辣椒SRAP-PCR反应体系的建立与优化   总被引：103，自引：8，他引：95  

任羽  王得元  张银东  李颖  王恒明 《分子植物育种》2004,2(5):689-693

SRAP标记(Sequence-related amplified polymorphism,序列相关扩增多态性)是由Li和Quiros发展了一种新的分子标记技术。SRAP标记具有简便、稳定、中等产率、在基因组中分布均匀的特点,已经应用于在水稻、棉花、油菜、马铃薯、苹果、柑橘类果树、樱桃、梅子、大蒜、莴苣及芹菜等植物和水稻稻瘟病的研究中,对开展遗传图谱构建、基因定位与克隆、比较基因组学、cDNA指纹图谱、生物多样性研究、预测杂种优势等研究是一个十分实用的工具。本研究对辣椒SRAP反应体系的程序、模板、Mg^2 等参数进行优化研究,结果表明：辣椒的PCR程序为94℃预变性5min,94℃变性1min,35℃复性1min,72℃延伸1min,5循环,94℃变性1min,50℃复性1min,72℃延伸1min,35循环,最后72℃延伸10min;25μl反应体系中,模板量为15ng,M矿为2．0mmol／L。本研究建立的辣椒SRAP体系重复性好、稳定性强。  相似文献   

香蕉叶片低温胁迫下差异表达cDNA消减文库的构建     

祁君凤  冯仁军  程萍  袁克华  张丽丽  张银东 《热带生物学报》2010,1(2):110-113

为了解析香蕉寒害的分子机理,应用抑制性消减杂交技术(suppression subtractivehy bridization,SSH)成功构建了香蕉叶片在低温胁迫下与未处理的差异表达的cDNA消减文库,并通过经蓝、白斑筛选,克隆测序及序列分析,以及应用半定量PCR技术对随机选取的No.28基因片段进行表达分析等方法,初步分析了实验所构建的cDNA消减文库。结果表明,实验所构建的cDNA消减文库为低温胁迫特异表达的cDNA消减文库;测序及序列分析的结果暗示可能有相当多的未知功能基因参与了香蕉抗寒的过程;随机选取的No.28的表达分析检测结果证实,通过对构建的cDNA消减文库的全面分析,有可能获得一批低温胁迫诱导特异表达的新基因,尤其对其功能的深入了解,将为全面解析香蕉寒害的分子机理、寒害过程中的信号转导打下理论基础。  相似文献   

RNA干扰的研究进展   总被引：2，自引：0，他引：2  

袁克华  冯仁军  程萍  张银东 《安徽农业科学》2009,37(8):3471-3473

RNA干扰（RNAi）是一种由双链RNA诱发的转录后水平的基因沉默现象,是近几年发展起来的基因表达调节新机制,广泛地存在于真菌、植物和动物中。主要介绍了RNAi的发现、分子机制、转基因载体构建策略以及RNAi在生命科学中广阔的应用前景。  相似文献   

橡胶树遗传多样性RAPD分析技术各参数选定的研究     

张银东  彭存智 《热带作物研究》1997,(4):20-24

用两种不同的方法提取橡胶叶片总ＤＮＡ，结果表明：以ＳＤＳ法提取的ＤＮＡ更能满足对橡胶树进行大量ＲＡＰＤ分析的要求，其ＰＣＲ扩增产物稳定，分别以不同的复性温度、变性和复性时间、循环数、ＤＮＡ模板量和不同的Ｔａｇ酶量进行比较实验，结果表明：以９４℃变性１ｍｉｎ和３６℃复性１ｍｉｎ、７２℃延伸２ｍｉｎ，ＤＮＡ模板量为２５￣１００ｎｇ，Ｔａｇ酶量为１￣１．５Ｕ，共进行４５个循环为最适的ＰＣＲ参数，能够得到  相似文献   

几丁质酶和抗菌肽D双价基因转化茄子的研究   总被引：8，自引：0，他引：8  

邹克琴  张银东  王金宇  吴代飞  曾宪松 《热带作物学报》2001,22(2):57-61

在建立茄子的组织培养及遗传转化体系的基础上，以根癌农杆菌为介导，采用叶盘法将几丁质酶和抗菌肽D双价基因转入茄子，分别获得6株Kan^R植株。对Kan^R植株进行点杂交、PCR扩增等分子检测。结果表明，目的基因已整合进茄子核基因组中。  相似文献   

木薯MeSAP13基因的克隆及其抗细菌性枯萎病功能鉴定          下载免费PDF全文

张子奇  李可  陈银华  张银东  张肖飞  耿梦婷 《热带作物学报》2022,43(10):1981-1988

胁迫相关蛋白（stress-associated proteins, SAPs）在植物对胁迫应答和胁迫调控中起重要作用。木薯是我国重要的粮食作物和经济作物,细菌性枯萎病（cassava bacterial blight, CBB）已严重危害我国木薯产业的健康发展。为了探讨木薯MeSAP基因在抗细菌性枯萎病中的作用,本研究克隆了我国主栽木薯品种‘华南8号’（SC8）的MeSAP13基因,分析该基因在细菌性枯萎病病原菌侵染时的表达模式及其编码蛋白的基本特性。利用基于木薯花叶病毒介导的基因沉默（virus induced gene silencing, VIGS）技术抑制了MeSAP13基因在木薯SC8叶片中的表达,通过接种细菌性枯萎病病原菌XpmHN11对MeSAP13的抗病功能进行抗性鉴定。结果发现：在病原菌XpmHN11侵染叶片3 d后MeSAP13基因表达量显著上调,说明木薯MeSAP13基因能够响应病原菌的侵染;在VIGS载体转化木薯叶片40 d后发现,与转化pCsCMV-A载体的对照叶片相比,MeSAP13在转化pCsCMV-MeSAP13叶片中的表达量显著下调了40%~60%,表明通过VIGS技术成功抑制了MeSAP13在木薯叶片中的表达。将病原菌XpmHN11接种至MeSAP13基因沉默叶片和对照植株叶片,发现MeSAP13基因沉默植株接种叶片的水渍状病斑面积显著大于对照植株接种叶片。分析侵染后0、3、6 d病原菌XpmHN11的繁殖情况发现,在侵染后3 d和6 d的MeSAP13基因沉默植株接种叶片中,其病原菌数量显著高于对照植株接种叶片。以上研究结果表明,抑制MeSAP13基因的表达,降低了木薯对细菌性枯萎病的抗性。  相似文献