猪胸膜肺炎放线杆菌ArcA基因在低氧环境下的转录变化     

段丽丽  文心田  曹三杰  黄小波 《畜牧兽医学报》2008,39(10)

为研究低氧条件对猪胸膜肺炎放线杆菌（Acfinobacillus pleuropneumaniae，APP）血清1型ArcA基因表达的影响，并探讨ArcA在低氧环境中的作用机制，作者建立了体外培养模型，在低氧环境中培养APP，采用半定量RT-PCR方法，以看家基因recF为内参，检测ArcA基因在低氧条件下的表达水平。结果表明ArcA基因在常氧条件下不转录或低转录，而在低氧环境下高转录，并呈现转录量先升高后降低的趋势。这表明ArcA基因可能是胸膜肺炎放线杆菌潜在的毒力基因，在致病过程中发挥重要作用。  相似文献   

猪传染性胃肠炎病毒与大肠杆菌混合感染的诊治     

黄小波  文心田  曹三杰  杨恒 《养猪》2008,(3):63-64

2007年12月,四川某规模化猪场发生以新生仔猪呕吐、剧烈腹泻、严重脱水及高死亡率为主要特征的疫情,仔猪死亡率高达90%以上,给猪场造成了严重的经济损失.  相似文献   

新城疫病毒强弱毒株鉴别方法的研究进展   总被引：3，自引：0，他引：3  

黄小波  文心田 《中国兽医科技》2002,32(10):20-22

  相似文献   

检测四种鸡呼吸道疫病病毒可视化芯片技术的优化及初步应用   总被引：1，自引：0，他引：1  

杨国淋  马锐  赵玉佳  滑翔  刘志鹏  黄小波  曹三杰  文翼平  伍锐  文心田 《农业生物技术学报》2018,(3)

可视化芯片技术是在传统芯片技术的基础上发展起来的一项新的疾病诊断和基因分析技术,对于临床疾病检测和诊断具有重要意义。本研究针对禽流感病毒(Avian influenza virus,AIV)的核蛋白(nucleprotein,NP)基因设计一对特异性引物,以H9亚型禽流感病毒分离株c DNA为模板,经PCR扩增、连接、转化和核酸序列鉴定后,得到含有AIV-NP基因的重组质粒。同时复苏本实验室保存的3株分别含有新城疫病毒(Newcastle disease virus,NDV)的融合(fusion,F)蛋白基因、鸡传染性喉气管炎病毒(Infectious laryngotracheitis virus,ILTV)胸苷激酶(haemaggluttinin-neuraminidase,TK)基因和鸡传染性支气管炎病毒(Infectious bronchitis virus,IBV)核衣壳(nucleocapsid,N)蛋白基因的重组菌。以上述4种病原的靶基因核酸序列片段的正义链为模板,设计寡核苷酸探针,喷样到尼龙膜上制备成芯片,利用不对称PCR技术扩增生物素标记的靶基因,与芯片进行杂交后,检测结果直接用肉眼就可以判定。本研究对芯片制备流程和检测过程中主要条件进行优化。结果表明当寡核苷酸探针喷样浓度为25μmol/L、芯片杂交反应的时间为1 h、杂交温度为50℃、Streptavidin HRP Conjugate(1.0 mg/m L)稀释2 000倍、二氨基联苯胺(diaminobenzidine,DAB)显色时间为5 min时,芯片检测技术的结果最佳。用该方法与PCR/RT-PCR技术同时对临床采集的96份疑似病料进行检测,两种方法的检测结果一致。本研究构建的检测4种禽呼吸道疾病病毒可视化基因芯片技术具有高通量、快速、准确等优点,为鸡病的临床诊断提供了新的技术。  相似文献   

猪乙型脑炎病毒基因Ⅰ型弱毒株免疫小鼠后诱导INF-γ的能力     

王侨  柴春霞  冯瑶  曹钰莹  邓李霜  曹三杰  黄小波  文翼平  赵勤  伍锐 《四川农业大学学报》2018,(2):233-237

【目的】评估基因Ⅰ型猪乙型脑炎病毒弱毒株(SCYA201201株)作为候选疫苗诱发机体产生细胞免疫的能力。【方法】将基因Ⅰ型猪乙型脑炎弱毒株(SCYA201201株F122代次)腹腔免疫小鼠后使用ELISA检测试剂盒测定早期的INF-γ水平,之后测定INF-γ在小鼠体内的持续时间。【结果】结果显示:猪乙型脑炎SCYA201201弱毒株(F122代次)经腹腔免疫小鼠后,小鼠血清中的INF-γ在免疫后6 h就可上升到一个较高水平,且INF-γ在血清和小鼠脾脏淋巴细胞中均可持续14 d以上。【结论】猪乙型脑炎SCYA201201弱毒株(F122代次)免疫小鼠后能够在早期诱发INF-γ产生,并且能够维持14 d以上,有作为候选疫苗的潜力。  相似文献   

北京市汉石桥湿地浮游植物调查与水质评价   总被引：4，自引：0，他引：4  

黄小波  洪剑明  杜桂森  阮晶晶  王燕华  石燕斌 《湖南农业科学》2009,(4)

