全文获取类型
收费全文 | 253篇 |
免费 | 6篇 |
国内免费 | 23篇 |
专业分类
林业 | 3篇 |
农学 | 13篇 |
6篇 | |
综合类 | 120篇 |
农作物 | 1篇 |
畜牧兽医 | 135篇 |
园艺 | 1篇 |
植物保护 | 3篇 |
出版年
2023年 | 3篇 |
2022年 | 5篇 |
2021年 | 1篇 |
2020年 | 3篇 |
2019年 | 7篇 |
2018年 | 12篇 |
2017年 | 2篇 |
2016年 | 3篇 |
2015年 | 9篇 |
2014年 | 8篇 |
2013年 | 13篇 |
2012年 | 7篇 |
2011年 | 11篇 |
2010年 | 27篇 |
2009年 | 41篇 |
2008年 | 43篇 |
2007年 | 35篇 |
2006年 | 17篇 |
2005年 | 7篇 |
2004年 | 8篇 |
2003年 | 3篇 |
2001年 | 1篇 |
1999年 | 7篇 |
1998年 | 5篇 |
1995年 | 3篇 |
1992年 | 1篇 |
排序方式: 共有282条查询结果,搜索用时 281 毫秒
51.
【目的】获得表达H9亚型禽流感病毒血凝素(HA)基因的重组禽痘病毒。【方法】将含禽痘病毒启动子LP2EP2驱动的HA基因,插入到禽痘病毒转移载体pSY681中,获得重组转移载体pSY681/HA。用脂质体将其转染已感染亲本禽痘病毒S-FPV-017株的鸡胚成纤维细胞,使其在鸡胚成纤维细胞内与禽痘病毒基因组发生同源重组,产生表达HA的重组禽痘病毒rFPV-HA。在含有X-gal的营养琼脂培养基上进行蓝斑筛选后,对重组病毒进行多次蚀斑克隆,并用间接免疫荧光法对感染重组病毒鸡胚成纤维细胞中HA的表达产物进行鉴定。【结果】以重组禽痘病毒DNA为模板,利用HA基因特异引物进行PCR,扩增出1条约1.7 kb左右的带。以间接免疫荧光法证实重组禽痘病毒能表达HA。【结论】成功构建了表达H9亚型禽流感病毒HA基因的重组禽痘病毒,且构建的重组禽痘病毒能表达具有生物学活性的HA。 相似文献
52.
根据GenBank公布的猪细小病毒VP2基因序列,利用Premierexpress软件设计并合成了1对引物和1条相应的TaqMan探针,从猪细小病毒感染的PK.15细胞中提取DNA,经PCR扩增VP2基因,纯化的PCR产物克隆入pGEM-TEasy载体中,构建重组质粒.转化大肠杆菌JM109,经PCR及测序鉴定后得到阳性重组质粒,作为荧光定量PCR标准品模板建立标准曲线.在25此扩增反应体系中,对探针浓度、引物浓度、镁离子浓度和退火温度进行优化,建立了最佳的荧光定量PCR反应体系和扩增程序.该方法能够特异、定量检测猪细小病毒,灵敏度达1.12TCID50/mL. 相似文献
53.
刺柏的化学成分研究 总被引:1,自引:1,他引:0
[目的]研究柏科刺柏属植物刺柏(Juniperus formosana Hayata)果实的化学成分。[方法]通过硅胶柱色谱分离和纯化,应用质谱、核磁共振谱鉴定结构。[结果]从其乙酸乙酯部分得到9个已知化合物:19-羧基-8(17)-13(16)-14-赖伯当三烯;15,19-二羟基-8(17)-13(E)-赖伯当二烯;20-羧基-8(18)-14(17)-15-赖伯当三烯;15-羟基-8(17)-13(E)-赖伯当二烯;柳杉酚;10-羟基-二十烷;β-谷甾醇;10-壬基-二十一烷;懈皮素。[结论]9个化合物均为首次从该植物中分离得到。 相似文献
54.
鸡志贺氏菌产超广谱β内酰胺酶(ESBLs)的分子进化 总被引:2,自引:0,他引:2
【目的】检测鸡志贺氏菌分离株和诱导株所产ESBLs的基因型,探讨其产酶耐药的分子进化机制。【方法】对1株诱导和5株临床分离产ESBLs细菌分别用TEM、SHV、CTX-M 3种通用引物进行PCR扩增、基因克隆及测序分析,确定鸡福氏志贺氏菌ESBLs的基因型和基因亚型。【结果】5株临床福氏志贺氏菌质粒上具有相同的TEM序列和相同的SHV序列,TEM型序列与AY903309(TEM-116)序列相比发生了2个位点基因突变即G157A、C409T,其中409位点碱基突变为沉默突变,157位点碱基突变导致相应氨基酸序列53位发生突变Gly53Ser,此氨基酸突变为新的突变位点,所以该TEM型ESBLs是一种新的TEM亚型,暂命名为TEM-1V型;SHV型与AY826418(SHV-12)序列完全相同,为SHV-12型。头孢噻呋诱导标准福氏志贺氏菌,诱导10代时产生了TEM-1型β-内酰胺酶,诱导50代时产生了TEM-1V型ESBLs。【结论】临床分离鸡福氏志贺氏菌ESBLs的基因型为TEM-1V型和SHV-12型,鸡福氏志贺氏菌TEM-1V型ESBLs是由 TEM-1型β内酰胺酶直接进化而来。 相似文献
55.
