二氧化硅纳米基因载体的制备与性能研究     

付玉芹  李鲁华  王丕武  吕长利  付永平  王云鹏 《吉林农业大学学报》2010,32(5):509-512

通过溶胶—凝胶化学方法成功地制备了一种约为500nm的SiO2纳米粒子,并以多聚赖氨酸(PLL)对其进行表面修饰,修饰后的纳米粒子能够有效地与DNA结合,同时可以控制DNA的结合数量,而且能够保护DNA免受DNaseⅠ的降解作用。此二氧化硅纳米基因载体有望代替金粒子通过基因枪转化法实现外源基因在植物细胞中的遗传转化。  相似文献   

大豆查尔酮异构酶基因的克隆及粟酒裂殖酵母表达载体的构建     

张卓  王丕武  付永平  刘洪禹 《河南农业科学》2010,(11)

利用RT-PCR克隆Ⅱ型大豆查尔酮异构酶基因(CHI1A),然后将目的片段与克隆载体pMD18-T质粒相连接,检测后将目的基因重组于粟酒裂殖酵母表达载体pESP-2的MCS序列之中,使用电击法将重组质粒转化进入粟酒裂殖酵母中,用PCR和双酶切的方法来检测试验结果,表明获得了CHI1A完整开放阅读框(670bp),与已报道序列(NO:AY595413)的同源性达到99%。PCR和酶切鉴定表明,CHI1A已导入到酵母表达载体中。查尔酮异构酶基因的克隆、粟酒裂殖酵母表达载体的构建,为该基因的应用提供了依据。有望利用基因工程技术将该基因重组于酵母基因组中并表达目的蛋白,以此来催化合成黄酮和异黄酮类化合物。  相似文献   

糙皮侧耳漆酶基因的克隆及在粟酒裂殖酵母中的表达     

石振飞  代力强  付永平  王丕武  张卓  魏洪波  刘强  马建 《食用菌学报》2013,(1):13-17

利用RT-PCR技术,从糙皮侧耳(Pleurotus ostreatus)总RNA中克隆漆酶基因(Lac),再通过NheⅠ酶切位点与粟酒裂殖酵母(Schizosaccharomyces pombe)表达载体pESP-2连接,构建酵母真核表达载体,利用电转化方法转化粟酒裂殖酵母SP-Q01细胞,并在SP-Q01中进行表达分析,最后用愈创木酚法测定表达产物的酶学活性。漆酶基因在构建的表达载体重组SP-Q01细胞中得到表达,酶学活性达到89.37 U/L。  相似文献   

大豆CML38-like基因的克隆及表达载体构建     

周靖萱  金羽琨  冀采风  郭轩麟  张靓  邵瑞超  王淇  王丕武 《分子植物育种》2021,19(4):1136-1142

类钙调蛋白(CaM-likeprotein,CML)在植物抵抗逆境中发挥了重要的作用,因此研究CML基因是植物抗逆分子育种的一个重要分子基础。本实验室在前期工作中筛选得到1个片段大小为264 bp的大豆CML基因,对该基因序列设计特异性引物,利用PCR技术对该基因进行扩增,并获得大小为264 bp的片段,利用无缝克隆技术连接到pMD18T载体上,获得克隆载体。通过对该基因的核苷酸序列分析,在NCBI上发现该基因序列与大豆Calcium-binding protein(CML38-like)基因序列相似度为98.53%。目前对CML38-like基因的功能还未见报道,本研究根据克隆测序得到的基因序列构建系统进化树并分析,随后对该基因的蛋白质二级结构和蛋白质三级结构进行预测,发现该基因可能对大豆抗旱有着一定的影响。最后通过克隆载体构建CML38-like基因的过表达载体以及RNA干扰表达载体。本研究为鉴定大豆CML38-like基因的功能和了解该基因对大豆的非生物胁迫反应的影响提供了理论依据。  相似文献   

微量法提取高质量小麦DNA供大规模PCR分析   总被引：5，自引：0，他引：5  

张志清  郑有良  王丕武  魏育明  颜泽洪  刘虹 《西北农业学报》2005,14(6):83-86

介绍了一种在提取小麦DNA实验中常用的CTAB提取方法基础上改良的微量DNA提取方法.通过提取多个材料的DNA并经分光光度计检测,琼脂糖电泳结果表明,这种方法提取的DNAOD260/280在2.00～1.8间波动,较常规大量法提取DNA的质量高,能满足100～200余次的PCR反应的需要.采用该法对提取的普通小麦DNA以及转抗除草剂基因Bar的转基因植株DNA分别进行SSR标记检测和PCR扩增,结果表明SSR标记扩增效果与大量法无明显的差异,抗性植株DNA能扩增出Bar基因的特征带.  相似文献   

