抗恩诺沙星噬菌体单链抗体库的构建及鉴定     

温凯  沈建忠  孟辉  吴聪明  王战辉  张素霞 《中国农业大学学报》2011,16(2):118-124

本研究以兽药恩诺沙星为对象,构建噬菌体抗体库,为低成本、快速制备目的抗体提供新的途径。以恩诺沙星-鸡卵清蛋白(ENR-OVA)为免疫原对Balb/c小鼠进行免疫,取其脾细胞提取总RNA,并分别扩增全套抗体轻、重链基因,通过重叠延伸PCR技术,以编码柔性多肽(Gly3Ser)4的基因为接头,将轻重链基因组装为完整的scFv基因,将之克隆入pCANTAB5E载体,转化大肠杆菌XL1-Blue,以辅助噬菌体M13KO7对其进行超感染,构建噬菌体抗体库并进行富集、筛选和鉴定;构建了库容量约为2.2×106的抗恩诺沙星噬菌体单链抗体库,并筛选出26株阳性克隆,为表达单链抗体、建立免疫检测方法奠定基础。  相似文献   

猪A群轮状病毒BJ株的分离与鉴定     

原霖  韩焘  倪建强  亢文华  汪葆玥  李晓霞  陈亚娜  翟新验  沈建忠 《中国畜牧兽医》2016,43(12):3306-3313

轮状病毒是引起幼龄动物和儿童病毒性腹泻的主要病原,轮状病毒的分离鉴定为该病的流行病学调查和分子生物学特性研究奠定了基础。本研究采集北京某猪场腹泻发病仔猪肠内容物,将其接种MA104细胞,分离得到一株能产生明显细胞病变的病毒。对分离毒株进行胶体金、实时荧光定量RT-PCR和免疫荧光等方法鉴定,并对分离毒株的VP4、VP6和VP7基因进行测序及序列分析。结果表明,分离毒株为猪A群轮状病毒。按照A群轮状病毒的最新分类方法,确定该分离株VP4、VP6和VP7基因的基因型分别为P[13]型、I5型和G11型。因此,将该分离株命名为Rotavirus A pig/China/BJ/2015/G11P[13]。  相似文献   

猪链球菌对氟喹诺酮类药物的耐药性与靶位突变相关性     

芮萍  马增军  段玲欣  刘谢荣  倪静  沈建忠 《畜牧兽医学报》2011,42(4)

旨在了解猪链球菌对氟喹诺酮类药物耐药性与parC、gyrA基因突变的相关性,通过微量稀释法测定34株猪链球菌对4种氟喹诺酮类药物的MIC值,采用PCR方法扩增并测序分析了临床分离的猪链球菌对氟唪诺酮类约物10株耐药株和9株敏感株的parC和gyrA基因喹诺酮耐药决定区(QRDRs).在氟喹诺酮类药物耐药菌株parC基因QRDRs发生Ser79→Phe、Arg 87→Leu的氨基酸突变,在4株高度耐药菌株gyrA基因QRDRs发生Arg66→Ser,Ser81→Arg氨基酸突变;当菌株对氟喹诺酮类药物敏感时,parC和gyrA基因的QRDR区均未有突变;而当MIC≥32 μg·L-1 时,parC的氨基酸发生了 Ser79→Phe的突变,同时发生gyrA氨基酸Arg66→Ser,Set81→Arg突变.结果表明,猪链球菌对氟喹诺酮类药物低水平类耐药是由parC单一位点突变引起,而高水平耐药是由parC和gyrA双位点突变引起.  相似文献   

