHC-Iα链胞外区成熟肽基因。序列比较发现,鸳鸯鸭MHC-Iα链基因与GenBank登录的其它品种的鸭MHC-Iα链核苷酸同源性为89.4%～91.0%,与人和其他动物的MHC-Iα链胞外区成熟肽基因的氨基酸同源性为11.1%～79.3%,表明MHC-Iα链胞外区成熟肽基因存在着种的多样性,且亲缘关系越近,同源性越高。鸳鸯鸭MHC-Iα链胞外区成熟肽基因的成功克隆为进一步研究鸭MHC-I基因表达、生物学活性和应用奠定基础。  相似文献   

鸳鸯鸭MHC-Ⅰα链基因的克隆与分子进化分析     

孙凯  李新生  崔保安  陈红英  魏战勇  张蕾  宋亚鹏  阮武营 《中国畜牧兽医》2009,36(12):60-63

根据GenBank中登录(登录号:AB115244)的鸭MHC-Ⅰα链序列设计并合成1对引物,采用RT-PCR技术从鸳鸯鸭脾脏组织中克隆出鸳鸯鸭MHC-Ⅰα链基因,并进行T-A克隆和序列测定.结果表明,所获得的鸳鸯鸭MHC-Ⅰα链基凶长909bp,编码303个氨基酸的多肽,含一个完整的鸳鸯鸭MHC-Ⅰα链胞外区成熟肽基因.序列比较发现.鸳鸯鸭MHC-Ⅰα链基因与GenBank登录的其它品种的鸭MHC-Ⅰα链核苷酸同源性为89.4%～91.0%,与人和其他动物的MHC-Ⅰα链胞外区成熟肽基因的氨基酸同源性为11.1%～79.3%,表明MHC-Ⅰα链胞外区成熟肽基因存在着种的多样性,且亲缘关系越近,同源性越高.鸳鸯鸭MHC-Ⅰα链胞外区成熟肽基因的成功克隆为进一步研究鸭MHC-Ⅰ基因表达、生物学活性和应用奠定基础.  相似文献   

猪白细胞介素18全基因的克隆、真核表达质粒的构建及其在猪肾细胞中的表达   总被引：1，自引：1，他引：1  

郑兰兰  崔保安  陈红英  陈瑞亮  方忠意  李小康  赵丽 《中国兽医学报》2009,29(1)

通过RT-PCR方法自猪脾脏淋巴细胞中扩增mpIL-18基因.序列测定表明,pIL-18全基因核苷酸长度为579bp,编码192个氨基酸.将其克隆到真核表达载体pcDNA3.1中,构建重组质粒pcDNA-IL18m,所获重组质粒经过酶切、测序鉴定,证实含有目的片段,且连接、构建正确.阳性克隆鉴定后,在脂质体作用下转染猪肾细胞(PK15),通过提取RNA检测到了mpIL-18在PK15细胞中的表达.  相似文献   

实时荧光定量PCR检测伪狂犬病病毒方法的建立与初步应用   总被引：3，自引：0，他引：3  

赵丽  崔保安  陈红英  魏战勇  郑兰兰  吕晓丽  文英会 《中国兽医学报》2009,29(4)

根据GenBank中猪伪狂犬病病毒(PRV)gE基因的序列(EF552427),利用Premier express设计并合成1对引物和相应的TaqMan探针,从猪伪狂犬病病毒(PRV)感染的细胞中提取DNA,进行PCR扩增.将鉴定正确的gE基因片段克隆入pGEM-T Easy载体中,转化大肠杆菌JM109,经PCR及测序鉴定后得到阳性重组质粒.以该阳性重组质粒为荧光定量PCR标准品模板建立标准曲线.对探针浓度、引物浓度、镁离子浓度和退火温度进行优化,建立了最佳的荧光定量PCR反应体系和扩增程序.经临床应用表明,该荧光定量PCR方法的建立为猪伪狂犬病病毒的早期诊断并定量分析猪伪狂犬病病毒感染程度奠定了基础.  相似文献   

反转录—套式PCR方法检测鸡传染性法氏囊病病毒   总被引：3，自引：0，他引：3  

陈红英  胡子信 《中国预防兽医学报》1999,21(5):370-372

采用蛋白酶Ｋ消化,酚,氯仿抽提的方法提取法氏囊匀浆和细胞培养液中的鸡传染性法氏囊病病毒基因组ＲＮＡ,用特异的寡核苷酸引物对其ＶＰ２高变区进行反转录－套式ＰＣＲ扩增,应用该方法从一个法氏囊匀浆中即可特异地检出ＩＢＤＶ ＲＮＡ,得到的扩增产物可用于分子流行病学的进一步分析,而从感染材料的处理到扩增结果的电泳检测,在两个工作日之内可轻松完成。  相似文献