生防细菌A57的鉴定及拮抗蛋白理化性质的研究     

陈莉  段永照  刘歆  缪卫国  努尔孜亚  刘海洋 《新疆农业大学学报》2010,33(6):475-478

通过培养形态、生理生化特征以及16S rDNA的分子序列同源性分析,16S rDNA测序结果在GenBank数据库进行同源性比较,确定A57为短芽孢杆菌(Brevibacillus sp.)。采用不同浓度硫酸铵沉淀法提取拮抗蛋白。以枯萎病菌作指示菌,A57在70%的硫酸铵饱和度下拮抗蛋白的拮抗活性最大,抑制率为23.7%。对A57拮抗蛋白理化性质研究,结果表明该拮抗蛋白对热均稳定,对氯仿均不敏感,对胰蛋白酶敏感;A57拮抗活性最佳pH值为5～7,强酸(pH3)和强碱(pH9)条件下仍具有部分的拮抗活性。  相似文献   

疏水表面诱导橡胶树炭疽菌侵染结构的发育分化过程     

林春花  牟保辉  刘文波  缪卫国  郑服丛 《植物保护学报》2018,45(3):470-477

为了解橡胶树2种炭疽病菌的侵染结构发育分化过程,采用平板菌落生长速率法测定了3株胶孢炭疽菌Colletotrichum gloeosporioides和3株尖孢炭疽菌C.acutatum的菌丝生长速率,测量其分生孢子大小,显微观察2种炭疽菌在疏水表面诱导下侵染结构的发育分化过程。结果表明,胶孢炭疽菌菌丝生长速率为0.96~1.36 cm/d,显著高于尖孢炭疽菌的菌丝生长速率0.72~0.89 cm/d,但二者分生孢子大小无显著差异。在疏水表面诱导下,2种炭疽菌分生孢子在接种2~6 h后开始萌发,12 h孢子萌发率为71.70%~88.05%,13~16 h开始分化附着胞,24 h附着胞形成率为48.99%~70.74%,36 h菌丝诱发形成大量附着枝,48 h后分生孢子产生的次生菌丝也可诱发形成附着枝,附着枝呈圆形、姜瓣形、梨形或不规则形。分生孢子极易产生,可在菌丝顶端成簇或菌丝侧面排列产生,也可由分生孢子形成的芽管产生,或在芽管分化附着胞过程分枝形成分生孢子;附着胞多着生于芽管顶端,少数附着胞顶端可继续萌发类似短芽管结构,再次分化形成可黑色化的次级附着胞。表明橡胶树2种炭疽菌不同菌株间分生孢子萌发时间、孢子萌发率、附着胞形成时间和形成率有一定差异,但种间无明显差异;橡胶树炭疽菌分生孢子极易形成,在疏水表面容易分化形成附着胞和附着枝,说明具有极强的适生性。  相似文献   

转hpa1Xoo基因棉花活性氧产生及防卫相关基因的表达     

缪卫国  宋从凤  乔子辰  王金生 《南京农业大学学报》2011,34(2)

采用H2O2和酶活性检测、DAB染色、定量实时PCR等方法研究转hpalXoo基因棉花T-34叶组织中的活性氧.结果显示:无病原菌侵染时,T-34和出发品种Z35均未产生活性氧.在接种黄萎病菌分生孢子悬浮液后,与Z35相比,在T-34叶组织中接菌0-8 h H2O2含量变化呈现2个峰值;接菌8 h时PAL和POD酶活性显著增强;DAB染色显示褐红色斑产生;2个防卫基因ghAOX1和hsr203J超表达.这些结果表明,转hpalXoo基因棉花为某些防卫基因超水平表达提供了分子基础,使受到病原菌侵染时才诱导产生的高水平活性氧及相关基因表达,并且组成型表达的HarpinXoo赋予转基因棉花对黄萎病菌的抗性.  相似文献   

