基于间接ELISA的鲤血清CyHV-3 pORF65抗体检测方法的建立   总被引：1，自引：0，他引：1  

马艳平  郝乐  梁志凌  马江耀  李盈  柯浩  刘振兴  曹俊明 《南方水产科学》2018,(3)

鲤疱疹病毒3型(cyprinid herpesvirus 3,Cy HV-3)囊膜蛋白ORF65基因全长1 785 bp,编码594个氨基酸。该研究在稀有密码子分析及信号肽与跨膜结构预测的基础上,将p ORF65中的N端信号肽与C端跨膜区段删除后进行密码子优化与基因合成,将合成的截短ORF65(truncated ORF65)插入p ET32a(+)载体,构建了p ET32a-trun ORF65;进一步采用DNAstar、ABCpred、Bepi Pred 1.0软件预测了p ORF65的5个B细胞表位优势区段,以合成的截短ORF65为模板,通过SOE-PCR将5个B细胞表位优势区段编码序列融合后插入p ET32a(+)载体,构建了p ET32a-mod ORF65。重组质粒分别转入BL21(DE3)菌株,经IPTG诱导,SDS-PAGE和Western-blot分析,p ET32a-mod ORF65获得高效表达,表达的融合蛋白分子量为56.4 k D。此外,利用r Protein G亲和层析纯化了锦鲤(Cyprinus carpio haematopterus)血清Ig M,免疫小鼠,制备了鼠抗锦鲤Ig M多克隆抗体。在上述研究的基础上,将纯化的p ORF65作为包被抗原,鼠抗锦鲤Ig M多克隆抗体作为检测抗体,建立了间接ELISA方法,该方法可以检测p EGFP-ORF65 DNA疫苗免疫锦鲤后产生的特异性抗体。  相似文献   

嗜水气单胞菌与温和气单胞菌的LAMP检测方法的建立     

李嘉彬  马艳平  柯浩  郝乐  刘振兴  马江耀  梁志凌  李玉谷 《南方水产》2014,(5):8-16

利用环介导等温扩增技术（loop-mediated isothermal amplification,LAMP）分别建立嗜水气单胞菌（Aeromonas hydrophila,AH）与温和气单胞菌（A.sobria,AS）的快速检测方法。针对嗜水气单胞菌pilin基因、温和气单胞菌zipA基因设计特异性LAMP引物。在恒温条件下利用实时浊度仪对2组引物进行特异性和灵敏度试验,并以琼脂糖凝胶电泳和核酸染料颜色变化对扩增结果进行判定。结果显示,LAMP实时浊度法能够特异地检测嗜水气单胞菌和温和气单胞菌,最低检出限分别为46 fg·mL^-1和320 fg·mL^-1,是普通PCR方法的104倍和102倍;并能应用于已知临床样品检测。该研究建立的嗜水气单胞菌与温和气单胞菌LAMP快速检测方法具有高效、特异、灵敏的特点。  相似文献   

日本鳗鲡谷胱甘肽过氧化物酶 1 和 4 的克隆、分析和组织表达分布   总被引：1，自引：0，他引：1  

刘振兴  柯浩  曹艳林  张健騑  林敏  孟轩 《中国水产科学》2010,17(3):439-447

采用RACE技术,克隆了日本鳗鲡(Anguilla japonica)谷胱甘肽过氧化物酶1和4(GPx1、GPx4)基因的完整编码序列(Complete coding sequence,CDS)。GPx1基因全长993bp,5′非编码区(UTR)29bp,CDS573bp,3′UTR372bp,PolyA19bp;第803-898位碱基(位于3′UTR)形成1个硒半胱氨酸插入序列(Selenocysteine insertion sequence,SECIS),协助144-146位密码子TGA编码Sec。GPX4基因全长1048bp,5′UTR115bp,CDS561bp,3′UTR346bp,polyA26bp,第766-863位碱基(位于3′UTR)形成1个SECIS,协助299-301位密码子TGA编码Sec。GPx1包含190个氨基酸,分子量21.4kD,等电点8.04,第21位氨基酸具有1个潜在的N-糖基化位点。GPx4包含186个氨基酸,分子量21.4kD,等电点8.85,第68位和153位氨基酸具有2个潜在的N-糖基化位点。GPx1、GPx4均具有Sec、Trp、Gln和Asn构成的催化四联体。日本鳗鲡与其他脊椎动物相比,GPx1的核苷酸序列一致性为42.7%～60.2%,氨基酸序列一致性为56.4%～80.4%;GPx4的核苷酸序列一致性为46.5%～60.2%,氨基酸序列一致性为59.9%～81.2%。进化分析显示,脊椎动物的GPx1、GPx4分别占据进化树的不同分支。利用Swiss-Model预测了日本鳗鲡GPx1、GPx4单体的3D模型,序列分析显示,GPx1可以形成1个同源四聚体。本研究在克隆日本鳗鲡β-actin基因部分CDS序列的基础上,采用Real-timeRT-PCR方法,检测了日本鳗鲡GPx1、GPx4基因表达,比较了GPx1、GPx4在鳃、皮肤、肌肉、肝、脾、肾、肠组织中的表达变化,发现在鳗鲡的肠、肌肉、肝脏等组织中GPx1、GPx4明显表达,并且GPx1的表达量高于GPx4。  相似文献   

