小熊猫源犬瘟热病毒全基因序列的克隆及序列分析   总被引：2，自引：1，他引：1  

王磊  王照  李天松  刘玉秀  冯娜  王胜乐  许薇薇  姜雪  高玉伟  王铁成  杨松涛  夏咸柱 《中国畜牧兽医》2011,38(11):77-82

本研究对军事兽医研究所病毒二室分离驯化后的小熊猫源犬瘟热病毒(canine distemper virus,CDV)基因组进行全序列测定,并对其基因组特征及H基因遗传稳定性进行比较分析。根据GenBank公布的犬瘟热病毒全长基因组序列设计合成17对特异性引物,以小熊猫源犬瘟热病毒总RNA为模板,RT-PCR进行分段扩增,并克隆到pEASY-Blunt Simple载体中,经测序、拼接获得全长cDNA序列。结果显示,小熊猫源犬瘟热病毒全基因序列与GenBank登录号分别为AF014953、AY445077、AY542312、AY466011、AY386316、AF164967、EU716337、EU726268、AY443350、AB474397、GU138403和AY649446的12个不同毒株全基因序列的同源性分别为86.6%、92.4%、92.5%、92.5%、94.3%、96.3%、95.9%、87.1%、94.5%、92.3%、87.4%和94.6%,与标准强毒株A75/17株(AF164967)的亲缘关系最近,全基因同源性达96.3%,但与疫苗株Onderstepoort(AF014953)亲缘关系相对较远,同源性为86.6%。小熊猫源犬瘟热病毒H基因与其他不同地区具有代表性的30株CDV进化树分析显示,小熊猫源犬瘟热病毒属于Asia Ⅰ型,H蛋白中309－311位氨基酸残基所形成的潜在糖基化位点,为疫苗株没有而野毒株所共有的,并且可能与病毒的免疫原性有关。因此,致弱的小熊猫源CDV在预防免疫的针对性上可能强于已有的疫苗株。  相似文献   

表达犬瘟热病毒H基因重组新城疫病毒的构建及其免疫原性研究   总被引：1，自引：0，他引：1  

田美杰  葛金英  王喜军  冯娜  马良  帅磊  苏华  高玉伟  夏咸柱  步志高 《中国预防兽医学报》2012,34(4):257-261

为研制安全、有效的新型犬瘟热疫苗,本研究利用新城疫病毒(NDV) LaSota弱毒疫苗株反向遗传操作系统,构建出表达犬瘟热病毒(CDV)弱毒疫苗株Rockborn-20/8血凝素(H)蛋白的重组病毒rLa-CDV-H,并对其生物学特性进行鉴定,评估其作为犬瘟热活载体疫苗的安全性和有效性.通过免疫荧光和western blot试验证明了CDV H蛋白的正确表达;重组病毒株保持了LaSota亲本株的低致病性和高滴度鸡胚生长特性;重组病毒rLa-CDV-H接种12周龄比格犬后,可以诱导显著的CDV中和抗体反应.本研究表明重组病毒rLa-CDV-H具有作为犬瘟热重组病毒活载体疫苗的潜力.  相似文献   

5株H9N2亚型禽流感病毒血凝素蛋白分子特征分析和豚鼠间传播能力的评估     

桑晓宇  高玉伟  李林  丁洁  朱晓文  张钊伟  于志君  张坤  程凯慧  冯娜  刘红  王铁成  杨松涛  黄耕  夏咸柱 《中国预防兽医学报》2012,(2):92-95