转hpa1_(Xoo)基因棉花悬浮细胞培养及其对黄、枯萎病菌的抗性     

缪卫国  倪萌  宋从凤  王金生 《西北农业学报》2010,19(1):44-48

为验证对黄萎病菌(Verticllium daliae)、枯萎病菌(Fusarium oxysporum f.sp.vasinfectum)的早期抗性反应,确定了转hpa1Xoo基因棉花株系T-33悬浮细胞适宜的培养条件,并成功获得了T-33和其出发品种Z35的悬浮细胞。以1:20的比例,将T-33悬浮细胞与黄、枯萎菌分生孢子液分别共培养0～24h,发现T-33悬浮细胞在0～6h对两种病原菌的抗性能力较强,悬浮细胞死亡率显著低于Z35(P0.05〉。与Z35相比,在3h和6h时,针对棉花黄萎病菌T-33悬浮细胞死亡率分别低52%和35%,针对枯萎病菌分别低42%和25%。说明hpa1Xoo编码的harpinXoo表达赋予转基因棉花T-33悬浮细胞系对两种病原菌的抗性高于其出发品种Z35。  相似文献   

棉花黄萎病菌诱导转hpa1xoo基因棉花产生微过敏防御反应   总被引：3，自引：0，他引：3  

倪萌  缪卫国  刘海洋  邵家丽  努尔孜亚  乔子辰  尚衍强  王金生 《新疆农业科学》2009,46(1):46

采用叶片针刺接种法从细胞学方面分析转hpa1xoo基因棉花与棉花黄萎病菌互作产生的微过敏抗病反应.通过细胞显微观察表明,转hpa1xoo基因棉花T-34与非转基因棉花在抗病性细胞表型方面存在明显差异.Trypan Blue染色后,伤口外的叶组织中均有一褐色环形条带,褐色环形条带与伤口坏死部位之间区域的组织细胞出现质壁分离和空腔细胞现象,褐色条带与伤口坏死部位之间的区域在转基因和非转基因棉花之间具有较明显的差异,转基因棉T-34较非转基因棉花品种Z35形成的区域小,说明转基因棉细胞损伤程度较非转基因棉细胞损伤程度低.棉花黄萎病菌侵染叶片后,非转基因棉花叶部伤口周围细胞无微过敏性反应(micro HR),受病原菌侵染的叶片萎蔫程度较重;转hpa1xoo基因棉花叶部伤口周围细胞有微过敏反应,叶部刺伤处仅有较小的坏死斑,且不相连,发病较轻,而清水处理的转基因棉花与非转基因棉花叶片中伤口周围均无微过敏反应,说明病原菌侵染诱导转hpa1xoo基因棉花产生微过敏防御反应,转hpa1xoo基因棉花较非转基因棉花有较强的抗病性.  相似文献   

解淀粉芽孢杆菌HAB-7 对18株植物病原真菌的抑制作用   总被引：1，自引：0，他引：1  

刘文波  秦春秀  熊燕红  孙亮  林春花  缪卫国  郑服丛 《热带农业科学》2017,(2)

HAB-7是一株分离自豇豆根际土壤、 具有较强抑菌作用的解淀粉芽孢杆菌(Bacillus amyloliquefaciens).研究HAB-7对18株植物病原真菌及其发酵液粗提蛋白对植物病原的抑制作用,并测定其对番茄种子的促生作用.采用平板对峙法测定其对18株植物病原真菌的抑制活性,以橡胶树炭疽菌为指示菌,对其发酵上清液经60%、80%硫酸铵盐析获得的抗菌粗蛋白进行测试﹔ 并将HAB-7菌液稀释成6个浓度梯度,分别用来对番茄种子进行促生测试.结果显示﹕HAB-7对18株植物病原真菌的平均抑菌率为61.03%﹔ 其发酵上清液对橡胶树炭疽病菌的抑制率为56.80%,80%硫酸铵粗提蛋白对橡胶树炭疽病菌的抑制率为38.88%﹔10-4 CFU/mL的HAB-7菌液浓度促进了番茄种子胚根的伸长,长度比CK提高67.76%.HAB-7菌株对植物病原菌有较广谱的抑菌活性,其分泌的活性物质除了活性蛋白外,可能还有其他的活性物质,低浓度的HAB-7菌液能促进植物根系生长.本研究结果为后续研究其致病机理起到重要的作用.  相似文献   

