PRRSV重组N蛋白表达、纯化及间接ELISA检测试剂盒的研制     

董林  王艳萍  谢金文  沈志强  祖立闯 《兽医大学学报》2012,(3):355-360

采用RT-PCR扩增出大小409bp猪繁殖与呼吸综合征病毒核衣壳蛋白基因（PRRSV N gene）,将该基因克隆到表达载体pGEX-KG,构建重组表达载体pGEX-KG-N,转化表达菌株BL21（DM3）诱导表达,经SDS-PAGE和Western blot分析表明,重组N蛋白获得了高效表达,融合蛋白相对分子质量为41 000,并具有良好的免疫学活性。扩大诱导培养,收集菌体,提取包涵体,用GST-Protein Purtification Kit亲和层析纯化目的蛋白,SDS-PAGE电泳检测纯度达到90%以上,可满足诊断抗原质量要求。用纯化PRRSV重组核衣壳蛋白GST-N为包被抗原,建立检测PRRSV血清的间接ELISA诊断方法,并组装ELISA试剂盒。优化后抗原最适包被质量浓度为2.5mg/L;血清最适稀释度为1∶100;对血清样本检测临界值为0.224;与美国IDEXX公司的HerdChek ELISA试剂盒符合率为92%,特异性为95%,敏感性为90%;与猪细小病毒、猪伪狂犬病病毒、猪乙型脑炎病毒、猪圆环病毒、猪瘟病毒等常见猪繁殖障碍病标准阳性血清无交叉反应。ELISA试剂盒批内和批间变异系数分别为3.44%～6.34%和5.04%～7.64%。置4℃条件保存12个月,试剂盒稳定性无明显改变。该试剂盒对350份临床疑似血清检出率为88.6%。研制的ELISA试剂盒为PRRSV临床血清抗体检测及流行病学调查提供了技术手段。  相似文献   

鸡褪黑激素受体基因在开产前后不同组织中的表达差异     

李晓宁  宋倩  王慧  闫超  董林松  唐辉 《兽医大学学报》2012,(9):1349-1352,1356

为了从分子水平上了解鸡褪黑激素受体（MTNR）基因在开产前后不同组织中的表达差异,以β-actin基因为内标基因,运用实时荧光定量PCR方法,比较了MTNR1A、MTNR1B和MTNR1C这3个受体基因在心脏、肝脏、输卵管、卵巢、脑和视交叉各组织及在鸡开产前后表达量的差异。结果表明,MTNR1A只在开产后各组织中的表达量存在差异,其中以卵巢组织表达量最高,心脏中表达量最低。MTNR1B和MTNR1C的表达量在开产前或开产后均表现出组织间的显著差异;在开产前后的各组织中,MTNR1B的表达量均以视交叉为最高,卵巢为最低;而MTNR1C的表达量在开产前以心脏中最高,开产后在视交叉中最高,在卵巢组织中的表达量开产前后均为最低。同一组织开产后与开产前比较,MTNR1C基因在心脏、输卵管和脑组织中的表达量呈显著下调趋势。因此,3个受体基因在鸡的不同组织和生理时期存在表达差异。  相似文献   

紫金山鳞翅目害虫风险分析、预测及防控策略     

袁登荣  奚月明  刘曙雯  居峰  董丽娜  陈希 《江苏林业科技》2012,39(5):26-30

通过对南京紫金山不同植被类型鳞翅目昆虫群落结构及时空动态的调查,综合其优势种类、本地和省级历史危害种类;经过研究和分析影响紫金山鳞翅目有害生物危险性的各种相关因子以及这些相关因子的地位、作用和相互之间的关系,分别采用多指标综合评估法、经验综合评估法对紫金山不同植被类型中可能造成危害的各类鳞翅目风险源进行了风险分析和风险预测,并提出了相应的防控策略。  相似文献   

