花花柴KcPIP2;1基因的克隆及表达分析     

刘陈  李辉亮  郭冬  王敏杰  彭世清 《热带作物学报》2012,33(1):89-93

根据一个从差减杂交文库中获得的EST序列设计引物,采用3′RACE技术从花花柴（Karelinia caspia）中克隆了编码质膜内在蛋白的基因PIP2;1,命名为KcPIP2;1,并运用定量PCR技术对KcPIP2;1的表达模式进行分析。研究结果表明,KcPIP2;1基因全长1 095 bp,包含855 bp的开放阅读框,编码284个氨基酸。Blast分析显示,KcPIP2;1与甜叶菊、毛果杨、胡桃、橡胶树和蓖麻的水通道蛋白的同源性分别为88％、87％、87％、86％和86％。多序列比对及进化树分析表明,KcPIP2;1属于PIP2亚家族。表达分析结果显示;KcPIP2;1在叶组织中的表达量最高;在NaCl胁迫下,2 h内KcPIP2;1的表达量上调至最高水平,之后逐渐降低,约48 h后又升至较高水平。这些结果表明,KcPIP2;1可能与花花柴耐盐机制相关。  相似文献   

巴西橡胶树HbMADS4的克隆及原核表达分析     

魏利然  李辉亮  郭冬  杨子平  彭世清 《热带作物学报》2015,36(5):888-894

为了探讨巴西橡胶树自根幼态无性系高产的分子机制,通过抑制缩减杂交获得了在巴西橡胶树自根幼态无性系和老态无性系胶乳中差异表达的基因片段。为进一步鉴定差异表达基因的功能,对相关基因进行克隆。通过RACE方法克隆一个新的橡胶树MADS-box转录因子基因（命名为HbMADS4）, HbMADS4全长984 bp,含有633 bp的阅读框,编码230个氨基酸。推测HbMADS4蛋白分子量为23.71 ku,等电点为7.61,在N端含有典型的MADS-box结构域。构建HbMADS4原核表达载体pHbMADS4,将其转化E. coli, 经优化条件后,在20 ℃,0.1 mmol/L IPTG诱导4 h的条件下,获得HbMADS4融合蛋白。HbMADS4的克隆和HbMADS4融合蛋白的获得为深入研究HbMADS4的功能奠定基础。  相似文献   

巴西橡胶树4－羟基－3－甲基－2-（E）－丁烯基－4－磷酸还原酶基因（Hb—HDR）的克隆及表达分析     

李辉亮  雷美玉  彭世清 《广西农业生物科学》2009,(1):15-21

4-羟基-3-甲基-2-（E）-丁烯基-4-磷酸还原酶（4-hydroxy-3-methyl-2-（E）-butenyl-4-diphosphate reductase,HDR）是异戊烯基焦磷酸合成途径之一甲基赤藓糖磷酸（methylerythritol phosphate,MEP）途径中的最后一个酶,催化4-羟基-3-甲基-（2E）-丁烯基-4-磷酸生成异戊烯基焦磷酸。根据植物HDR的同源序列设计引物,通过RT-PCR结合RACE的方法在橡胶树中获得了与其相应的HDR基因,命名为HbHDR。序列分析表明HbHDR长1627bp,编码462个氨基酸,属于LYTB家族,该氨基酸序列与烟草、长春花、胡黄连、拟南芥、银杏和火炬松的HDR同源性为79．1％、78．4％、76．5％、75．3％、72．2％和70．9％。半定量RT-PCR结果显示,乙烯诱导胶乳HbHDR的表达。  相似文献   

植物原生质体分离及其瞬时转化的应用     

马超越  彭世清  郭冬  朱家红  王颖 《热带生物学报》2024,(2):241-250

原生质体已被广泛应用于亚细胞定位、基因表达分析、蛋白-蛋白互作、基因编辑等方面。笔者总结了酶解法分离植物原生质体的影响因素,电穿孔和PEG介导的方法对原生质体瞬时转化效率的影响和瞬时转化的应用。植物的种类、不同的PEG浓度、转染时间、DNA浓度和原生质体数量都会影响PEG介导法对原生质体瞬时转化效率。电穿孔法必须在脉冲电压、脉冲长度、脉冲数、细胞数、DNA浓度都适宜的条件下才能达到最佳转化效率。本文为更多植物原生质体分离体系和瞬时转化体系的建立提供参考。  相似文献   

