2015年中国典型对虾养殖区WSSV流行株高变异区序列的分析比较          下载免费PDF全文

秦梦雪  孙新颖  万晓媛  刘庆慧  黄倢 《渔业科学进展》2018,39(2):128-137

为了解我国白斑综合征病毒(WSSV)流行变异特征,本研究对2015年4~10月期间在山东、江苏、天津、浙江、海南和广东6省市采集到的57份WSSV阳性的样本,通过特异性的扩增目的片段,根据测序结果分析比较不同地区、不同分离株之间在ORF14/15、ORF23/24上的缺失变异情况,以及ORF75、ORF94和ORF125上的重复单元(Repeat unit, RU)数目差异。结果显示,在ORF14/15扩增中,分别有6530、5908和5725 bp的片段缺失,而在ORF23/24扩增中均有12070 bp大片段的缺失,ORF75的45 bp的RU数目分别为1、2和3,102 bp的RU数目均为1,而ORF94的RU数目分别为4、5、10和12不等,ORF125的RU数目为3、5和6。结果表明,WSSV在部分开放型阅读框上表现出明显的变异差异,而在某些开放型阅读框上的缺失情况则有显著的稳定性。  相似文献   

凡纳滨对虾网格重链蛋白与WSSV结构蛋白在体外的相互作用          下载免费PDF全文

王中一  刘庆慧  黄倢 《渔业科学进展》2018,39(2):138-145

根据凡纳滨对虾(Litopenaeus vannamei)网格重链蛋白(CHC)的2个功能结构域Clathtin Propel Repeat(Lv CHC1)和Clathrin Heavy Chain Repeat Homology(Lv CHC2),分别设计2对特异性引物,扩增目的片段,并克隆至p BAD/gⅢA载体上,以E.coli Top10为宿主菌,在阿拉伯糖的诱导下获得Lv CHC1和Lv CHC2重组蛋白。以Co~(2+)亲和层析方法,获得纯化的Lv CHC1和Lv CHC2蛋白,并经质谱分析验证。采用Far-Western方法分析Lv CHC1和Lv CHC2蛋白与白斑综合征病毒(WSSV)结构蛋白VP26、VP28N和VP37的作用,结果显示,Lv CHC1和Lv CHC2与VP28N没有结合作用,但都能与VP26和VP37结合,其中与VP26的结合作用较强。表明网格蛋白介导的内吞途径在WSSV侵染过程中起到了一定的作用。本研究可为深入研究WSSV入侵机制提供依据。  相似文献   

白斑综合征病毒感染对凡纳滨对虾热休克蛋白60和90表达的影响          下载免费PDF全文

孙凡  刘庆慧  黄倢 《渔业科学进展》2013,34(2):90-95

采用实时荧光定量PCR技术分析白斑综合征病毒(WSSV)感染凡纳滨对虾不同时段鳃、肠、肝胰腺、肌肉、类淋巴和血细胞组织中热休克蛋白(HSP)60和90基因mRNA转录水平的变化。结果显示,HSP60和HSP90在这6个组织中都有表达,WSSV感染影响各组织中HSP60和HSP90 mRNA转录水平的表达,WSSV感染抑制HSP60在鳃、肠、肌肉和血细胞的表达,促进HSP90在鳃、肠、肝胰腺、肌肉、血细胞和类淋巴的表达,表明HSP60和HSP90参与WSSV感染免疫反应。  相似文献   

重组毕赤酵母SMD1168/pGAPZaA-VAP1稳定性及发酵表达WSSV-VAP1     

刘庆慧  陈婷  黄倢 《海洋水产研究》2008,29(5)

研究发酵时间和接种量对WSSV-VAP1重组菌蛋白表达量的影响及重组毕赤酵母中外源基因的稳定性.结果表明,构建的重组菌SMD1168/pGAPZaA-VAP1在发酵72h后,蛋白表达量占总蛋白10.45%,控制接种量对基因工程菌Pichia pastoris表达WSSV-VAP1非常重要.外源基因的插入对宿主菌的生长未产生明显的影响,重组质粒在毕赤酵母SMD1168中很稳定.  相似文献   