为研究H9N2亚型禽流感病毒(AIV)在哺乳动物间的传播能力,本研究以豚鼠为模型评价了5株H9N2亚型AIV在豚鼠体内的复制能力和水平传播能力,并分析了5株病毒血凝素(HA)蛋白的分子特征。结果表明,5株病毒均属于CK/Beijing谱系,其中2株病毒的HA具有人样受体特征(Lys226),2株病毒具有禽样受体特征(Gln226),而A/Chicken/JN/Li-2/2010(H9N2)株在该位点的氨基酸残基为苯丙氨酸(Phe226)。裂解位点分析表明,5株病毒均具有低致病性AIV特征。个别病毒的潜在糖基化位点存在增加或缺失现象。感染试验表明,5株病毒均能够在豚鼠呼吸道复制。并且在鼻甲骨处复制稳定,平均病毒滴度为2.01 Log EID50/mL～4.5 Log EID50/mL。传播试验表明,所有病毒株的人工接种豚鼠的鼻洗液中均能够检测到病毒,最长排毒期为接毒后第8 d,而接触组豚鼠鼻洗液中未检测到病毒。本研究表明,5株H9N2亚型AIV均属于CK/Beijing谱系,部分病毒株的HA蛋白已具备人样受体结合特征,并且关键氨基酸位点(226位)处出现新的突变。5株病毒均能够在豚鼠呼吸道复制并通过上呼吸道排毒,但不能在豚鼠间同群传播。  相似文献   

不同H5N1亚型禽流感病毒在豚鼠体内的复制和传播能力评估     

张莹  高玉伟  邓国华  姜永萍  樊树芳  钟功勋  关云涛  陈化兰 《中国预防兽医学报》2010,32(3)

本研究以豚鼠作为哺乳动物模型,评价了6株H5N1亚型禽流感病毒(AIV)的复制和水平传播能力。经滴鼻接种后,检测到6株病毒中有5株病毒在豚鼠上呼吸道和下呼吸道复制,病毒滴度为0.8LogEID50/mL～3.5LogEID50/mL(或g),豚鼠在感染后第2d至第10d可排出病毒。另外一株病毒A/duck/GX/22/02则仅能在豚鼠的下呼吸道低水平复制。在传播实验中,6株病毒中只有A/duck/GX/35/01能够在豚鼠间水平传播。上述研究结果表明,豚鼠适用于作为高致病性AIV哺乳动物水平传播的模型,而且H5N1亚型AIV在哺乳动物间的水平传播能力不同。本研究为进一步研究AIV在哺乳动物间水平传播的分子机制奠定了良好的基础。  相似文献   

野鸟源H5N8禽流感病毒遗传变异分析与致病性评估     

张醒海  李元果  王铁成  初冬  孙贺廷  孙伟洋  冯娜  谢英  何健  秦思源  彭鹏  赵永坤  杨松涛  高玉伟  夏咸柱 《中国兽医学报》2019,(4):646-654

本试验在野鸟禽流感病毒紧急疫情检测过程中鉴定并分离到1株H5N8高致病性禽流感病毒,利用病毒全基因组测序、系统发育及关键氨基酸位点分析解析了该野鸟源H5N8禽流感病毒分离株遗传进化情况,通过体外复制动力学试验及小鼠感染试验,评价了该野鸟源H5N8禽流感病毒分离株对哺乳动物致病性。进化分析显示,该病毒株属于Clade 2.3.4.4,可以不经适应直接感染小鼠并在呼吸系统内复制,表现出有限的组织嗜性,对小鼠呈低致病性。其在体内外复制能力较低。结果表明,本试验加深了对野生鸟携带H5N8禽流感病毒的认识和理解、对野鸟源H5N8禽流感病毒生物学特性的评价,为预测野鸟源H5N8禽流感病毒遗传进化趋势及其生物安全风险评估提供借鉴和参考。  相似文献   

土壤种子库中结缕草种子分离的漂浮浓缩法研究     

王兆明  张学勇  高玉伟  焦建军  石光 《草业与畜牧》2008,(7)

种子的分离及鉴定是土壤种子库研究的基础,漂浮浓缩法很适合单种物种种子的分离.本文研究了不同浓度NaCl盐溶液及漂浮时间对结缕草种子漂浮率的影响.结缕草种子的漂浮率随着漂浮溶液浓度的增大而提高,随着漂浮时间的增加而降低.当NaCl盐溶液的浓度达到或者超过21.26%时,在10 min内结缕草种子漂浮率一直为100%,不随着漂浮时间的变化而变化,表明漂浮浓缩法可以用于土壤种子库研究中结缕草种子的分离.  相似文献   

