猪流行性腹泻病毒S1D蛋白的优化表达及其单克隆抗体的制备     

李洁森  孙荣航  邝燕齐  陈路漫  刘青  郭霄峰 《中国畜牧兽医》2021,48(12):4641-4651

为进一步探究猪流行性腹泻病毒(Porcine epidemic diarrhea virus,PEDV)S蛋白的抗原表位及其功能,本试验通过优化S1D基因的密码子,构建了S1D基因未优化的重组原核表达质粒pET-S1D和已优化的pET-ΔS1D,并进行了诱导表达和纯化。使用SDS-PAGE和Western blotting方法验证S1D、ΔS1D蛋白在大肠杆菌内得到正确表达,利用Image J软件对S1D、ΔS1D蛋白表达量进行灰度扫描,通过t检验分析两者差异性。将纯化的ΔS1D 蛋白免疫 BALB/c小鼠,通过细胞融合、筛选及亚克隆,获得单克隆细胞株。利用体内诱生法制备抗PEDV S1D蛋白的单克隆抗体腹水,使用ELISA、Western blotting、间接免疫荧光试验3种方法对腹水效价及特异性进行检测和验证。SDS-PAGE和Western blotting结果显示,表达S1D、ΔS1D蛋白的样品均在34 ku处出现正确的目的条带。t检验结果表明, S1D、ΔS1D两者蛋白表达量差异极显著(P<0.01)。ELISA结果显示, 腹水的抗体效价达到了1∶1 000 000,腹水与PEDV病毒粒子和纯化后的ΔS1D蛋白反应均呈阳性,与PEDV N蛋白、pET-32a(+)空载体蛋白和猪繁殖与呼吸综合征病毒(Porcine reproductive and respiratory syndrome virus,PRRSV)、猪传染性胃肠炎病毒(Transmissible gastroenteritis virus,TGEV)、猪瘟病毒(Classical swine fever virus,CSFV)、猪德尔塔冠状病毒(Porcine deltacoronavirus,PDCoV)和猪急性腹泻综合征冠状病毒(Swine acute diarrhea syndrome coronavirus,SADS-CoV) 5种病毒反应均呈阴性。Western blotting结果显示,腹水与ΔS1D蛋白和PEDV S蛋白分别在34和180 ku处有特异性条带出现,与pET-32a(+)空载体蛋白、正常Vero细胞蛋白均无特异性条带出现。间接免疫荧光试验结果显示,腹水及阳性对照组均能使细胞出现特异性绿色荧光信号,而空白及阴性对照组均未见绿色荧光信号。密码子优化可在原核表达系统中显著提高重组蛋白的表达水平,本研究基于高效表达的ΔS1D蛋白,成功制备了1株能稳定分泌与 PEDV S蛋白特异性结合的单克隆抗体的细胞株,为进一步探究 PEDV S蛋白抗原表位及蛋白功能的研究奠定了基础。  相似文献   

烯丙孕素和PG600对后备母猪繁殖性能的影响     

王学文  吴凤霞  杨颜  杨巧丽 《猪业科学》2021,38(12):98-100

母猪批次化生产模式是利用现代化的生物技术,根据不同类别母猪繁殖生产群体的规模大小,分别对其进行批次化生产和管理,以达到同时期发情、同期排卵、同期配种和同期分娩的目的。批次化生产将原有的连续式管理模式（即每天或每周都有断奶、配种、分娩及销售）的工作,改为在短时间内完成,且间隔分明有规则,便于全进全出的管理方式的实行。这种批次化生产模式将猪群形成批次来管理,有助于实现整体的饲喂管理、免疫接种、查情、配种、妊娠检测、转舍和分娩等;同一批次出生的仔猪也便于统一饲养管理和免疫,利于促进生产的均衡性,提升猪群的整齐度以及设施设备的利用率,提高生物安全水平,降低生产成本,提高工作效率。  相似文献   

电生功能水对南瓜贮藏期果腐病的防效试验     

李盼亮  张自心  谢学文  柴阿丽  石延霞  李宝聚 《长江蔬菜》2016,(16):81-83

以电生功能水为研究对象,采用喷雾施药方法,研究了不同有效氯浓度的电功能水对南瓜果腐病防治效果。试验结果表明,电生功能水对南瓜果腐病的防治效果随有效氯含量的增加而提高,当电生功能水有效氯浓度为95 mg/L时效果最佳,防效达82.94%,与对照药剂50%多菌灵可湿性粉剂的防效89.41%不存在显著性差异。  相似文献   

内蒙古普通菜豆枯萎病病原菌鉴定     

柴阿丽  杨红敏  李欣  石延霞  谢学文  李磊  范腾飞  李宝聚 《植物病理学报》2023,53(1):133-136

<正>普通菜豆(Common bean),俗称芸豆(Kidney bean),为豆科(Fabaceae)菜豆属一年生草本植物,营养丰富,蛋白质含量高,既是蔬菜又是粮食,是重要的农副产品。内蒙古自治区是我国种植普通菜豆的主要地区之一。随着普通菜豆栽培面积以及连作年限不断增加,病虫害问题日益突出,尤其是枯萎病,严重影响了普通菜豆的产量和品质,已成为限制普通菜豆产业可持续发展的主要因素之一。2021年7月,  相似文献   