香橼优良单株半同胞家系子代抗寒性研究     

姜慧  徐迎春  李永荣  翟敏  董春兰 《江苏林业科技》2012,39(1):1-5

在南京六合地区对3年生24个香橼优良单株半同胞家系子代进行抗寒性测定研究,结果表明家系子代间抗寒性存在着显著的差异。田间观测-11℃自然低温下春江4#和香橼4#的抗寒性最强,受冻株率分别为86.67%和100%,平均受冻级别均为Ⅰ级,耐寒指数均为2.00;新世纪8#、春江7#和新世纪2#的抗寒性最差,受冻株率均为100%,平均受冻级别均达Ⅲ级,耐寒指数均大于3.00。室内抗寒力测定供试家系子代的半致死温度在-14.84℃～-7.05℃之间。春江4#和香橼4#的抗寒力最强,半致死温度分别为-14.84℃和-13.94℃;春江7#和新世纪2#的抗寒力最差,半致死温度分别为-7.91℃和-7.05℃。抗寒性评估结果一致。根据半致死温度,结合田间抗寒性观测,供试香橼家系子代抗寒性评估排序为春江4#>香橼4#>春江6#>春江5#>新世纪9#>新世纪10#>新世纪3#>香橼1#>新世纪7#>香橼7#>新世纪8#>香橼6#>香橼5#>春江3#>新世纪4#>新世纪6#>香橼2#>春江8#>新世纪5#>春江1#>新世纪1#>春江2#>春江7#>新世纪2#。  相似文献   

海子坪天然毛竹无性系种群地下茎生长与分布规律   总被引：1，自引：0，他引：1  

陈冲  董文渊  郑进烜 《林业科技开发》2012,26(1):26-29

采用形态特征、组织发育成熟度和生理活动的规律综合判断竹鞭相对年龄,具有准确、实用的特点;天然毛竹无性系种群地下茎壮龄鞭的鞭径、节间长、芽数和鞭长均大于老、中、幼龄;天然毛竹无性系种群地下茎鞭梢生长始于4月,5月进入新鞭速生期,6—9月生长速度最快,到12月停止生长;天然毛竹无性系种群95%的鞭根系生长在0～50 cm深的土壤中,21～40 cm是天然毛竹无性系种群鞭根系的主要分布层,占整个剖面的60%。  相似文献   

单色光对肉鸡体质量和小肠免疫应激相关因子IL-6与TNF-α表达的影响     

胡易  姜楠  陈耀星  王子旭  曹静  董玉兰  白鹤 《畜牧兽医学报》2012,43(9):1479-1482

本试验旨在通过检测在单色光下饲养的肉鸡的体质量和空肠中细胞因子白细胞介素-6(IL-6)与肿瘤坏死因子(TNF-α)表达量的改变,探讨单色光对肉鸡生长发育和肠道免疫应激水平的影响。选用256只刚出壳的雄性AA肉鸡,随机分成4组,分别在蓝(480nm)、绿(560nm)、红(660nm)、白(400～700nm)4种光色下饲养。各组饲养管理制度相同,光照的强度为15lx,光照时间为23h。肉鸡42日龄时,称重后取空肠,用ELISA测定IL-6和TNF-α的表达量。试验结果显示与白光组肉鸡相比,蓝光组肉鸡的体质量高15.2%,而空肠IL-6和TNF-α的表达量分别降低了46.8%和33.4%(P<0.05),绿光组、红光组、白光组3组间差异均不显著(P>0.05)。结果表明蓝光能促进肉鸡生长和缓解光刺激诱发的小肠免疫应激。  相似文献   

