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【Objective】 This study was intend to obtain cathepsin L1(rFgCat L1) specific monoclonal antibody and construct the double antibody sandwich ELISA.【Method】 Five BALB/c mice were immunized with 1 mg/mL rFgCat L1 protein for four times.Mouse splenocytes were isolated and fused with SP2/0 cells to construct hybridoma cells.Strong positive hybridoma cell lines were screened, 1×106 cells were injected intraperitoneally per mouse to prepare monoclonal antibodies.Antibody titer and antigenic epitope were detected using ELISA method, antibody subtype and specificity were identified using Western blotting method.The double antibody sandwich ELISA was constructed by combining the anti-rFgCat L1 polyclonal antibody, and its sensitivity and specificity were tested.The positive and negative critical value was screened by 20 negative sera with positive control, and the constructed double antibody sandwich ELISA was verified by 47 goat positive sera and 47 dairy cow positive sera.【Result】 After immunization, the antibody titers in serum of 4 mice were all more than 104.After isolated mouse with the highest immune response spleen cells were fused with SP2/0 cells total of 8 of them were positive cell lines were obtained after selective culture.5D5 and 7G6 were identified as strong positive strains with stable antibody secretion.After multiple subcloning screens and subcultures, the antibodies secreted in the cell supernatant were stable, with titers of 29 and 210 respectively, with ascites titers of 107 and 108.Western blotting and antibody subtype identification kits identified that the two antibodies were IgG1 type and the light chain was kappa type, both of which could specifically bind FgESP.According to the same antigen site was recognized by the two kinds of antibodies, the antigen titer of the two monoclonal antibodies were comparied, 7G6 was used as the coating antibody, and anti-rFgCat L1 was used as the enzyme-labeled secondary antibody.The optimized condition of method was that 7G6 was coated at a concentration of 2 μg/mL, the dilution concentration of anti-rFgCat L1 polyclonal antibody was 25 μg/mL, the dilution of Don-HRP-conjugated was 1∶4 000, 5% skimmed milk powder was selected as the blocking solution and the color development time was 25 min.The method was proved that could recognize the lowest antigen concentration of 0.625 μg/mL, also could specifically recognize antigen of Fasciola fasciatus.The constructed sandwich ELISA method was used for antigen detection of 47 dairy cow positive serum and 47 goat positive serum infective samples kept in the laboratory and the positive antigen rate were 72.3% and 78.7%, respectively.【Conclusion】 Anti-rFgCat L1 monoclonal antibody was successfully prepared and the double-sheet sandwich ELISA method for fascioliasis was constructed, which provided a good theoretical basis and material basis for the development of low-cost and rapid diagnostic kits.  相似文献   
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菜阳河自然保护区两栖爬行动物调查报告   总被引:3,自引:0,他引:3  
2 0 0 0年 5 6月对云南省思茅菜阳河省级自然保护区两栖爬行动物多样性进行了调查。调查结果表明 :菜阳河自然保护区共有两栖爬行动物 89种。其中 ,两栖类 39种 ,隶属于 2目 6科 18属 ;爬行类 5 0种 ,隶属于 3目17科 41属。属于国家Ⅰ级重点保护的种类有 2种 ;Ⅱ级重点保护的种类有 5种 ;云南省省级保护动物 3种 ;列入云南省“三有”动物的 10种。结合调查结果 ,对菜阳河自然保护区提出了进行功能区划 ,分区管理 ,以及严格管理农药的使用等两方面的建议。  相似文献   
75.
枫杨种源苗期生长及生物量地理变异研究   总被引:20,自引:5,他引:20       下载免费PDF全文
对采自15个省区的55个枫杨种源种子在浙江安吉进行苗期试验。参试种源表现出明显的苗期生长差异,苗高的极差达163%,地径极差达180%,生物量极差达194%。种源苗高生长表现出明显的南-北纬向及垂直变异趋势,枫杨南部分布区及低海拔种源的高生长一般优于北部分布区和高海拔地区的种源。枫杨在长江中下游亚区、江南丘陵及华南亚区、漓江-湘江-洞庭湖水系、贵川陕西部亚区、北部亚区内表现出各自的亚区变异模式。根据苗高、地径及总生物量等主要性状,构建综合选择指数函数I=0.1167X1(总干质量/g) 0.0750X2(苗高/cm)-0.1231X3(地径/cm),并评选出6个苗期生长优良的种源,即江西南部的信丰,贵州东北部的思南,陕西中部的汉中,湖南洞庭湖的益阳,重庆的涪陵以及福建东北部的福安种源。  相似文献   
76.