吉林省部分地区野禽携带新城疫病毒情况调查     

耿海东  ;解林红  ;徐钰  ;高晓龙  ;李元果  ;王海军  ;范胜涛  ;孙贺廷  ;王铁成  ;吴长江  ;张晓田  ;初冬  ;高玉伟 《现代畜牧兽医》2014,(7):45-49

为调查吉林省候鸟迁徙路线中野禽类携带新城疫病毒情况,对吉林省七个地区野禽新鲜环境样品或泄殖腔拭子进行样品采集。对采集的821样品进行新城疫病毒携带的检测,其中有32份阳性样品,阳性分离率为3.9%。经GenBank序列比对32株均为弱毒ClassⅠ群基因3型。本次对吉林省新城野禽携带新城疫病毒调查结果中未见新城疫强毒株。  相似文献   

辽宁部分地区宠物犬犬瘟热病毒分子流行病学调查与分析   总被引：1，自引：0，他引：1  

赵梓淇  宫语晨  闫飞虎  黄培  刘静  王琪  焦翠翠  张醒海  赵永坤  高玉伟  冯娜  夏咸柱 《中国兽医学报》2018,(7)

为了解犬瘟热病毒(CDV)遗传变异情况,先后从辽宁省沈阳、锦州、辽阳等地区的9个宠物医院收治的临床疑似犬瘟热(CD)病犬中采集了165份拭子样品及组织病料。利用CD抗原检测试纸条、RT-PCR检测方式筛选到8份阳性样品。H基因序列分析结果显示该8株CDV野毒株之间的H基因同源性为97.6%~99.9%,与疫苗(Onderstepoort)同源性为89.1%~90.9%;基因遗传进化显示,该8株毒株属于国内当前流行的Asia-1型,来源于沈阳的SY-35株与在北京发现的CDV强毒株BJ-09在同一进化分枝,其余来源于沈阳、锦州和辽阳的7株与东北地区流行的CDV在同一进化分枝;氨基酸序列比对结果显示,H蛋白在氨基酸235~245,415~425,595~605等处存在高变异,H蛋白3 555位置氨基酸的非同义置换概率相对比较高;糖基化位点以及抗原表位预测分析显示该8株CDV的H基因糖基化位点和抗原表位方面均与Asia-1型CDV野毒株相似,但与疫苗株相比变异较大,特别是我们发现JZ-6株丢失了1个潜在N-糖基化位点。结果表明:辽宁地区宠物犬CD流行以Asia-1型CDV为主,不同病毒株间存在遗传多样性。  相似文献   

小鼠细胞因子实时定量PCR检测方法的建立及应用     

张亮亮  侯小强  高玉伟  杨松涛  夏咸柱  张敏 《中国兽医学报》2009,29(12)

采用荧光SYBR Green I建立小鼠细胞因子mRNA实时定量PCR的检测方法;并利用建立的实时定量PCR的检测方法时感染H5N1禽流感病毒的BALB/c小鼠不同时间采集的肺脏组织中几种重要致炎细胞因子及趋化因子mRNA表达水平进行了检测.对HSN1禽流感病毒感染的BALB/c小鼠肺脏细胞因子的检测具有高度的特异性,检测的灵敏度为10~1～10~2拷贝数.H5N1禽流感病毒感染BALB/c小鼠后,小鼠肺脏中IL-1β、IL-6、TNFα、MIG、IP-10、RANTES、MIF和HMGB1细胞因子mRNA表达水平与时照组小鼠相比均有明显差异.建立的实时定量PCR能在基因转录水平敏感和特异地反应细胞因子的表达水平,该技术在基础和临床免疫研究中,具有良好的应用价值.  相似文献   

中国H5N1亚型禽流感的流行现状与防控策略   总被引：1，自引：0，他引：1  

高玉伟 《动物保健》2012,(2):28-29,49

编者按：“禽流感”——这个让养殖者和消费者“闻之变色”的传染病,不仅因其高度的传染性和致死率给家禽养殖者造成直接的经济损失,更因其“人畜共患”的特点给消费者造成恐慌,从而间接影响整个养禽产业的发展。从2004年,我国首次报道“禽流感”疲情以来,虽然政府采取了一系列的措施,  相似文献