湖南旱地土壤铝的化学结合形态垂直分布及其发生学特征     

彭世清  欧阳宁相  张杨珠  盛浩  周清 《湖南农业大学学报(自然科学版)》2020,46(6):723-732

选取湖南省不同地区第四纪红色黏土、石灰岩风化物、紫色页岩风化物、花岗岩风化物等4种母质发育的12个典型土壤剖面的分层土样进行分析,探究土壤铝的化学结合形态在不同的土壤剖面、不同母质、各特征土层和不同土壤类型间的分布,及其与各土壤基本理化性质的相关关系。结果表明：供试土壤中,交换态铝(Ex–Al)、吸附态无机羟基铝(Hy–Al)、有机配合态铝(Or–Al)、氧化铁结合态铝(DCB–Al)、层间铝(In–Al)、非晶态铝硅酸盐及三水铝石(Nc–Al)、矿物态铝(Min–Al)、全铝(Alt)质量分数在表土层分别为(0.31±0.24)、(1.57±0.80)、(7.24±4.77)、(2.47±1.72)、(5.10±2.85)、(18.91±7.91)、(126.78±18.49)、(162.37±24.86) g/kg,在表下层分别为(0.26±0.18)、(1.24±0.89)、(4.17±3.09)、(3.24±2.69)、(6.09±2.97)、(23.81±10.68)、(122.13±40.12)、(160.91±51.39) g/kg,在母质层分别为(0.16±0.16)、(1.09±0.92)、(2.93±2.46)、(2.61±2.67)、(5.49±3.12)、(21.81±9.94)、(137.44±27.01)、(171.53±32.79) g/kg;在土壤剖面上,Ex–Al、Hy–Al和Or–Al质量分数随土层深度的增加逐渐降低,而DCB–Al、In–Al、Nc–Al质量分数则先增加后减小;在4类母质中,表土层中的Ex–Al质量分数在第四纪红土发育土壤中的最高,表下层和母质层中的Ex–Al质量分数在花岗岩风化物发育土壤中的最高,Hy–Al和In–Al质量分数在花岗岩风化物发育的土壤中最高,Or–Al和DCB–Al质量分数在石灰岩风化物发育的土壤中最高,表土层和表下层中的Nc–Al质量分数在石灰岩风化物发育土壤中的最高,而母质层中的Nc–Al则在花岗岩风化物发育土壤中的最高;在6种特征土层中,Ex–Al、DCB–Al、In–Al和Nc–Al质量分数在低活性富铁层中最高,而Hy–Al和Or–Al质量分数则在腐殖质表层中最高;在4种土壤类型中,富铁土中的Ex–Al、DCB–Al、In–Al和Nc–Al质量分数最高,新成土中的Hy–Al和Or–Al质量分数最高;影响土壤中铝的化学结合形态和分布的因素主要有pH、有机质、CEC、游离铁、全铝和黏粒等。  相似文献   

白木香查尔酮合成酶基因(AsCHS1)启动子克隆及激素应答元件功能的初步鉴定     

曹天骏  戴好富  李辉亮  郭冬  梅文莉  彭世清 《热带作物学报》2014,35(10):1950-1956

利用染色体步移法克隆了白木香查尔酮合成酶基因(As CHS1)ATG上游1 082 bp的启动子序列,该启动子序列中AT含量高达69.03%,符合真核生物启动子的序列特征。通过启动子预测软件分析可知,该序列的转录起始位点位于翻译起始位点-65 bp处,并且其上游-25~30 bp区域存在TATA-box等典型的真核生物启动子核心元件,同时含有一些顺式作用元件如赤霉素应答元件GARE-motif、茉莉酸甲酯应答元件CGTCA-motif、水杨酸应答元件TCA-element等激素调控元件,光应答元件BoxⅠ、G-Box、ACE,厌氧诱导元件ARE等。通过构建p C-1 082pro As CHS1植物表达载体,借助农杆菌将重组载体转化到烟草叶片中。蛋白定量结果表明,该序列可以驱动GUS的表达,具有启动子活性;脱落酸显著增强该启动子的活性,乙烯则显著抑制该启动子的活性。  相似文献   

