茶尺蠖触角高丰度气味结合蛋白EoblOBP9、EoblOBP11的配基结合功能和模式差异研究     

严玉婷  吴帆  张亚丽  傅晓斌  崔宏春  韩宝瑜  李红亮 《茶叶科学》2021,41(5):643-653

茶尺蠖（Ectropis obliqua Prout）是茶园重要的鳞翅目害虫,雄雌成虫能通过嗅觉系统感受和分辨外界环境的化学信息以助于其交尾和产卵地选择等行为。在此过程中,成虫触角高丰度表达的气味结合蛋白（Odorant-binding proteins,OBPs）可能发挥了重要作用。以茶尺蠖成虫触角高丰度表达的两个OBPs即EoblOBP9和EoblOBP11为对象,首先发现二者cDNA编码蛋白均含有OBPs家族的典型特征,即含有6个保守的半胱氨酸,等电点预测分别为酸性和碱性,表明二者在一级结构性质上存在差异;利用原核表达技术获得重组蛋白,并免疫小鼠制备相应的多克隆抗体,再利Western blot技术验证了二者在雄性成虫触角特异表达;通过荧光竞争结合实验分别测试二者与20种候选配基的结合力,结果表明二者均与两个性信息素成分（顺3,9-环氧-6,7-十八碳二烯与顺-3,6,9-十八碳三烯）及一种植物挥发物成分（反-2-己烯醛）呈现较强的亲和力。与此同时,二者也显示出不同的配基结合谱,如EoblOBP9与1-戊烯-3-醇、苯甲醇、苯乙酮和苯甲醛亲和力较强,结合谱较宽;而EoblOBP11与α-萜品醇亲和力较强,结合更显专一,分子对接结果也支持该结论。此外,预测二者的活性位点均位于C端,也显示出二者配基结合的共性。研究结果表明,尽管这两个茶尺蠖OBPs均在成虫触角高丰度特异表达,但无论从结构性质上还是生化结合谱上,既有保守性又存在差异性,显示出茶尺蠖触角高丰度表达OBPs功能模式的丰富度和多样性,这为解释茶尺蠖嗅觉系统在面对复杂多变的外界环境的适应机制提供了理论依据。  相似文献   

茶园假眼小绿叶蝉及部分天敌对颜色的嗜好性选择     

崔宏春  周铁锋  敖存  毛宇骁  余继忠 《浙江农业科学》2016,1(6):879

摘要：昆虫对特定的色彩有明显的嗜好性选择,这是昆虫在长期的演化过程中形成的重要习性。文章利用市场上现有的10种颜色的色板,测试了假眼小绿叶蝉成虫及茶园天敌对不同颜色的嗜好性选择。结果表明,茶园叶蝉成虫对黄色具有明显的嗜好性,茶园天敌对深蓝色具有明显的引诱性。  相似文献   

茶尺蠖信息素结合蛋白PBP2的基因克隆、原核表达及其结合功能     

冯一璐  傅晓斌  吴帆  崔宏春  李红亮 《中国农业科学》2017,50(3):504-512

【目的】茶尺蠖(Ectropis obliqua)是中国茶区主要的鳞翅目害虫,其幼虫暴食性常给茶园带来巨大损失。鳞翅目昆虫雌雄个体间普遍存在着性信息素通讯环节,而茶尺蠖性信息素识别途径一直鲜有报道。论文旨在通过对茶尺蠖性信息素识别过程中的结合蛋白基因进行鉴定和功能研究,为茶尺蠖性信息素化学通讯和嗅觉信息识别传递机制提供理论依据。【方法】利用RT-PCR技术对从雄虫触角转录组数据中首次鉴定和发现的一个茶尺蠖信息素结合蛋白基因(pheromone-binding protein,PBP)2(EoblPBP2)进行全长cDNA序列克隆(Gen Bank登录号为KX421383)后,将该基因与pET32a载体连接构建表达载体。随后向导入pET32a/EoblPBP2表达质粒的大肠杆菌BL21(DE3)中对其表达载体加入终浓度1 mmol·L~(-1)的IPTG进行蛋白的诱导表达,进一步利用镍NTA琼脂糖凝胶柱和含有咪唑的上清缓冲液分离目的蛋白,以PBS缓冲液作为透析液纯化得到高浓度重组蛋白。最后通过荧光竞争法,利用N-苯基-1-萘胺(N-phenyl-1-naphthylamine,1-NPN)作为荧光报告子以放大荧光信号,随后向重组蛋白与1-NPN混合体系中分别加入(Z,Z,Z)-3,6,9-十八碳三烯以及10种测试气味后经过分子荧光光度计扫描得到相对荧光值,计算各配基的解离常数KD,研究重组蛋白与茶尺蠖性信息素和茶树挥发物的生理功能。【结果】EoblPBP2全长为492 bp,编码了163个氨基酸,蛋白相对分子质量为15.9kD,等电点为4.983,具有保守的6个半胱氨酸,根据分子进化树分析其应归属于昆虫PBPs家族。结合功能结果显示,10种测试气味均能将1-NPN与茶尺蠖EoblPBP2重组蛋白的混合体系于420 nm处的相对荧光值降至50%以下。其中β-紫罗兰酮、邻苯二甲酸二丁酯、苯乙醛、癸醛和反-2-癸烯醛等5种茶树挥发物质与EoblPBP2重组蛋白的结合能力较强,解离常数KD分别为7.923、14.830、30.368、28.068和27.597μmol·L~(-1)。而性信息素成分之一的(Z,Z,Z)-3,6,9-十八碳三烯与EoblPBP2的解离常数KD仅为172.591μmol·L~(-1),仅小于苯甲醇的解离常数KD 230.880μmol·L~(-1),而远远大于上述5种气味物质。表明EoblPBP2重组蛋白具有茶尺蠖性信息素成分((Z,Z,Z)-3,6,9-十八碳三烯)和植物挥发物质广谱结合能力,而其与性信息素的亲和力弱于大部分测试植物挥发物。【结论】EoblPBP2能与包括性信息素成分在内的多种植物挥发物结合,可能是一种具备特殊复合功能的信息素结合蛋白,可用之进一步研究茶尺蠖的性信息素识别和传递途径。  相似文献   

