猪丁型冠状病毒S1基因的克隆、原核表达及多克隆抗体制备   总被引：1，自引：1，他引：0  

李成  张雨迪  黄小波  刘浩宇  刘志鹏  赵玉佳  曹三杰  文心田  文翼平  赵勤  伍锐 《畜牧兽医学报》2018,(6)

本研究旨在克隆猪丁型冠状病毒(PDCoV)S1基因(1—1 566bp),体外表达S1基因抗原表位预测区Sa(106—1 290bp)蛋白并制备抗该蛋白质的多克隆抗体。运用生物信息学软件分析S1核苷酸和编码氨基酸序列特征,将S1基因抗原表位预测区Sa克隆至原核表达载体pET22b(+),构建重组表达载体pET22b-Sa,转化Rosetta(DE3)菌株,IPTG诱导表达、超滤柱浓缩纯化重组蛋白、Ni柱亲和层析,Western blot检测Sa蛋白的活性,将Sa蛋白免疫新西兰兔制备多克隆抗体。结果表明,CHN-2015毒株S1基因开放型阅读框大小为1 566bp(GenBank No.KY398009),编码522个氨基酸,是具有亲水性的非跨膜蛋白,存在15个潜在的B细胞抗原表位;原核表达Sa重组蛋白,该蛋白质在37℃下用终浓度为0.8mmol·L~(-1)IPTG诱导5h后,蛋白质主要以可溶性形式存在,免疫印迹显示表达的Sa蛋白在上清与包涵体中都有良好的反应性;用纯化的Sa蛋白四次免疫家兔,获得的兔抗Sa蛋白抗体效价可达1∶10 240。本研究克隆了S1基因,原核表达了Sa蛋白和制备了高效价的兔抗Sa蛋白抗体,具有良好的免疫原性,为后续深入开展S蛋白的功能研究奠定了基础。  相似文献   

分子印迹聚合物制备新进展     

张航航  黄小波  杨春华 《湖南农业科学》2007,(6):59-60,63

分子印迹技术是当今科学研究的热点之一。介绍了分子印迹技术的原理以及沉淀聚合法、种子溶胀悬浮聚合法、表面模板聚合法等几种制备分子技术聚合物方法的最新研究进展。  相似文献   

间接ELISA检测胸膜肺炎放线杆菌血清1型抗体的研究     

王斌  文心田  曹三杰  黄小波  杨利  汤君  胡成名 《四川农业大学学报》2007,25(1):99-102

进行了胸膜肺炎放线杆菌血清1型荚膜多糖的提取制备实验,并以该抗原作为诊断抗原建立了检测胸膜肺炎放线杆菌血清1型抗体的间接ELISA方法。此抗原与猪巴氏杆菌病、猪布氏杆菌病、仔猪副伤寒等阳性血清无交叉反应;与胸膜肺炎放线杆菌血清2型、3型、4型、6型、7型、8型、9型、10型标准阳性血清也无交叉反应。可用于猪群感染血清1型胸膜肺炎放线杆菌的诊断和监测。  相似文献   

马鹿花5种配置模式物种多样性比较     

王鲜艳  谷勇  黄小波  吴昊  赵虹 《广东农业科学》2014,41(4):60-63

以马鹿花5种配置模式的调查资料为基础进行多样性分析,结果表明院（1）5 种配置模式中,马鹿花-墨 西哥柏林总体丰富度指数、Simpson 指数、Shannon-wiener 指数以及Pielou 指数最高,马鹿花纯林（泸-2）总体丰富度 指数、Simpson、Shannon-wiener、Pielou 指数最小;（2）马鹿花-三年桐林与马鹿花纯林（泸-2）为同一环境条件下的不 同配置模式,马鹿花-三年桐林丰富度、Simpson、Shannon-wiener 指数指数均比马鹿花纯林（泸-2）高,说明同一环境 条件马鹿花与三年桐混交林比马鹿花纯林物种更丰富、多样性更高;（3）多样性指数在不同群落间的垂直变化幅度 均为草本层>乔灌层,说明草本层较发达,对马鹿花5 种配置模式物种多样性贡献较大。  相似文献   

药用菌竹黄的药用价值及资源保护   总被引：1，自引：0，他引：1  

黄小波  林海萍 《安徽农业科学》2009,37(28):13589-13590

阐述了药用菌竹黄的药用价值、民间应用及临床应用情况,表明了竹黄对人类的重要作用与利用价值。指出为了人类自身的健康及发展,同时也为了保护生物多样性,需采取一定的措施以加强对竹黄菌资源的保护。  相似文献   

氧化应激环境下猪胸膜肺炎放线杆菌ohr基因转录活性的变化     

段丽丽  文心田  曹三杰  黄小波 《中国兽医学报》2009,29(5)