罗非鱼源无乳链球菌S-核糖基高半胱氨酸酶基因（1uxS）的克隆及其推导蛋白的三维结构预测     

马艳平  李嘉彬  郝乐  刘振兴  冯国清  周结珊  柯浩 《南方水产》2013,(1):43-47

利用PCR技术对罗非鱼源无乳链球菌（Streptococcus agalactiae）S-核糖基高半胱氨酸酶（1uxS）基因全长DNA进行了扩增、克隆和序列测定,采用ExPAsy软件包预测了推导蛋白的特性,利用SwisS—Model服务器建立了luxS三维结构,利用Swiss—PDBviewer软件进行了蛋白质三维结构的分析。预测结果显示,罗非鱼源无乳链球菌luxS推导蛋白包括保守的酶活性中心和锌结合位点,具有影响生物被膜形成、毒力因子调控等特性功能;经拉氏构象图（Ramachandranplot）分析,所构建的z眦s的空间结构合理。  相似文献   

春雪桃的引种表现及栽培技术要点     

卢广欣  孙凤桐  吴海洋  刘振兴 《天津农林科技》2012,(1):18-20

春雪桃是山东省果树研究所引进的美国早熟桃新品种。通过引种观查,该品种是毛桃类早熟品种中果个较大的,平均单果重200 g,最大果重366 g。属硬溶质,颜色全红鲜艳,味脆甜,耐贮运,易丰产。3年生树667 m2产量3 621 kg,产值1万余元,经济效益显著。  相似文献   

嗜水气单胞菌对克氏原螯虾免疫相关因子活性的影响   总被引：1，自引：0，他引：1  

刘振兴  陈昌福  高宇  王美珍  谭晶晶  李革雷 《华中农业大学学报》2011,30(3):358-363

将嗜水气单胞菌(Aeromonas hydrophila )用灭菌生理盐水调节至1.5×104cfu/mL(I组)和1.5×103cfu/mL(Ⅱ组)的浓度后,注射法接种克氏原螯虾(Procambarus clarkii)(人工感染),定时检测供试克氏原螯虾的总血细胞数量(THCs)、淋巴液中酚氧化酶(PO)、超氧化物...  相似文献   

谨防牛羊除草剂中毒     

林建福  陈丽娟  刘振兴 《福建农业》2000,(2):20-20

生猪隐睾既达不到肥育目的，还分泌大量的雄性激素，影响猪肉的品质，进而减少了经济效益。为了提高大猪的肉质，增加经济效益，笔者采取变原来的髂部法为腹下部法，即用“小挑法”摘除隐睾，取得满意效果。现分述如下。  相似文献   

浅析橡胶坝的锚固形式   总被引：3，自引：1，他引：2  

任国峰  南素民  刘振兴  姬爱云 《中国农村水利水电》2001,(Z1)

橡胶坝以其安全、经济、使用方便等优点 ,广泛应用于天然河道及引水渠道中。橡胶坝锚固是用锚固件将坝袋固定在承载底板和端墙 (或边坡 )上 ,形成一个封闭袋囊 ,达到严密不透水 (气 )的要求。锚固是橡胶坝能否稳定起到挡水作用的关键。锚固结构形式有三种 :螺栓压板式锚固、楔块挤压式锚固和胶囊充水锚固。在安阳河殷都橡胶坝工程和于曹橡胶坝工程中 ,分别采用了楔块挤压式锚固和螺栓压板式锚固。现以殷都橡胶坝和于曹橡胶坝为例 ,从以下几个方面对这两种锚固形式进行分析。1　设计方面楔块挤压式锚固系由前楔块、后楔块和压轴组成 ,锚固槽…  相似文献   

高粱空间诱变效应研究   总被引：8，自引：0，他引：8  

龚振平  刘自华  刘根齐  孟庆祥  刘振兴 《中国农学通报》2003,19(6):16-16

1996年利用我国第17颗返回式卫星对高粱唐恢28恢复系种子进行搭载处理后，对其变异后代进行了田间鉴定和同工酶及RAPD分析。主要结果如下：（1）SP1代获得一个特大穗型突变体（MTR28），其后代性状分离广泛，变异类型丰富，从中获得了遗传性状稳定且具有不同特点的高产、抗病优良变异选系；（2）优良变异选系组配的杂交种产量明显高于对照，可应用于生产上组配高产、抗病杂交种；（3）空间诱变后代性状稳定时间比常规杂交后代稳定快2—4个世代，可缩短育种进程；（4）变异选系在酯酶同工酶和细胞色素氧化酶同工酶酶带种类及酶活性上存在着较大的遗传差异；（5）RAPD分析结果显示，空间诱变选系在基因组水平上发生了明显的变化。  相似文献   

基于“互联网+教育”技术的翻转课堂教学模式探讨     

刘振兴 《农家参谋》2018,(15)

当人们进入信息时代后,互联网+的概念不断的被提起并应用与各个行业,成为行业创新力与生产力提升的助力。在教育领域中也不乏互联网+技术的应用,迎合教育改革而广泛使用的微课、慕课等都是互联网+教育技术的成果。本文就互联网+教育技术应用与翻转课堂教学模式的问题进行分析与讨论[1]。  相似文献