鸡CD4和CD8α基因cDNA的克隆及其真核表达质粒的构建   总被引：4，自引：1，他引：4  

胡青海  焦新安  徐耀辉  潘志明  黄金林 《扬州大学学报(农业与生命科学版)》2004,25(4):56-60

用Trizol提取6周龄白莱航鸡胸腺组织的总RNA．再用Oligo—dT纤维素富集mRNA后，用RT—PCR分别扩增出鸡CD4和CD8α基因cDNA。PCR产物切胶回收后连入T载体，测序正确后再连入pcDNA3．1( )。将重组质粒pcDNA3．1-CD4和pcDNA3．1一CD8分别转染COS-7细胞，用已知的抗鸡CD4和CD8的单克隆抗体检测到转染细胞中CD4和CD8α分子的表达，这说明构建的真核表达质粒正确，为下一步用DNA免疫方法研制抗鸡CD4和CD8的单克隆抗体以及研究鸡CD4和CD8分子的结构和功能打下基础。  相似文献   

鸡白痢和鸡伤寒沙门氏菌的PCR-RFLP分子鉴别   总被引：10，自引：1，他引：9  

徐耀辉  焦新安  胡青海  焦凤超  曾显营  潘志明  黄金林 《扬州大学学报(农业与生命科学版)》2005,26(1):1-4,29

根据鸡白痢沙门氏菌和鸡伤寒沙门氏菌fliC基因可变区两端的保守序列设计1对引物,PCR扩增出约600bp的产物,用Hin6I对PCR产物进行酶切,经RFLP分析区分鸡白痢沙门氏菌、鸡伤寒沙门氏菌的生物型。利用该技术对6株鸡白痢沙门氏菌标准株及2株鸡伤寒沙门氏菌标准株进行分子鉴别,得到的结果与预计的RFLP模式相符,证明该方法可行。在此基础上对我国不同地区、不同年代的191株鸡沙门氏菌进行分子鉴别,191株中有185株分离株符合鸡白痢沙门氏菌的RFLP模式,6株分离株符合鸡伤寒沙门氏菌的RFLP模式,其中有176株PCR—RFLP鉴定结果与生化特性符合率达100％,另有15株根据生化特性不能鉴别。  相似文献   

弯曲杆菌噬菌体在家禽生产中应用的研究进展     

孙志初  黄金林 《中国家禽》2023,(12):75-80

弯曲杆菌是一种常见的食源性人兽共患病原菌，可引起人类肠道疾病和相关并发症，并且因抗生素的滥用导致其耐药性增加。家禽作为弯曲杆菌的储存库和人类弯曲杆菌病的感染源是防控的重点。噬菌体具有感染和裂解细菌的作用，已成为治疗多重耐药细菌的新型抗菌剂。文章通过综述弯曲杆菌噬菌体的分离鉴定及其在家禽生产中的应用，探讨噬菌体治疗面临的问题，并展望了未来噬菌体治疗的方案。  相似文献   

牛源弯曲菌多重PCR检测方法建立及与其他方法比较     

崔超越  李凤鸣  赖宏刚  焦新安  黄金林 《扬州大学学报(农业与生命科学版)》2021,42(5):1-6

以16S rRNA、ask、mapA和cstA基因为靶基因,基于软件设计引物,建立牛源弯曲菌多重PCR检测方法.通过反应条件的优化以及引物特异性、灵敏度的验证,并与其他方法进行临床样品的检测效率比较,建立同时检测3种牛源致病弯曲菌的多重PCR方法.结果 表明:扩增的目的 条带处出现与预期大小相符的单一明亮条带,引物序列与NCBI的Primer-Blast库已有的菌株同源性均大于99％.应用建立的多重PCR方法对牛养殖场、屠宰场的样品进行检测,同时使用传统平板分离法及现有报道的其他PCR方法进行对比验证,在1375份样品中,多重PCR检测方法、传统平板分离法及其他PCR方法的检出率分别为5.45％(75/1375)、4.87％(67/1375)和5.31％(73/1375),但3种方法的检出率无显著差异.多重PCR方法与现有报道的PCR方法在DNA水平上的最低检测限:空肠弯曲菌分别为19.23、0.93 pg·μL-1,结肠弯曲菌分别为16.93、1.05 pg·μL-1,胎儿弯曲菌分别为14.37、0.23 pg·μL-1.多重PCR方法检测流程需1～2d,且可同时检测3种弯曲菌.而现有报道的PCR方法检测流程需1～2 d,还需制备不同体系分别验证,材料成本更高,传统平板分离法鉴定耗时更久,需5～7 d.这一研究建立的多重PCR检测方法优势表现为操作方便、灵敏度和特异性较高,能同时检测牛源弯曲菌常见种属,可满足牛源弯曲菌规模化检测的需求.  相似文献