茶叶功能成分提取制备专题(八)茶色素的提取制备技术     

张建勇  江和源  崔宏春  尧渝 《中国茶叶》2009,31(9)

介绍了茶色素提取制备的主要方法、基本原理,以及新技术在茶色素提取制备中的应用,可为开发利用茶色素提供一定的科学理论依据。  相似文献   

儿茶素酰基化修饰研究进展   总被引：9，自引：2，他引：7  

刘晓辉  江和源  张建勇  袁新跃  崔宏春 《茶叶科学》2009,29(1)

儿茶素因其独特和广泛的生物活性引起了研究者和公众的极大关注,但由于其脂溶性差、体内不稳定和生物利用度低等使其应用受到了限制。本文就提高其应用特性的酰基化修饰及修饰后的生理活性研究进展进行了综述,并对其发展作了展望。  相似文献   

茶色素的提取制备技术     

张建勇  江和源  崔宏春  尧渝 《中国茶叶》2009,(9):8-10

介绍了茶色素提取制备的主要方法、基本原理,以及新技术在茶色素提取制备中的应用,可为开发利用茶色素提供一定的科学理论依据。  相似文献   

冷泡工夫红茶关键加工工艺技术的比较研究     

师大亮  崔宏春  敖存  赵芸  余继忠  黄伟红 《茶叶》2023,(2):80-85

通过对不同品种、不同冷冻时间、不同干燥提香方式加工的冷泡工夫红茶茶样的感官评审及水浸出物含量的比较分析。结果表明,经48h冷冻工艺技术处理后的茶样叶底色泽红亮,发酵均匀,且水浸出物含量较对照提高10%-20%;三种不同干燥提香方式的比较结果表明炭焙提香工艺最优,表明采用冷冻48h处理结合炭焙提香的加工工艺技术生产的冷泡红茶品质最佳,该工艺生产冷泡红茶具有示范推广的可行性,尤其是原料较为粗大的品种采用冷泡红茶工艺技术所制干茶品质提升效果更为显著。  相似文献   

6种生物农药对茶尺蠖的室内生物活性及田间防效     

李红莉  毛宇骁  黄海涛  郑旭霞  崔宏春  赵芸  余继忠 《浙江农业科学》2021,62(12):2470-2472

为了筛选出对茶尺蠖具有较好防治效果的生物农药。采用浸叶法测定了6种生物农药对茶尺蠖的室内生物活性,对室内防效较好的2种药剂各2个浓度进行了田间药效试验。结果发现,室内生物活性测定结果表明,100亿孢子·mL^-1短稳杆菌悬浮剂和0.6%苦参碱水剂对茶尺蠖3龄幼虫生物活性显著高于其他药剂,药后7 d,两者的校正防效均为100%。田间防效试验结果表明,100亿孢子·mL^-1短稳杆菌悬浮剂和0.6%苦参碱水剂对茶尺蠖都具有较好的防效,药后 1 d的校正防效均在88%以上,表现出较强的速效性,2种药剂所试的2种剂量对茶尺蠖的校正防效无显著差异。因此,100亿孢子·mL^-1短稳杆菌悬浮剂和0.6%苦参碱水剂对茶尺蠖具有较好的防治效果,可用于该虫的防治。  相似文献   

昆虫信息化合物在茶园害虫防治中的应用进展     

崔宏春  周铁锋  郑旭霞  毛宇骁  敖存  黄海涛  余继忠 《安徽农业科学》2015,(13):108-110

综述了昆虫信息化合物的概念及种类、昆虫信息化合物在茶园病虫害防治中的作用、茶园常用昆虫信息化合物等相关研究进展,并展望了昆虫信息化合物今后的研究方向.  相似文献   

茶叶功能成分提取制备专题（五） 茶多糖的提取制备技术   总被引：1，自引：0，他引：1  

崔宏春  江和源  张建勇  江用文 《中国茶叶》2009,31(5):12-15

主要介绍了茶多糖的制备技术,包括提取技术和分离纯化方法,并对多种制备技术进行了分析。茶多糖提取与分离纯化方法的搭配组合还需优化,绿色环保与低耗能、低成本是茶多糖制备技术的未来发展趋势。  相似文献