TAV-CP、CVB-CP、CChMVd基因片段的融合及其RNAi载体的构建     

刘佳  黄丛林  吴忠义  张秀海  王永勤 《华北农学报》2013,28(1):106-111

番茄不孕病毒(TAV)、菊花B病毒(CVB)、菊花褪绿斑驳类病毒(CChMVd)是侵染菊花的3种主要病毒,严重影响菊花品质.利用Blast及分子生物学软件DNAStar对TAV、CVB、CChMVd基因序列同源性进行分析比较,选用TAV的277 bp(1 810 ～2 086),CVB的281 bp(496～776),CChMVd的217 bp(109 ～325)的部分基因片段,应用重叠延伸PCR技术将其拼接成融合基因CBT,构建了以CaMV 35S启动子驱动的含有“正向CBT片段-内含子-反向CBT片段”的RNAi的植物表达载体,为培育抗3种病毒的菊花优异种质资源奠定基础.  相似文献   

菊花‘北甘菊’和‘神马’对除草剂草丁膦的敏感性研究     

陈海  张秀海  吴忠义  罗昌  程曦  黄丛林 《安徽农业科学》2013,41(9):3871-3872,3874

[目的]探究不同菊花品种对除草剂草丁膦的敏感性。[方法]以野生菊花‘北甘菊’和秋季切花菊‘神马’为材料,研究了菊花对除草剂草丁膦的敏感性表现。[结果]不同品种不同营养生长期的植株对草丁膦的敏感性不同,‘神马’植株平均叶片数为13叶片期时对草丁膦的敏感浓度为40 mg/L,‘甘菊’植株平均叶片数为8叶期时对草丁膦的敏感浓度为50 mg/L。[结论]为草丁膦抗性的转基因菊花的筛选提供了理论依据。  相似文献   

高羊茅叶绿体表达载体构建及绿色荧光蛋白基因瞬时表达检测   总被引：2，自引：1，他引：1  

赵彤  于荣  黄丛林  王永勤  张秀海  吴忠义 《中国农业科学》2009,42(3):1116-1122

 【目的】验证高羊茅叶绿体表达载体在高羊茅叶绿体中的瞬时表达情况,为今后在高羊茅叶绿体中稳定表达该载体,获得耐旱高羊茅的叶绿体转基因株系奠定基础。【方法】首先从高羊茅草叶绿体基因组中克隆16S/trnI-trnA/23S片段,作为定点整合同源片段。然后将耐旱相关基因酵母海藻糖合酶基因tps1与水稻叶绿体16S rRNA基因的强启动子Prrn、烟草叶绿体基因psbA的终止子构建表达盒（Prrn-tps1-TpsbA-ter）,连同草丁膦抗性基因bar表达盒、卡那霉素抗性基因nptII和绿色荧光蛋白基因gfp构建的融和基因表达盒一起克隆到定点整合同源片段之间,构建高羊茅叶绿体的稳定表达载体gTKGB。通过基因枪轰击法将gTKGB转化到高羊茅幼嫩叶片中,用激光共聚焦扫描显微镜对GFP的表达情况进行检测分析。【结果】克隆的高羊茅叶绿体基因16S-trnI-trnA-23S在NCBI登录号为：DQ490947－DQ490950。构建的叶绿体表达载体gTKGB转化高羊茅幼嫩叶片,在叶绿体中有很好的GFP表达。【结论】高羊茅叶绿体表达载体gTKGB可用于高羊茅叶绿体转化。  相似文献   

东方百合‘口索邦’基于喷雾式植物反应器的AtCKX3基因转化     

张倩  杜运鹏  毕彧  陈绪清  张秀海  杨秀云 《东北林业大学学报》2016,(7):59-63

以东方百合‘索邦’鳞片为试材,采用喷雾式植物反应器(即开放式培养)手段,进行外源基因AtCKX3的转化,并对除草剂草丁膦(PPT)质量浓度筛选、转化效率进行了研究.以生长情况一致的百合幼苗为材料进行草丁膦质量浓度的筛选,结果表明:8.5 mg·L-1为‘索邦’草丁膦筛选的临界质量浓度;将农杆菌侵染后的鳞片在喷雾式反应器中培养,诱导出不定芽及生根后进行移栽,并对转化植株幼苗进行草丁膦筛选.对抗性植株进一步进行PCR检测和PCR-Southern杂交检测,结果表明:采用喷雾式植物反应器培养,一方面,可有效提高转化效率,缩短培养时间,转化率为0.29％左右;另一方面转化苗移栽成活率更高,达75％.  相似文献   

植物抗病毒基因工程研究进展   总被引：1，自引：0，他引：1  

刘佳  吴忠义  张秀海  王永勤  黄丛林 《中国农学通报》2009,25(1):30-38

植物病毒是一类重要的植物病原微生物,每年都给全球的农业生产带来了巨大的损失。近年来,通过基因工程技术培育抗病毒植物已经成为抵抗植物病毒的有效手段。本文阐述了目前植物抗病毒基因工程的主要方法策略,包括由蛋白质介导、RNA介导、非病毒来源基因介导及交叉保护介导的抗性机制,分析了这些机制的存在问题及发展趋势,同时还对一些RNA水平的抗性策略进行了探讨  相似文献   

