中华绒螯蟹4E-BP1基因的克隆、表达特征及其在蜕壳中的作用          下载免费PDF全文

冯文荣  冯伟  张明胤  于凡  李建林  苏胜彦  唐永凯  徐跑 《中国水产科学》2022,29(12):1714-1727

真核翻译起始因子 4E 结合蛋白 1 (4E-BP1)是 mTOR 信号通路下游的翻译抑制因子, 调节翻译的起始和蛋白质的合成。为探究中华绒螯蟹(Eriocheir sinensis) 4E-BP1 基因特征、时空表达模式及其在蜕壳过程中的潜在作用, 本研究利用 RACE 技术克隆获得中华绒螯蟹 Es4E-BP1 全长 cDNA 序列, 利用 qPCR 技术探究其时空表达, 利用 dsRNA 干扰探究其在中华绒螯蟹蜕壳中的作用。测序结果显示, Es4E-BP1 cDNA 全长 1678 bp, 包括 134 bp 的 5? 非编码区、1193 bp 的 3?非编码区和 351 bp 的开放阅读框。氨基酸序列分析发现, Es4E-BP1 含有 1 个 eIF4E 超级家族的典型保守域, 且包含 1 个超二级结构 TOS 基序和 1 个 YXXXXLΦ 基序。多序列比对和系统进化树分析显示, Es4E-BP1 与蓝蟹(Callinectes sapidus)、三疣梭子蟹(Portunus trituberculatus)聚为一支并且具有很高的同源性 (95.69%和 93.16%)。qPCR 结果显示, Es4E-BP1 在成蟹各个组织均有表达, 其中 Y 器官表达量最高, 其次为肌肉, 鳃丝中表达量最低。一个完整蜕壳周期内, 幼蟹不同组织表达模式不同, 但均在蜕壳后期 A-B 期表达量最高, 蜕壳前期表达量较低。注射 dsEs4E-BP1 后, 中华绒螯蟹存活率远低于对照组 CG 组; 蜕壳间隔显著高于 CG 组。研究结果表明, Es4E-BP1 在中华绒螯蟹各组织中广泛表达, 在调控蜕壳生长中具有重要作用, 为进一步研究甲壳动物 4E-BP1 基因提供了重要参考。  相似文献   

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李建林 《湖南农业》2022,(3)

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鲤脂蛋白脂肪酶基因特性、表达分布、重组蛋白获得及酶活性比较          下载免费PDF全文

王钰婧  冯文荣  徐逾鑫  李建林  苏胜彦  俞菊华  唐永凯 《水产学报》2023,47(10):109618-109618

为研究鲤脂蛋白脂肪酶(Cc LPLs)的基因特征、时空表达分布及酶活性，实验利用基因组同源搜索获取鲤CcLPLs同源基因并分析其序列特征；通过荧光定量PCR(qPCR)方法对CcLPLs在不同组织的表达进行分析；采用原核表达系统获取CcLPLs重组蛋白，并使用对硝基苯酚法测定各重组蛋白的酶活性。结果显示，鲤基因组中挖掘到5个CcLPLs基因(CcLPLA1a、CcLPLA1b、CcLPLA2a、CcLPLA2b*和CcLPLBa)，经验证，CcLPLA2b*是假基因，共线性分析显示，鱼类特有基因组加倍过程中出现基因丢失的现象，而鲤特有的基因组加倍致使鲤存在5个CcLPLs。CcLPLA1a和CcLPLA1b核苷酸序列和氨基酸序列相同，同源性分析显示，CcLPLBa与CcLPLA1s的同源性为64%，与CcLPLA2a同源性为50.8%。qPCR结果显示，CcLPLs的表达量在肝脏、心脏、脂肪、肌肉、脑、肠道和脾脏中依次降低，在各个组织中，各基因表达量从高到底依次为CcLPLA1s、CcLPLA2a和CcLPLBa。鲤正常投喂、饥饿及再投喂状态下CcLPLA1s和CcLPLA2a在肝脏、...  相似文献