实时荧光定量PCR检测对虾白斑综合症病毒方法的建立     

程晓艳  刘庆慧  黄倢 《安徽农业科学》2010,38(26):14265-14267

[目的]根据对虾白斑综合症病毒（White Spot Syndrome Virus,WSSV）的保守序列,利用Primer5.0软件设计引物,建立了WSSV的荧光实时定量PCR检测体系。[方法]构建含有WSSV目扩增片段的质粒为标准品,进行定量PCR扩增,探索反应条件。[结果]确定了最佳退火温度（61℃）和最佳引物浓度（0.2μmol/L）,标准品浓度在8.8×1098.8×104个拷贝数之间有典型的＂s＂型扩增曲线,标准曲线中模板拷贝数（X）与Ct值的关系为Ct=-3.597lgX＋42.547,相关系数R2=0.993。[结论]该检测方法特异性强,对传染性皮下和造血器官坏死病毒（IHHNV）、肝胰腺细小病毒（HPV）没有扩增反应。  相似文献   

中国明对虾(Fenneropenaeus chinensis) Tetraspanin-3与WSSV的体外相互作用          下载免费PDF全文

关广阔  刘庆慧  黄倢 《渔业科学进展》2015,36(6):56-62

Tetraspanin-3是四跨膜蛋白超家族的一员,在信号转导和免疫等过程中起到重要作用。本研究将中国明对虾(Fenneropenaeus chinensis) Tetraspanin-3 (FcT3)的大胞外环区(Large extracellular loop, LEL)基因片段克隆,与原核表达载体pBAD/gⅢA连接,获得重组表达载体pBAD/gⅢA-T3L,转化入大肠杆菌TOP 10中,用L-阿拉伯糖(L-Arab)诱导并经钴离子亲和层析纯化得到重组蛋白。质谱分析显示,纯化的重组蛋白为FcT3。用地高辛将FcT3L标记并与WSSV作用,Far-western分析显示,FcT3L与VP26结合。ELISA实验结果显示,FcT3L与VP26蛋白的相互作用随VP26量的增加而增强。推测FcT3通过与VP26作用介导病毒核衣壳的入胞过程。  相似文献   

鱼鳞提取物延缓衰老作用研究   总被引：13，自引：0，他引：13  

刘庆慧  王彩理 《海洋水产研究》1999,20(1):75-79

报告了鱼鳞提取物对所丰年大鼠血清,肝脏丙二醛含量和超氧化物歧化酶活力的影响。结果表明,实验组大鼠血清,肝脏脂质过氧化物丙二醛含量显著低于正常对照组,实验组大鼠血清,肝脏ＳＯＤ活力增加。对尾腱及皮肤的氨基酸分析显示,实验组大鼠尾腱皮肤中羟脯氨酸含量显著高于正常对照组,提示鱼鳞提取取得具有延缓衰老的作用。  相似文献   

动物胶原的研究进展   总被引：7，自引：0，他引：7  

刘庆慧  李勃生 《海洋水产研究》2002,23(1):76-78

胶原是结缔组织主要成分之一，近年来随胶原提制技术的发展和对其性质，结构等方面的深入研究，进一步促进了胶原应用的研究。本文就胶原提制技术及其特性，应用方面的研究进行综述。  相似文献   

WSSV-VP39基因克隆与结构分析   总被引：1，自引：0，他引：1  

刘庆慧  韩文君  杨冰  黄倢 《海洋水产研究》2007,28(5):36-41

根据已公布的WSSV-VP39全基因序列(GenBank No.AAL89161)设计1对引物,经PCR扩增及琼脂糖凝胶电泳分析,扩增出约898bp的特异条带,将其回收后克隆入pGAPZα-A载体中,并进行序列测定与分析。结果表明,扩增序列与Gene Bank登录序列(GenBank No.AAl89161)核苷酸同源性100%。序列分析表明,WSSV-VP39基因编码蛋白无跨膜区域,有多个蛋白激酶C、酪蛋白激酶Ⅱ磷酸化位点和酪氨酸硫酸化位点,1个糖基化位点。蛋白序列比对结果表明,WSSV-VP39与WSSV-VP37具有较高的同源性,其在WSSV侵染中的作用值得关注。  相似文献