鸡大肠杆菌分离鉴定及药敏试验 总被引:1,自引:0,他引:1
采集河南某地养鸡场临床疑似患大肠杆菌病的死鸡的肝脏、脾脏和淋巴结,对分离的细菌进行显微镜检查、细菌生化试验、大肠杆菌O抗原血清型鉴定和PCR检测,分离鉴定结果为大肠杆菌感染.药敏试验结果表明,分离菌株对氟苯尼考、头孢拉定和环丙沙星高度敏感;对头孢唑啉、恩诺沙星、呋喃妥因、阿米卡星、磺胺嘧啶、和林可霉素中度敏感;对氨苄青霉素、庆大霉素、红霉素、氟哌酸、氯霉素、四环素、链霉素、痢特灵、卡那霉索、麦迪霉素等均有耐药性,说明大肠杆菌耐药性普遍存在,建议临床上治疗鸡大肠杆菌病时应先做药敏试验,以筛选出对相应大肠杆菌菌株敏感的药物. 相似文献
56.
【目的】在大肠杆菌中表达猪白细胞介素-2(pIL2),并鉴定其生物学活性。【方法】以含猪IL-2基因的重组质粒pGEM-pIL2为模板,PCR扩增IL-2基因。将猪IL-2基因定向克隆到原核表达载体pGEX-6p-1中,转化大肠杆菌(Escherichia coli)BL21(DE3)感受态细胞,在IPTG诱导下表达融合蛋白GST-pIL2,并应用甲基噻唑基四唑(MTT)试验测定融合蛋白的生物学活性。【结果】以含有猪IL-2基因的重组质粒pGEM-pIL2为模板,PCR扩增出1条约420bp的带。所获重组质粒pGEX-pIL2经酶切、测序鉴定,证实含有目的片段,且连接、构建正确。SDS-PAGE电泳结果显示,可检测到相对分子质量约为42ku的GST-pIL2,Western-blot证实GST-pIL2能与兔抗猪IL-2单克隆抗体发生特异性反应。表达蛋白经薄层层析扫描分析,表达量约占菌体总蛋白的40%。MTT试验证实,表达产物经变性、复性后能极显著促进猪脾淋巴细胞增殖。【结论】猪IL-2基因在大肠杆菌中得到表达,表达的蛋白具有一定的生物学活性。 相似文献
57.
通过RT-PCR技术直接从罗曼鸡脾脏提取的总RNA中扩增鸡白细胞介素IS(ChlL-18)全基因,并克隆和测序得到序列基因全长为597 bp的ChIL-18.将ChIL-18成熟蛋白编码区(510 bp)定向插入到原核表达载体pGEX-4T-1中谷胱甘肽转移酶(GST)基因的下游,构建重组表达质粒pGEX-ChIL-18,转化大肠杆菌B121(DE3),在IPTG诱导下可高效表达融合蛋白(GST-ChIL-18).SDS-PAGE可检测到分子质量约为46 kDa的GST-ChIL-18.Western blot证实GST-ChIL-18能与鸡IL-18单克隆抗体发生特异性反应.融合蛋白GST-ChIL-18经谷胱苷肽Seph-arose-4B亲和柱层析纯化后明显促进鸡T淋巴细胞转化,表明所表达的ChIL-18具有一定的生物活性. 相似文献
58.
禽大肠杆菌O2、O78及其耐药、融合菌株的外膜蛋白免疫研究 总被引:3,自引:0,他引:3
为了研究大肠杆菌O2、O78及其耐药、融合菌株外膜蛋白的免疫原性,用Sarkosyl处理和超速离心技术相结合的方法分别提取禽大肠杆菌强毒株O2、O78,耐药弱毒株O2(Nor^rChl^s)、O78(Not^sChl^r)及其融合双价弱毒株O2.78(Nor^rCll^r)等5个菌株的外膜蛋白(OMPs),经SDS-PAGE,结果均出现1条相同的相对分子质量在31000-43000之间的主要OMPs条带,表明5个菌株存在相同的OMPs成分,将3个耐药菌株的OMPs分别免疫小白鼠和鸡,结果均产生对O2、O78良好的同源及交叉免疫保护效果,用各耐药菌株的OMPs做包被抗原,ELISA方法都能交叉检测3个耐药菌株OMPs免疫鸡血清中IgG水平,且各IgG的消长曲线基本一致。 相似文献
59.
整合子与细菌多重耐药性 总被引:3,自引:1,他引:2
细菌的多重耐药已成为临床治疗的难题,其耐药机制、耐药基因的传播与转移是近年来研究的热点。近来研究表明,细菌中存在一种能捕获和表达基因的遗传单位———整合子在细菌获得耐药机制中起了重要作用。整合子编码一个整合酶负责基因盒在重组位点attⅠ和attC上的插入及切除,同时整合子也提供一个启动子(Pant)负责基因盒耐药基因的表达。整合子携带着重组的基因盒插入到转座子或接合质粒中,在不同的细菌间运动而传播耐药性,同时一个整合子可以捕获多个基因盒,对细菌多重耐药的形成起重要作用。现就整合子的结构、类型、基因盒的种类与表达及其与细菌多重耐药性的有关研究进行综述。 相似文献
60.
一例肾型鸡传染性支气管炎的诊断 总被引:4,自引:3,他引:1
2007年9月,郑州某鸡场发生一起疑似肾型鸡传染性支气管炎。将分离毒株接种20日龄肉鸡,于接种后第4 d出现精神不振、拉稀,第6 d出现死亡。分离病毒可致死部分鸡胚及产生卷曲胚,但不能凝集鸡红细胞,经1 %胰酶处理后能凝集鸡红细胞。经过实验室检查结果结合流行病学调查、临床症状和剖检变化,初步诊断为肾型鸡传染性支气管炎。 相似文献