巴西橡胶树Polyubiquitin基因5''调控序列的克隆及分析     

彭世清  陈守才 《农业生物技术学报》2002,10(1):56-59

利用GenomeWalker的方法获得了巴西橡胶树Polyubiquitin基因的5'调控序列，序列分析表明，在第一个Ubiquitin的起始密码子前含有1个内含子，内含子含有1175bp,A T含量为71.1%，另外存在TATAbox，CAATmotif,Gbox,HSE以及TCA-like等一些调控元件和1个约含230bp的A T含量丰富（90%）的区域。  相似文献   

在烟草中表达拟南芥GAI基因获得矮化的烟草植株   总被引：2，自引：0，他引：2  

彭世清  陈守才 《农业生物技术学报》2005,13(3):388-389

赤霉素（GA）能控制植物茎的伸长，从而决定植物的高度（Schomburg et al．，2003）。一些植物的矮化突变体是由于体内GA缺陷、GA不敏感引起的（Ross et al.，1997）。因此，改变植物体内GA的浓度和对GA的敏感性都可能改变植物的高度，获得矮化植株。GAI是一个在拟南芥中发现的GA应答的负调控因子，过量表达引起植株矮化（Peng et al．,1997．Fu et al．，2001）。本研究克隆了拟南芥GAI基因，在烟草中表达获得了矮化的烟草植株。  相似文献   

植物激素应答元件研究进展   总被引：1，自引：0，他引：1  

李辉亮  彭世清  戴好富 《热带作物学报》2015,36(1):211-218

植物激素在植物生长发育的过程中发挥了重要作用,对激素应答元件的研究将有助于对植物激素作用机制的研究。对常用植物激素生长素、赤霉素、脱落酸、乙烯、水杨酸和茉莉酸的应答元件研究进行了全面的综述,可为植物激素基因表达调控方面的研究提供有益的资料。  相似文献   

巴西橡胶树HbMCS1基因的克隆及表达分析   总被引：1，自引：0，他引：1  

雷美玉  李辉亮  彭世清 《农业生物技术学报》2009,17(3):482-487

2C-甲基-D-赤藓糖醇-2,4-环化磷酸合成酶（2C-methyl-D-erythritol 2,4-cyclodiphosphate synthase,MCS）是异戊烯基焦磷酸合成途径之一——甲基赤藓糖磷酸（methylerythritol phosphate,MEP）途径中的第五个酶,催化2-磷酸-4- (胞苷-5’-二磷酸)- 2-C-甲基-D-赤藓糖醇生成2-C-甲基-D-赤藓糖醇-2-4-环化磷酸。根据植物MCS的同源序列设计引物,通过RT-PCR结合RACE的方法在橡胶树中获得了与其相应的MCS基因,命名为HbMCS1。序列分析表明HbMCS1长965bp,编码241个氨基酸,该氨基酸序列与长春花、拟南芥、水稻、银杏和三尖杉的MCS同源性分别达到70.8%、69.4%、64.9%和63.3%和62.2%。半定量RT-PCR结果显示,伤害诱导胶乳HbMCS1的表达,乙烯对HbMCS1的表达几乎没有影响;HbMCS1的表达具有组织差异性,在愈伤组织中大量表达,在叶片和胶乳中微量表达。HbMCS1的克隆和表达分析为了解MEP途径在橡胶树胶乳中的作用和对天然橡胶生物合成的调控作用打下了基础。  相似文献