装饰单板贴面胶合板与杉木复合制造地板技术   总被引:2,自引:0,他引:2  
为了降低实木复合地板生产的材料消耗和成本,直接采用装饰单板贴面胶合板与杉木组合制造实木复合地板.结果表明,按改进工艺制造的复合地板不仅具有国标所要求的物理力学性能,而且可降低材料成本30%左右.  相似文献   
77.
Inhibins, as members of the transforming growth factor beta (TGF-β) superfamily, downregulate the synthesis and secretion of follicle-stimulating hormone (FSH) in an endocrine manner. The role of inhibin/betaglycan in the ovary regulation recently gained attention. To date, no data exist on the function of inhibin α subunit and betaglycan in cystic follicles. In this study, the expressions of inhibin α subunit and betaglycan in cystic follicles were investigated using immunohistochemistry, real-time PCR and Western blot analysis. Both inhibin α subunit and betaglycan immunoreactivities were mainly localized in the granulosa cells of follicles. Expression of inhibin α subunit and betaglycan was inferior in cystic follicles compared with that in normal large follicles. However, the result of enzyme-linked immunosorbent assay showed no significant difference in the decreasing in concentration of inhibin α subunit in cystic follicular fluid compared with the control (P>0.05). In this study, we explored the effects of FSH on betaglycan expression in granulosa cells in vitro. As expected, a significant increase in the expressions of betaglycan mRNA and protein in granulosa cells was observed in response to exogenous FSH (30 ng/ml) (P<0.05) compared with the control. Consequently, this study provides evidence that the expressions of inhibin α subunit and betaglycan are inferior in cystic follicles, and this may be caused by the decrease in FSH in the presence of a cystic follicle.  相似文献   
78.
为从无人机遥感影像中准确识别烟草,实现植株定位与计数,以雪茄烟草植株为研究对象,提出一种新的深度学习模型。区别于传统的利用检测框识别目标,本文模型利用少量的关键点学习烟草中心形态学特征,并采用轻量级的编、解码器从无人机遥感影像快速识别烟草并定位计数。首先,提出的模型针对烟草植物形态学特点,通过中心关键点标注的方法,使用高斯函数生成概率密度图,引入更多监督信息。其次,对比不同主干网络在模型中的效果,ResNet18作为主干网络时平均精度大于99.5%,精度和置信度都高于测试的其他主干网络。而MobileNetV2在CPU环境下达到运行效率最优,但平均置信度相对较低。使用损失函数Focal Loss与MSE Loss结合的Union Loss时,平均精度大于99.5%。最后,利用不同波段组合作为训练数据,对比结果发现使用红边波段更有助于模型快速收敛且能够很好地区分烟草和杂草。由于红边波段与植株冠层结构相关,使用红边、红、绿波段时平均精度达到99.6%。本文提出的深度学习模型能够准确地检测无人机遥感影像中的烟草,可为烟草的农情监测提供数据支持。  相似文献   
79.