麝香百合组培快繁技术初步研究   总被引：13，自引：0，他引：13  

张君  武丽敏  王雷  王丕武 《吉林农业大学学报》2002,24(1):53-54,81

采用随机区组试验方法，以MS为基本培养基，对百合叶片进行了不同浓度的NAA和6－BA处理试验，探讨生长激素对百合成苗和增殖的作用，结果表明，以NAA0．1mg/L处理的成苗率和结鳞率最高，小苗长势最好；以6－BA2．0mg/L NAA0.2mg/L处理的增殖系数最高。  相似文献   

大豆凝集素和脂肪氧化酶双价RNAi表达载体的构建及其遗传转化     

张学明  宋阳  王丕武 《西北农林科技大学学报(自然科学版)》2015,43(7):82-88

【目的】应用RNA干扰技术,同时抑制大豆凝集素(Soybean agglutinin,SBA)和脂肪氧化酶(Lipoxygenase,Lox)基因在种子中的表达,改良大豆营养品质,为培育优质大豆材料奠定基础。【方法】根据RNAi原理,酶切获得Lox目的片段,构建以除草剂Bar基因为筛选标记、种子特异性启动子P7αP启动SBA和Lox双干扰的pCAMBIA3301-SBA-Lox(pSBA-Lox)干扰表达载体,并通过农杆菌介导法转化大豆(品种为吉农28),采用PCR、Southern杂交和实时荧光定量PCR对转基因植株进行检测。【结果】质粒PCR和酶切鉴定结果表明,双价RNAi植物表达载体pSBA-Lox构建成功。将其转入到大豆中,对转化植株进行PCR、Southern杂交检测,结果显示,外源基因以单拷贝形式整合到植物基因组中,并能遗传给后代。T1代转基因植株的实时荧光定量PCR分析显示,转基因植株中SBA基因和Lox基因在籽粒中的表达量比未转化受体植株均明显降低,SBA基因表达量降低了35.9%~47.2%,Lox基因表达量降低了32.8%~56.1%,而在幼嫩叶片中的表达量相比对照植株变化不大。【结论】获得了大豆凝集素和脂肪氧化酶表达量均明显降低的T1代转基因大豆。  相似文献   

大豆查尔酮还原酶3基因（chr3）的克隆及体外催化活性分析     

张超  王丕武  张卓 《西北农林科技大学学报(自然科学版)》2015,43(9):89-96

【目的】克隆大豆查尔酮还原酶3基因(chr3),并分析其编码蛋白体外催化活性,为研究大豆苷元的合成与调控研究提供参考。【方法】以大豆品种"吉农17"为材料,采用RACE技术扩增大豆chr3基因,对其编码蛋白的结构和功能位点进行分析。将目的基因chr3连接到大肠杆菌载体pET28a上,然后转化到大肠杆菌BL21中,构建重组大肠杆菌原核表达载体BL21-pET28a-chr3,并通过高效液相色谱技术(HPLC)验证重组蛋白的催化性质及效率。【结果】成功克隆chr3基因,其全长序列长1 416bp(GenBank登录号:KF927169),成功构建了大肠杆菌原核表达载体BL21-pET28a-chr3。HPLC检测结果表明,重组蛋白CHR3催化合成了异甘草素,使大豆异甘草素含量提高到了33.673μmol/g。【结论】分离鉴定了大豆chr3,其编码蛋白CHR3催化活性明显提高。  相似文献   

高产优质玉米新品种"吉玉301"选育报告   总被引：3，自引：2，他引：1  

马义勇  关淑艳  王丕武  吴井红  姚丹  刘思言 《吉林农业大学学报》2008,30(6)

玉米新品种“吉玉301”是以自选系“GS01”为母本、外引系“吉853”为父本杂交育成的玉米单交种。2年区域试验平均产量为10022．0kg／hm2,比对照“四单19”增产12．5％;生产试验平均产量为10123．2kg／hm2,比“四单19”增产11．8％。该品种于2007年1月通过吉林省农作物品种审定委员会审定,其主要特点是稳产、高产、抗病、抗旱,品质好,适于吉林省长春、吉林、通化、白城等地区及黑龙江省部分地区种植。  相似文献   

酸性蛋白酶pepB基因植物表达载体的构建及在玉米中的转化   总被引：1，自引：0，他引：1  

王巍  王丕武  王俊玲  付永平  兰磊  杨金慧 《玉米科学》2009,17(4)

以黑曲霉基因组DNA为模板,利用聚合酶链式反应(PCR)技术扩增了酸性蛋白酶pepB基因序列,并将其克隆到pMD18-T Vector上,对重组子进行了PCR检测和限制性内切酶分析并测序.DNA序列分析表明:克隆片段长为1340bp,与已发表的pepB基因序列同源性达99.85%.将pepB基因片段插入到带有耐盐基因的表达载体pCAMBIA1301-BADH上,构建了无抗生素选择标记的重组质粒pB-pepB-35S,从而得到了植物表达载体,该载体利用耐盐基因BADH替代抗生素基因作为筛选标记.通过花粉管通道法将其导入玉米自交系,获得了转基因植株,并得到了转化植株的种子.  相似文献