蛋鸡开产后脱肛的原因及防治措施     

张秀海  谷国英 《科学种养》2008,(7):47-47

一、脱肛原因1．蛋鸡育成期运动不足,鸡体过肥。蛋鸡育成期日粮能量水平过高,加上鸡只运动不足,导致体内脂肪沉积过多。耻骨间和下腹部的大量脂肪压迫输卵管,阻塞产道,使输卯管肌肉过度紧张,鸡每次产蛋都强力努责而造成脱肛。  相似文献   

环介导等温扩增技术检测菊花中番茄不孕病毒   总被引：4，自引：2，他引：2  

刘佳  黄丛林  吴忠义  张秀海  王永勤 《中国农业科学》2010,43(6):1288-1294

【目的】环介导等温扩增(loop-mediated isothermal amplification,LAMP)是一种特异、灵敏、快速的新型基因检测技术。本研究拟用该技术建立菊花中番茄不孕病毒(TAV)的检测方法。【方法】设计能识别TAV CP序列6个特定区域的4种LAMP特异引物,对MgCl2、dNTPs、甜菜碱等LAMP反应条件进行优化,利用新建的LAMP法检测TAV,比较LAMP和RT-PCR2种不同方法的检测灵敏度。【结果】建立了检测番茄不孕病毒的LAMP技术;LAMP比RT-PCR具有灵敏度更高、快速、简便等优点。【结论】建立的LAMP技术能快速、准确、简便地检测出菊花中的番茄不孕病毒。  相似文献   

非生物胁迫诱导的玉米蛋白激酶基因ZmCIPK1的cDNA克隆和表达分析   总被引：1，自引：0，他引：1  

边鸣镝  吴忠义  赵久然  王永勤  张秀海  黄丛林  曹鸣庆 《农业生物技术学报》2008,16(6)

CIPK（CBL-interacting Protein Kinase）在植物非生物胁迫信号转导中起重要作用。应用电子克隆的方法在玉米中克隆了一个cDNA全长为1395bp的蛋白激酶基因ZmCIPK1（GenBank接受号为EF158034）。其编码的蛋白含有465个氨基酸,分子量为51.98KD,等电点为6.92。推断的ZmCIPK1催化结构域中包含蛋白激酶催化结构域保守的11个亚结构域, 蛋白C端具有植物CIPK蛋白家族特有的包含24个氨基酸的NAF结构域。半定量RT-PCR结果表明,在甘露醇、氯化钠、ABA和4°C低温诱导时,ZmCIPK1在玉米幼苗叶片中表达量明显上调,在24小时内保持较高的转录水平。试验结果表明,ZmCIPK1是一个新的玉米蛋白激酶基因,响应多种非生物胁迫信号。  相似文献   

卷丹百合LlARF12基因的克隆、表达及功能分析     

李佳敏  王梦迪  梁佳惠  张铭芳  杜运鹏  张秀海  李玉舒  于晓南 《河南农业大学学报》2024,(2):205-217

【目的】探究卷丹百合珠芽发生前细胞和组织学层面的变化,讨论卷丹百合珠芽发生的内在机制。克隆生长素响应因子基因LlARF12,为解析LlARF12基因在卷丹百合珠芽发生过程中的作用机制提供参考。【方法】利用石蜡切片的方法对卷丹百合珠芽器官形成前的叶腋部位进行了组织学观测,从卷丹珠芽形成过程的转录组中筛选得到参与珠芽发生的关键基因LlARF12,克隆得到其编码区(CDS)序列,利用生物信息学软件对其进行分析预测,通过qRT-PCR对不同时期、不同种与品种的百合组织中的LlARF12基因进行表达模式分析,并通过VIGS技术对卷丹种球进行LlARF12基因沉默,从而验证其基因功能。【结果】克隆获得LlARF12基因长度为2 346bp,编码781个氨基酸;qRT-PCR结果显示,LlARF12在珠芽发生的小白点时期表达量显著低于未发生珠芽时期、在S1时期植株茎秆上部表达量显著低于茎秆下部、在能够自然发生珠芽的百合品种中表达量显著低于其他百合品种;沉默LlARF12基因导致卷丹珠芽发生时间提前,且发生的珠芽数量增多。【结论】在卷丹百合珠芽发生的S1时期之前,腋生分生组织已经开始启动,此处靠近表皮...  相似文献   

phaG基因转化马铃薯的初步研究   总被引：1，自引：0，他引：1  

孙环星  张秀海  吴忠义  黄丛林  李文滨 《华北农学报》2006,21(1):1-4

phaG是生产可降解塑料PHAS的关键合成酶基因,利用来源于Burkholderia caryophylli的phaG基因BcphaG,构建了其植物表达载体pTiBHS-2,通过农杆菌(Agrobacterium tumefaciens)介导转化生产上常用的马铃薯(Solanumtuberosum)优良品种大西洋,共得到9株转基因马铃薯。经PCR检测证明外源基因已经整合到植物的基因组上,West-ern blot检测表明BcphaG基因在转基因植物体内已表达。转基因植株在再生初期,苗生长慢,根的再生也很慢,但在生根后生长情况逐渐恢复正常,说明BcphaG基因对再生转基因植株的早期生长有负面影响。  相似文献