【目的】探究咖啡酸苯乙酯(caffeic acid phenethyl ester,CAPE)通过AMPK/FOXO3a信号通路缓解氧化应激对猪精液的影响及其分子机制。【方法】选取8头成年(1—2岁)、健康状况良好长白种公猪进行鲜精采集,将质检合格的样品混池待用。试验设计如下:首先,在常温基础稀释液中分别添加0、0.02、0.04、0.06、0.08和0.10 g·L-1浓度的CAPE,将精液样品与各个浓度组依次混合后放置室温平衡,随即转入17 ℃电子恒温冰箱进行常温保存。全自动精子分析仪(CASA)测定1—5 d精子运动学参数(总活率与渐进性活力),筛选出最佳适宜浓度为0.06 g·L-1。其次,将0.06 g·L-1 CAPE与400 μmol·L-1的H2O2建立氧化胁迫模型,在第1、3、5天分别采用CASA测定精子总活率与渐进性活力,荧光探针技术评估质膜完整性与顶体完整性,抗氧化试剂盒检测过氧化氢酶(catalase,CAT)与超氧化物歧化酶(superoxide dismutase,SOD)活性,在第5 天利用实时荧光定量 PCR技术测定AMPK/FOXO3a信号通路下游靶向基因(AMPK、FOXO3a、SOD1、SOD2、CAT)及凋亡基因BAX的mRNA表达水平,蛋白免疫印记技术测定AMPK、p-AMPK蛋白表达。【结果】(1)浓度筛选试验中,0.06 g·L-1的CAPE在保存第3 天显著提高精子的总活率并维持至第5天(P<0.05),不仅如此,精子的渐进性活力在第1 天显著高于其他处理组(P<0.05)。(2)氧化胁迫试验中,H2O2处理组的精子质膜完整性、顶体完整性、总活率、渐进性活力、SOD与CAT活性在保存的第5天均极限显著低于空白组与CAPE+H2O2混合组(P<0.001),而空白组与CAPE+H2O2混合组的总活率、顶体完整性、CAT与SOD活性不存在显著差异(P>0.05)。与CAPE+H2O2混合组相比,H2O2处理组AMPK、FOXO3a、SOD1、SOD2、CAT的mRNA表达水平显著降低(P<0.05),BAX的表达水平显著升高(P<0.05),而空白组与CAPE+H2O2混合组的AMPK、SOD1、CAT与BAX不存在显著差异(P>0.05)。在蛋白表达水平中,CAPE+H2O2混合组与H2O2组相比,AMPK、p-AMPK 与p-AMPK/AMPK比率显著提升(P <0.05)。【结论】在常温基础稀释液中添加0.06 g·L-1CAPE可通过促进磷酸化AMPK的表达,诱导AMPK/FOXO3a信号下游抗氧化分子的转录,继而缓解H2O2介导的氧化危害对精液品质产生的影响,延长精液的保存时间,但CAPE保护精子氧化损伤更为深入的分子机制仍需作进一步探究。  相似文献   
80.
【目的】探讨不同中药复方对长江鲟幼鱼抗氧化和抗应激指标的影响,筛选能有效提高长江鲟幼鱼免疫力及抗病力的中药复方,为中药在长江鲟养殖生产中的推广应用提供参考依据。【方法】将17味中药按照中药配伍理论设计4种中药复方,分别是复方I(鱼腥草:金银花:大黄:茯苓:甘草︰黄芪=3:3:1:2:1:2)、复方II(板蓝根:大黄:五加皮:党参=3:3:4:3)、复方III(金银花:杏仁:贯众:大青叶:山豆根:桔梗=3:2:2:2:3:2)、复方IV(黄芪:黄柏:甘草:山楂:五味子:大黄:党参=3:3:1:2:2:2:2),以不添加中药为对照组,按0.5 g/kg的添加量进行长江鲟幼鱼饲喂试验,并于第7和第14 d采集血样测定各项血清生理指标。【结果】与对照组相比,复方I组和复方II组可不同程度地提高长江鲟血清超氧化物歧化酶(SOD)、过氧化氢酶(CAT)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)、过氧化物酶(POD)、碱性磷酸酶(AKP)活性及总抗氧化能力(T-AOC)、热休克蛋白70(HSP70)含量,降低丙二醛(MDA)含量,但仅部分指标差异达显著水平(P<0.05,下同);复方III组和复方IV组可明显提高长江鲟血清SOD、CAT、GSH-Px、POD、AKP活性及T-AOC,降低MDA和皮质醇(COR)含量,且大部分指标与对照组的差异达显著水平。相关分析结果表明,SOD活性与GSH-Px活性及T-AOC、POD活性与GSH-Px活性呈极显著正相关(P<0.01,下同),POD活性与SOD活性、CAT活性及T-AOC呈显著正相关,SOD活性与COR含量、T-AOC与COR含量呈极显著负相关,GSH-Px活性与COR含量、T-AOC与MDA含量呈显著负相关。【结论】在基础饲料中添加适宜的中药复方对长江鲟幼鱼抗氧化和抗应激能力有显著促进作用,尤其以复方III(金银花、杏仁、贯众、大青叶、山豆根、桔梗)和复方IV(黄芪、黄柏、甘草、山楂、五味子、大黄、党参)的效果最佳,可有效缓解长江鲟幼鱼机体面临的应激反应,达到保护效果。  相似文献   
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