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流式细胞仪在快速测定鲤春病毒血症病毒滴度中的应用 总被引：1，自引：0，他引：1
本研究建立了流式细胞仪快速检测鲤春病毒血症病毒（spring viraemia of carp virus,SVCV）滴度的方法。运用荧光激活细胞分选（fluorescence-activated cell sorting, FACS）技术检测SVCV A1株对草鱼性腺细胞系（GCO）的感染情况。用SVCV病毒单克隆抗体为一抗,FITC标记的羊抗鼠抗体为二抗,运用FACS来检测感染后不同时间点,以及不同病毒接种量的阳性细胞率。感染第3天时为最佳的病毒滴度测定时间点,测得SVCV的病毒滴度为8.31×105 FIU/mL,最低检测病毒滴度为（1000 FIU/mL）,与传统空斑试验（plaque assay,PA）相比,两种方法测得的结果基本一致。实验结果表明,FACS是一种简捷、高效、直接的检测SVCV滴度的方法,是一种新型的病毒滴度测定方法。 相似文献
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用DNAStar7.0软件对GenBank中IHNV的N基因进行序列分析,设计IHNV特异性引物并标记生物素,将探针氨基化修饰,与荧光编码微球偶联后与RT-PCR产物杂交反应,用液相芯片仪器检测荧光信号,建立了传染性造血器官坏死病毒（IHNV）的液相芯片快速检测技术。结果表明液相芯片检测体系对IHNV病毒核酸的最低检出量为100pg,且特异性高,与其他病毒无交叉反应。应用建立的液相芯片技术检测鱼类中IHNV,并与RT-PCR方法进行比较,检测结果基本一致,但该方法比RT-PCR法更灵敏。表明初步建立了检测IHNV的液相芯片技术,为进一步构建其他水生动物病原体快速高通量检测平台提供参考。 相似文献
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为研究进口斑节对虾传染性皮下和造血器官坏死病毒(Infectious Hypodermal and Hematopoietic Necrosis Virus,IHHNV)的风险,本文采用了世界动物卫生组织(OIE)2015版手册中推荐的PCR方法,对2015年从泰国输华的329批次斑节对虾进行了IHHNV检测分析。结果发现,其阳性率高达36.8%,且主要是感染1型和2型,以及风险不明的未知型。因此,来自泰国的斑节对虾具有较高的IHHNV传入风险,应加强针对IHHNV的进口监测,减少其对我国对虾养殖的影响。 相似文献
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根据ISAV的基因保守序列,利用LAMP Designer软件设计了6条引物,采用新型的环介导等温扩增设备进行扩增和检测,优化了反应条件,分析了所建立方法的特异性和灵敏度,并与RT-PCR和实时荧光RT-PCR进行比较。研究表明,该方法最适反应温度为64℃,反应10 min就可以观察到明显的扩增。该方法灵敏度高,检测限为78.4 fg RNA,比常规RT-PCR灵敏度高100倍,与实时荧光定量RT-PCR灵敏度相当;特异性好,与传染性胰腺坏死病毒(IPNV)、鲤春病毒血症病毒(SVCV)、出血性败血症病毒(VHSV)、鱼类病毒性神经坏死病病毒(VNNV)、鱼腹水病毒(YAV)等14种主要鱼类病毒没有交叉反应。结果表明,本研究建立了ISAV的实时荧光环介导等温扩增检测方法,实验能对整个扩增过程进行实时监测,提高检测灵敏度的同时,防止由于开盖跑电泳或加染料而导致的污染。 相似文献
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对所分离编号为20101008和20101032的两株传染性造血器官坏死病病毒（IHNV）的糖蛋白编码基因进行遗传进化分析,以揭示我国毒株与其他不同国家和地区毒株间的遗传进化关系。以反转录RCR（RT-PCR）法扩增其糖蛋白（G）编码基因,然后克隆入PMD-18T载体并测序。应用DNAStar和MEGA4.0软件,将20101008和20101032的G基因与多株GenBank中已发表的IHNV毒株相应基因进行比较。结果表明两株病毒间G编码基因的核苷酸和推导出来的氨基酸同源性分别为98%和81.9%,其氨基酸序列分别发生了35和20处氨基酸的替换。20101008和20101032与日本、韩国分离株同源性较高,核苷酸及推导出来的氨基酸同源性分别为93.3%～96.4%和75.9%～84.6%;两株病毒在进化关系上亲缘关系最近,属于同一分支,均为基因U型传染性造血器官坏死病病毒,但其G基因的核苷酸序列以及推导出来的氨基酸序列与已知的基因U型IHNV都有一定的差异。 相似文献
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鱼类神经坏死病毒实时荧光RT-PCR检测方法的建立和应用 总被引：1，自引：0，他引：1
根据GenBank中登录的鱼类神经坏死病毒CP基因序列，选择高度保守区域设计引物和TaqMan荧光探针，通过对实时荧光RT-PCR反应条件进行优化，建立了用于检测鱼类神经坏死病毒的实时荧光RT-PCR方法。利用该方法检测鱼类神经坏死病毒及其他多种常见的水生动物RNA病毒，结果只能检测到目的病毒，表明其具有良好的特异性。灵敏性试验发现，其最低检测限可达1．2pg／μL的总RNA。与RT-PCR的灵敏度对比试验表明，其敏感度比RT-PCR高100倍。对同一样品进行检测，在组内及组间的变异系数分别为0．9％以及1．5％，证实其重复性极好，并且从抽提核酸到得出结果仅需4h。对临床500份样品进行鱼类神经坏死病毒检测，结果发现有40份阳性样品。这些结果表明，本研究所建立的实时荧光RT-PCR能对鱼类神经坏死病毒进行准确、快速的检测，具有特异性好、灵敏度高的优点，是开展鱼类神经坏死病的临床检测和疫情监测工作的有力工具。[中国水产科学，2008，15（3）：506-510] 相似文献
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