水氮调控对苜蓿与无芒雀麦混播草地生长和辐射利用的影响     

汪爱霞  齐广平  银敏华  康燕霞  马彦麟  汪精海  贾琼  唐仲霞  姜渊博 《干旱地区农业研究》2023,(2):168-178

针对我国内陆干旱区人工草地生产管理粗放及气候资源利用不充分等问题,探究合理的牧草种植与水氮供应模式,以充分挖掘区域牧草的生产潜力。采用3 a生(2018年播种)紫花苜蓿(简称‘苜蓿’)和无芒雀麦,分析种植模式(苜蓿与无芒雀麦混播,D1;无芒雀麦单播,D2)、施氮量(低氮量N1:60 kg·hm^-2;高氮量N2:120 kg·hm^-2)和灌水量(以灌水下限占田间持水量θ_f的百分比计,分枝期均充分灌水(75%～85%θ_f),现蕾和初花期轻度亏水W1:65%～75%θ_f、中度亏水W2:55%～65%θ_f、重度亏水W3:45%～55%θ_f,灌水上限均为85%θ_f)对牧草叶面积指数(LAI)、干物质累积量、累积截获光合有效辐射量(CIPAR)、辐射利用效率(RUE)、产量(Y)、耗水量(ET_a)、水分利用效率(WUE)和氮肥偏生产力(PFP_N)的影响。结果表明：(1)牧草LAI和...  相似文献   

信息化与农作物良种产业化开发     

戴学文  钱建 《中国种业》2003,(10):35-36

21世纪是信息化的世纪。建立信息化农作物良种产业,为全面推广应用农作物优良品种,及时提供准确可靠的良种信息,促进种植业结构调整,提升农业产业化水平,已成为“三农”经济健康发展的关键;加快农作物良种产业信息化建设步伐,对全面实现农业现代化具有重大意义。1信息化是实现农作物良种产业化开发的必然选择1.1信息化可提高品种资源的利用效益充分应用信息和信息技术,可以大幅度和高效率开发、利用品种资源。当今,育种手段的革新,技术措施的变革,科研育种部门加快农作物品种选育步伐,高产、优质新品种不断涌现,初步满足了农村种植业结构调…  相似文献   

东乡野生稻研究   总被引：1，自引：0，他引：1  

姜文正  涂英文  丁忠华  沈显华  刘春芳  饶宪章  陈光宇  齐金富 《中国种业》1988,(3)

东乡野生稻属普通野生稻,是迄今金世界分布最北的野生稻。东乡野生稻具有分蘖力强、光合作用强、耐寒、耐旱、休眠期长、柱头外露、花药长大、茎秆较细、璧较厚、较硬、叶片窄且较硬、异交结实率高、根系发达、叶片衰老较慢、米质优、抗病虫性较好等特点。分析了东乡野生稻与籼、粳稻的同工酶、染色体组型及亲和性,但是,东乡野生稻是籼或粳还有待进一步研究,对东乡野生稻与栽培稻杂交后几个性状的遗传力进行了测定。  相似文献   

玉米新品种丰产性和稳产性分析   总被引：1，自引：0，他引：1  

靳丽宏  王新勤  杨勇强  马学文  牛英俊 《种子》2002,(6):75-76

通过分析表明，全省不同试点间生产水平存在着极显著差异，品种间也存在着极显著差异。其中农大84、农大108、豫玉22综合性状较好，丰产性和稳产性较强，适合我省中晚区种植。  相似文献   

大豆高产优质施肥研究与应用   总被引：18，自引：1，他引：18  

郭庆元  李志玉  涂学文 《中国农学通报》2003,19(3):89-89

本文概述了大豆营养特性与施肥的研究结果，提出了高产施肥的关键技术。大豆营养特性：一是对主要营养元素的吸收量较稻、麦作物高（等量籽粒产量），生产100kg大豆约吸收6.5~8.5kg N，1.8~2.8kg P2O5，2.7~3.7kg K2O，3.5~4.8kg CaO，1.8~2.9kg MgO，4.5~9.5g Zn。二是对主要营养元素的吸收积累高峰在花荚期，N、P、K的60~70%在在此期吸收，而不同于稻麦等作物。三是总氮源的40~60%来源共生固氮，而共生固氮又受土壤N、P、K、Ca、Mo、Zn等及土壤PH值影响。四是大豆成熟阶段营养器官的养分向籽粒转移率高，Ｎ、Ｐ、Ｋ分别达58~77%，60~75%，45~75%。大豆施用N、P、K、Zn、Mo、B肥均显著提提高产量，合理配合施用可达到180~300kg/亩。N、P提高籽粒蛋白质含量，K与Zn提高脂肪含量，P、K、Zn、Mo及少量N肥可提高结瘤固氮率。N、P、K和多种微肥可减轻东北连作大豆的不利因子危害，大幅度增加产量。大豆高产施肥，一是根据土壤、植株养分含量确定施肥数量，二是有机肥与N、P、K肥及多种微肥配合施用，三是注重前茬作物施肥，增肥土壤，四是根据土壤条件、耕作制度、大豆品种特性确定施肥数量、方法、时期。中等肥力高产施肥一般应施用N 8，P2O5 4，K2O 4，ZnSo4 1.5(kg/亩)，钼酸铵20~30g/亩，P、K、Zn用作底或种肥，N肥钼肥种肥花期追肥各半，另于花荚期喷施P、N、Mo肥二次  相似文献   

对种子活力的几点认识   总被引：1，自引：2，他引：1  

顾玉民  李炳生  钱建  戴学文  任建 《种子》2003,(6):103-103

俗语说得好:“母强则子良,母弱则子病”。我国劳动人民在自然界的生产实践中就认识到“有处买籽,没处买苗”,这表明了高活力种子对农作物生长的重要性。 种子活力作为种子质量状况的一个重要指标,是指在广泛的田间条件下,决定种子迅速整齐出苗并长成正常幼苗潜在能力的总称(McDonald,1980)。它不仅包括发芽率,而且还涉及到田间的成苗与生长状况,它也能反映种子对不利环境因子的  相似文献