鹅DHRS7基因克隆、序列分析及其在鹅肥肝形成过程中的表达特点     

何桦  潘志雄  刘贺贺  李乐  夏露  胡深强  鲁凯  董霞  李亮  王继文 《畜牧兽医学报》2012,43(9):1385-1391

为获得鹅DHRS7基因全长cDNA,并探讨该基因是否参与鹅肥肝的形成过程。本研究应用抑制消减杂交文库获得鹅DHRS7基因部分EST序列,采用RACE技术扩增了鹅该基因全长cDNA,并对其序列进行了生物信息分析;用荧光定量PCR技术检测了DHRS7在鹅肝脏、皮脂、腹脂等10个组织中的差异表达,以及填饲对鹅肝脏中DHRS7表达变化的影响。结果发现,鹅DHRS7基因cDNA全长1 279bp,含一个完整的开放阅读框1 011bp(可编码336个氨基酸),25bp的5′UTR和243bp的3′UTR序列;生物信息学分析结果显示,鹅DHRS7含有跨膜结构域以及NADP结合位点,且在这些功能区域变异较少;荧光定量结果显示,DHRS7在鹅肝脏和脂肪组织中都有较高表达,填饲后鹅肝脏中DHRS7的表达水平显著上调(P<0.05)。以上结果表明,DHRS7在鹅肥肝形成过程中具有重要的作用。  相似文献   

小鼠出生后背部毛囊发育与Lef-1表达的研究     

王海东  杨磊  王祎  于秀菊  董彦君  赫晓燕  马淑慧  董常生 《畜牧兽医学报》2012,43(3):382-387

旨在研究Lef-1在小鼠背部毛囊生长周期中的表达规律及其与毛囊生长更替的关系。本试验采用石蜡切片HE染色、Western blotting以及免疫组织化学方法,研究小鼠毛囊的周期性变化,检测Lef-1在小鼠毛囊生长的不同时期皮肤组织中的蛋白表达水平,并对其进行组织定位。结果,昆明系小鼠毛囊生长呈周期性变化,处于不同生长时期的毛囊具有各期的特殊结构;Western blotting结果显示,在各阶段皮肤组织中存在Lef-1蛋白的表达,其在毛囊生长初期的表达量显著高于中期和末期;免疫组织化学结果显示,Lef-1在不同毛囊生长时期的皮脂腺、根鞘和真皮乳头均有不同程度的表达。Lef-1的表达与毛囊的周期性变化存在相关性。  相似文献   

PAX3转录因子在羊驼皮肤组织中的表达和定位分析   总被引：1，自引：0，他引：1  

朱芷葳  贺俊平  于秀菊  李鹏飞  程志学  董常生 《畜牧兽医学报》2012,43(5):729-734

本研究旨在研究PAX3在羊驼皮肤组织中的表达和分布。利用免疫组织化学和Western blot技术研究PAX3转录因子在不同被毛颜色羊驼皮肤组织中的表达与分布。结果表明PAX3在毛球基底层细胞之间,毛乳头周围和毛根部都存在阳性表达,并在不同被毛颜色羊驼皮肤组织中的表达存在显著差异(P<0.05)。结果提示PAX3参与了黑色素细胞的增殖、分化和迁移,PAX3与色素的形成相关。  相似文献   

添加绿汁发酵液和四蚁酸铵对饲用甜高粱青贮品质的影响          下载免费PDF全文

林仕欣  高承芳  李文杨  刘远  张晓佩  董晓宁 《家畜生态学报》2012,33(4):69-72

 为探讨绿汁发酵液、四蚁酸铵及绿汁发酵液+四蚁酸铵对“大力士”饲用甜高粱青贮品质的影响,以“大力士”饲用甜高粱全株为青贮原料,设对照、绿汁发酵液、四蚁酸铵和绿汁发酵液+四蚁酸铵4个处理,常温下贮存60 d后取样,测定其发酵品质与化学成分。结果显示：添加绿汁发酵液、四蚁酸铵及绿汁发酵液+四蚁酸铵,均可显著降低“大力士”饲用甜高粱青贮饲料的pH和气体损失率（P＜0.05）,提高干物质回收率、粗蛋白和水溶性碳水化合物含量（P＜0.05）。表明添加绿汁发酵液、四蚁酸铵及绿汁发酵液+四蚁酸铵均可显著改善“大力士”饲用甜高粱的青贮品质。  相似文献