2007年对北京汉石桥湿地水系进行浮游植物和水质理化指标的评价调查。浮游植物群落由蓝藻、绿藻、硅藻、隐藻、裸藻和甲藻构成,平均密度为2.4×10^8个/L,其中绿藻占55.7%。湿地水体4项指标透明度、全氮、全磷、化学需氧量的卡尔森营养指数分别为87.80、88.70、98.15和98.69,水质明显富营养化,夏秋季水面有微囊藻藻胞层（微囊藻藻水华）。V形水道水域夏秋季水面也出现裸藻水华。  相似文献   

PRRS-CSF-PCV2诊断DNA芯片构建研究   总被引：10，自引：0，他引：10  

肖驰  曹三杰  文心田  张焕容  肖国生  黄小波 《畜牧兽医学报》2006,37(8):799-803

本研究旨在研制CSF-PRRS-PCV2诊断DNA芯片。根据各病毒序列选取靶标，制备相应探针，并构建DNA芯片。结果表明：该芯片能同时检测PRRS、CSF和PCV2感染，并能区分PRRSV欧洲型和美洲型毒株，芯片检测阳性判读标准为SNR≥1．5（信号总强度模式量化）或信号强度≥1000（信号中位值模式量化）。该芯片具有特异性高、灵敏度高和可重复利用的优点。应用PRRS-CSF-PCV2诊断DNA芯片检测20份临床病料发现PRRSV、CSFV和PCV2单独感染分别为0、15％和5％，PRRSV与CSFV、PRRSV与PCV2、PRRSV、PCV2和CSFV混合感染分别为15％、35％和15％。  相似文献   

猪传染性胸膜肺炎放线杆菌转铁结合蛋白B基因的克隆与表达     

汤君  文心田  曹三杰  黄小波  杨利 《中国预防兽医学报》2007,29(12):943-945

参照猪传染性胸膜肺炎放线杆菌(Actinobacillus pleuropneumoniae,APP)血清1型菌株,设计1对特异性引物,PCR扩增转铁结合蛋白B(tbpB)全基因,克隆到pMD19-T Simple载体中,经测序比较,与参考序列的核苷酸同源性达99.72%。试验将tbpB基因定向克隆到pET-32a( )中,转化BL21(DE3),经诱导后,SDS-PAGE结果显示转铁结合蛋白B得到表达,Western blot检测呈阳性。  相似文献   

猪繁殖与呼吸综合征病毒ORF7基因的克隆及其在毕赤酵母中表达     

黄小波  钱洪喜  曹三杰  文心田  马小平 《中国兽医学报》2013,33(8)

用RT-PCR扩增猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)重庆分离株C14-2的ORF7基因(384 bp),构建克隆质粒pMD19-T-ORF7,经EcoR Ⅰ /Not Ⅰ双酶切回收ORF7基因插入酵母表达载体pPIC9K,构建了重组表达质粒pPIC9K-ORF7,进行PCR鉴定和双酶切鉴定.鉴定的pPIC9K-ORF7经Sac Ⅰ线性化后电转化毕赤酵母宿主菌GS115,筛选获得阳性重组菌GS115(pPIC9K-ORF7),再经G-418/YPD筛选获得高拷贝重组菌,重组子经表型鉴定为Mut.重组菌GS115(pPIC9K-ORF7)经甲醇诱导表达,在96 h表达的N蛋白量最大,N蛋白经SDS-PAGE鉴定大小约为15 000;Western blot表明N蛋白能与美洲型PRRSV阳性血清发生特异性反应,具有良好的反应活性.本研究为开展PRRSV ORF7基因在毕赤酵母中表达及应用奠定基础.  相似文献   

猪传染性胸膜肺炎放线杆菌缺失毒素1激活基因C(ApxIC)同时嵌合副猪嗜血杆菌外膜蛋白P2基因(ompP2)复合突变株的构建     

刘琼  龚雨恒  王国镔  文心田  黄小波  曹三杰  San-Jie 《农业生物技术学报》2012,20(6):695-702

猪胸膜肺炎放线杆菌(Actinobacillus pleuropneumoniae,APP)以及副猪嗜血杆菌(Haemophilusparasuis,Hps)是引起猪发病的2种病菌。本研究以APP血清5型分离株(SW1)为基础材料,通过构建重组转移载体pBOSKΔIC-1和pBOSKΔIC/ompP2,构成卡那霉素抗性基因(Kanr)和枯草芽胞杆菌(Bacillussubtilis)的果聚蔗糖酶基因(sacB)的正负双向筛选表达盒,并筛选获得SW1株缺失毒素I的激活基因C(ApxIC),同时嵌合Hps外膜蛋白P2基因(ompP2)的复合突变株SW1ΔApxIC/ompP2。该突变株经鉴定,与SW1亲本株相比,其缺失了大小为475bp的apxIC基因,同时嵌合有大小为1107bp的Hps ompP2基因,其基本生长特性与亲本株(SW1)没有显著区别;同时在体外,连续传代10代之后缺失的apxIC基因不会发生回复突变,嵌入的ompP2基因仍能够稳定遗传。本研究成功构建了猪传染性胸膜肺炎放线杆菌缺失apxIC基因并嵌合有Hps ompP2基因复合突变株,为今后研究APP和Hps新型二联疫苗打下基础。  相似文献