使用异丙苯化过氧氢(Cumene hydroperoxide,CHP)模拟体内氧化应激环境,给予猪胸膜肺炎放线杆菌(Actinobacillμs pleuropneμmonia,APP)血清1型菌不同浓度CHP或相同浓度CHP不同时间的刺激,使细胞处于氧化应激状态,采用半定量RT-PCR方法,以看家基因recF为内参对照,观察ohr基因的转录活性,并进一步分析刺激强度、刺激时间与ohr基因转录活性的关系.结果表明,模拟的氧化应激环境明显增加了ohr基因的转录活性,该基因在转录水平上受到氧化应激调控.ohr mRNA的转录在一定范围内(CHP浓度不大于300 μmol/L时)与氧化物刺激的强度具有时间依赖和浓度依赖关系.模拟的氧化应激促进了ohr基因的转录活性,由此可推知ohr基因可能是APP潜在的毒力基因,在APP致病过程中具有潜在的促进作用.  相似文献   

猪繁殖与呼吸综合征、猪圆环病毒2型与猪巴氏杆菌病混合感染的诊断和控制     

黄小波  刘伍梅  曹三杰  文心田 《中国畜牧兽医》2010,37(2):185-187

2008年9月,四川龙泉某猪场发生以高热、呼吸困难为主要特征的高热病,经流行病学调查、临床诊断结合实验室病原学检查,确诊该疫情是由猪繁殖与呼吸综合征、猪圆环病毒2型与猪巴氏杆菌病的混合感染引起。药敏试验结果显示,巴氏杆菌对阿米卡星、阿奇霉素、环丙沙星等药物高度敏感。用敏感抗生素配合自家组织苗控制了本次疫情。  相似文献   

TGEV双基因嵌合表达质粒pVAX—S—N的构建及体外表达     

杨恒  曹三杰  黄小波  文心田  秦学远 《中国兽医学报》2009,29(3)

采用RT-PCR扩增猪传染性肠胃炎病毒(TGEV)SC-H株S基因5′端主要抗原位点片段和N基因,插入pMD19-T载体,经酶切与测序鉴定后,构建重组质粒19T-N与19T-S.从T载体上将S、N基因切下,以亚克隆方法插入真核表达载体pVAX1,构建嵌合表达S、N基因的重组质粒pVAX-S-N.对重组质粒PCR与酶切鉴定后,以脂质体转染法转染COS7细胞,间接免疫荧光检测转染后细胞外源基因的表达情况.结果表明,重组质粒构建正确且在COS7细胞中得到表达,转染的细胞呈现特异性荧光.真核表达质粒pVAX-S-N的成功构建为进一步研究TGEV核酸疫苗奠定了物质基础.  相似文献   

不同密度麻疯树林地对土壤微生物的影响   总被引：2，自引：1，他引：1  

王江生  谷勇殷瑶吴昊  黄小波 《中国农学通报》2012,28(28):15-20

为了科学评价不同密度麻疯树林地的土壤肥力变化,通过对土壤微生物的研究,结合水肥调控技术等措施,来改善不同密度麻疯树林生态系统的生态环境,维持其林地生产力水平,为科学营造和管理麻疯树林提供基础数据和理论依据,使之加快麻疯树的规模化发展,对云南省双柏县3种不同密度麻疯树林地的土壤微生物数量和类群进行对比研究,并对麻疯树林地微生物进行聚类分析及多样性指数分析。结果表明：3种林地土壤微生物的数量有明显差异,样地2最多,样地1和样地3相差不大;不同土层的微生物数量变化也有所不同,0~15 cm之间土壤细菌、真菌数量逐渐上升,11~15 cm处达到峰值;随着土壤深度的增加,细菌、真菌数量又呈现下降趋势;样地2物种多样性指数也显著高于其他2种林地,这可能是由于适度的密度有利于土壤微生物的生长。因此,在种植麻疯树时,适宜密度为2 m×3 m。  相似文献   

施肥对麻疯树生长、产量及土壤肥力的影响   总被引：1，自引：0，他引：1  

谷勇  殷瑶  吴昊  陈喜英  黄小波  董平 《东北林业大学学报》2011,39(12):56-58,62

以1997年种植的麻疯树人工林为研究对象,对该林分所在的林地进行施肥试验,设置了15个施肥处理和1个不施肥为对照,运用施肥前后树高和胸径生长量、单株产量和土壤养分变化讨论了施肥对麻疯树生长、产量及土壤肥力的影响.结果表明:施肥对麻疯树树高、地径生长、产量有一定的影响,处理12、处理13和处理14与对照相比,树高分别增加...  相似文献