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黑龙江垦区现有耕地200万hm2,其中水田面积近67万hm2,占耕地面积的1/3。黑龙江垦区建设100亿kg商品粮基地,水稻产量占有举足轻重的地位。为提高水稻单产,发挥水稻良种的增产作用,实现100亿kg商品粮基地建设的宏伟目标,近年垦区种子管理部门全面开展了水稻品种结构优化调整工作,取得了较为显著的效果。1调整的必要性黑龙江垦区自1985年开始推广旱育稀植插秧栽培新技术,水稻种植面积随之扩大,特别是gO年代中期水稻面积超常规发展。水稻面积的急骤增加,在生产中引发了一系列亟待解决的问题。以水稻品种为例,随着面积的急骤扩大,… 相似文献
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水稻PCR反应体系的正交设计优化及验证(英文) 总被引:3,自引:0,他引:3
[目的]筛选经济、稳定性好的水稻PCR反应体系,并检测所选体系在不同的基于PCR反应的分子标记中的通用性。[方法]以CTAB法提取的水稻叶片DNA为模板,应用L16(45)正交设计进行PCR反应体系优化。选用20μl体系的浓度梯度设计,对DNA模板浓度、dNTP、引物浓度、Taq酶、Mg2+浓度5个因素设计4个水平。先以1个SSR标记(MRG6102)对16个不同体系进行筛选。为了验证所选最优体系的稳定性,再选用6个SSR标记(RM213、RM207、RM208、RM155、OSM89、OSM91)对20个水稻品种(系)进行扩增;为检测除SSR标记以外的基于PCR反应标记的通用性,选用2个STS标记(OSR20、OSR32)及2个显性标记(Pibdom,Lys145)进行检测。[结果]16个不同处理组合均扩增出了清晰谱带,但扩增效果及PCR产量有差异。最经济、适用的体系为:20μl反应体系,20ng模板DNA,浓度150μmol/LdNTP,浓度0.2μmol/L引物,1.0UTaqDNA聚合酶,浓度1.5mmol/LMg2+,1×Taqbuffer,剩余体积用超纯水补齐。PCR扩增程序为:95℃预变性3min;94℃变性45s,48~55℃退火45s(不同的引物其最佳退火温度不同),72℃延伸1min(对于其他一些基于PCR反应的标记,如果预期片段较大,可以适当调整延伸时间到1.5min),共36个循环;72℃延伸7min;然后4℃保存。[结论]该研究确定了水稻PCR优化反应体系,该体系也适用于一些其他基于PCR反应的标记。 相似文献
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