辣木枝枯病病原菌鉴定及其生物学特性   总被引：1，自引：0，他引：1  

康迅  靳鹏飞  冯霞  刘文波  郑服丛  缪卫国 《植物保护学报》2017,44(3):481-487

为明确海南省辣木枝枯病病原菌及其生物学特性,采用组织分离法获得菌株MO157,通过柯赫氏法则、形态学特征及分子生物学技术对该菌株进行鉴定,并测定了其菌丝生长的最佳条件。结果表明,菌株MO157回接10 d后,辣木茎干表面周围呈黄褐色,随后发病部位表现出水渍状病斑,与自然发病辣木的病状相符;菌落近圆形,菌丝初期呈白色绒毛状,后期呈浅黄色,分生孢子顶胞钩状,3~5个隔膜,厚垣孢子呈球形,在菌丝间串生;菌株MO157的ITS序列与Gen Bank中木贼镰刀菌Fusarium equiseti的相似性为100%,结合形态特征与分子鉴定最终将其确定为木贼镰刀菌(Gen Bank登陆号:KX197955)。该菌菌丝生长适宜温度25~30℃,最适温度28℃;pH 6~8时菌丝生长速率增快,pH 7时最适菌丝生长;PDA培养基和PSA培养基最适合该菌生长,以蔗糖为碳源时利用率最高;以牛肉浸膏为氮源时利用率最高;该菌致死温度为65℃,10 min;光照对菌丝生长影响较小,不同处理间菌落直径无显著差异。  相似文献   

橡胶树白粉病菌在疏水介质表面的侵染特征和RNA提取     

梁鹏  李响  何其光  刘文波  缪卫国  郑服丛 《热带生物学报》2017,8(2)

将白粉菌孢子接种到石蜡膜(parafilm)介质表面,观察不同温度条件下橡胶树白粉菌(Oidium heveae B.A.Steinmann)菌株孢子在疏水介质上的侵染过程,确定0~24 hpi孢子侵染结构发育特征,提取侵染发育过程白粉菌的总RNA,采用RT-PCK扩增分析18S保守基因并评价其质量。结果表明:橡胶树白粉菌孢子在15~34℃温度条件下接种于parafilm介质表面能萌发并形成附着胞,萌发和附着胞形成的适温范围22~28℃,最适离体诱导温度22℃。孢子在parafilm介质表面0~24 hpi(hour Post moculation)侵染发育过程可分为未萌发(0hpi)、萌发(4 hpi)、附着胞形成(6,8 hpi)和次生附着胞形成(16,24 hpi)等4个阶段;采用改良Trizol方法提取白粉菌孢子侵染发育过程4个阶段总RNA,可满足转录组文库要求,并扩增18S序列,进化分析显示其与白粉菌科物种为同一分支。结果表明,病原菌孢子在22~28℃温度条件下能够在介质表面形成侵染结构,0,4,6,8,16,24 hpi侵染发育阶段总RNA可用于转录组测序分析研究。  相似文献   

香蕉枯萎病对香蕉苗期生长的影响     

吴小燕  缪卫国  郑服丛 《广东农业科学》2013,40(18):55-57

为了明确香蕉枯萎病菌对香蕉苗期生长的影响,袁模拟3种病菌侵染途径（带菌土壤、带菌香蕉苗、带菌土壤与带菌香蕉苗）,及中低高3种带菌浓度（10、10³、106 CFU/mL）监测香蕉枯萎病菌4号生理小种（FOC 4）对香蕉苗期茎围、株高、叶片长宽等生长指标的影响,并进行统计分析。结果表明,在接种后第64 d,所有处理香蕉苗的茎围、株高、叶片长宽增长均与空白对照差异显著;在一定范围内,接菌浓度越大,香蕉苗的茎围、株高、叶片长宽生长就越慢,甚至停止生长;接菌浓度低至10 CFU/mL（带菌香蕉苗）依然能使蕉苗发生香蕉枯萎病;90%香蕉苗被香蕉枯萎病菌侵染后叶片出现畸形。  相似文献   

胶树白粉菌收集及DNA和RNA提取方法比较     

万三连  梁鹏  宋风雅  张宇  刘文波  缪卫国  郑服丛 《广东农业科学》2013,40(11):134-139

橡胶树白粉菌（Oidium heveae）是专性寄生的病原真菌,难以获取足量和纯度高的菌体,因而不易提取到足够多和质量高的核酸,阻碍了该菌的分子生物学研究袁目前关于橡胶树白粉菌核酸提取方法少有报道.采用软毛笔刷取和醋酸纤维乙酯撕取两种方法收集白粉病菌遥在尝试使用常规的菌物RNA提取方法基础上袁通过优化操作步骤、方法等,研究出改良的Trizol法,用该法能高效率提取到纯度高的橡胶树白粉菌RNA。比较不同DNA提取方法的效率,推荐使用得率高、纯度好的OMEGAFungalDNA kit提取法,用于提取橡胶树白粉菌的DNA。  相似文献