辽宁5座水源地水库底栖动物群落结构特征比较     

温梦杰  邱龙辉  贾璐歌  李江维  李爽  沈建忠 《华中农业大学学报》2024,43(2):175-187

为探究辽宁省5座水源地水库—观音阁、白石、柴河、清河和汤河水库底栖动物的群落结构特征,并根据底栖动物的现存量估算鱼产潜力,为这5座水库保水渔业的放养捕捞提供科学依据,于2019-2020年开展季节性调查,共检出底栖动物67种,其中,节肢动物52种,以摇蚊幼虫为主,有39种;寡毛类12种,主要为颤蚓和仙女虫;软体动物3种,分别为观音阁和汤河水库检出的椭圆萝卜螺,以及观音阁和白石水库的梨形环棱螺和褶纹冠蚌。检出种类以汤河水库最多,39种,其次为观音阁水库34种,白石水库最少,仅23种。密度以白石水库最高,1 546.89 ind/m²,其次为观音阁水库658.33 ind/m²,汤河水库最低,481.92 ind/m²。生物量以白石水库最高,7.76 g/m²,其次为汤河水库5.68 g/m²,清河水库最低,2.49 g/m²。5座水库密度在春、夏、秋季均可出现峰值,但最低值皆出现在夏季;生物量则以春、冬季较高,夏、秋季较低。各库密度和生物量总体表现为静水区最高,仅观音阁水库密度和生物量、白石水库生物量峰值出现在过渡区。观音阁和柴河水库河流区至坝前密度和生物量总体以寡毛类为主,而入水口以摇蚊幼虫占比最高;清河水库和汤河水库入水口至静水区密度和生物量总体以摇蚊幼虫为主,而坝前均以寡毛类占比最高;白石水库入水口至过渡区主要为摇蚊幼虫,坝前静水区以寡毛类为主。群落聚类与MDS排序结果显示,观音阁、柴河和清河水库群落较为相似,而白石水库和汤河水库群落相似性较低,且与观音阁、柴河和清河水库差异明显。CCA结果显示,水深、总氮、氨氮、DOC、叶绿素a含量是5座水库影响底栖动物密度的关键因子。底栖动物种类组成受总氮、氨氮影响明显,汤河水库总氮、氨氮含量最低,表现为种类最多,摇蚊幼虫优势地位高;白石水库中总氮、氨氮含量最高,表现为种类最少,水丝蚓优势地位高。基于底栖动物估算的鱼产潜力白石水库最高,汤河水库次之,清河水库最低。与以往调查数据相比,5座水库种类数均增加,主要是检测出的摇蚊幼虫种类增加;而密度和生物量表现有所不同,观音阁水库密度和生物量均降低,而清河和汤河水库均增加,白石水库则密度增加而生物量降低,柴河水库则密度降低而生物量增加。以上结果表明,应根据这5座水源地水库底栖动物群落结构特征,针对性地管理底栖动物食性鱼类的放养和捕捞。  相似文献   

家禽肌肉组织中硝基咪唑类药物残留高效液相色谱检测法研究   总被引：15，自引：0，他引：15  

沈建忠  项新华  张跃  赵珊 《中国农业科学》2003,36(6):700-703

 建立了检测家禽肌肉组织中甲硝唑、洛硝哒唑、二甲硝咪唑残留的高效液相色谱法。样品经乙酸乙酯振荡提取 ,浓缩 ,盐酸溶解残渣 ,己烷萃取除去脂肪。氢氧化钠调节溶液到pH 4 .8～ 5 .2 ,过C18小柱 ,甲醇洗脱 ,SpherisorbC18柱分离 ,32 0nm处检测。流动相为醋酸缓冲液 乙腈 (85∶15 ,v/v)。甲硝唑、洛硝哒唑和二甲硝咪唑检测限分别为 0 .5、1.0和 1.0ng·g-1。肉鸡肌肉组织中添加 6 .0ng·g-1水平回收率分别为 :甲硝唑 89.8% ,洛硝哒唑81.7% ,二甲硝咪唑 86 .6 %。此方法具有定性合理 ,检测限低 ,分析快速 ,准确等特点。  相似文献   

弗吉尼亚霉素促进肉鸡生长的研究     

沈建忠  肖希龙  朱蓓蕾 《中国农业大学学报》1995,(1):100-103

本试验应用5mg·kg~(-1)(Ⅰ)、10mg·kg~(-1)(Ⅱ)和20mg·kg~(-1)(Ⅲ)3个剂量的弗吉尼亚霉素,并设20mg·kg~(-1)杆菌肽锌(Ⅳ)组和空白对照(Ⅴ)组,对900只 AA 肉鸡进行对比饲养试验。在整个试验期间,与空白对照组比较,试验Ⅰ,Ⅱ,Ⅲ和Ⅳ组肉鸡的增重分别提高了2.23%,5.42%,5.15%和2.52%;饲料/增重分别降低了1.30%,4.35%,4.35%和1.30%;肉鸡的死亡率分别下降了0%,2.22%,1.67%和0.55%;经济效益分别提高了3.39%,11.445,9.11%和3.81%。并且试验Ⅱ组和Ⅲ组肉鸡的增重、饲料转化率和经济效益均明显(P<0.05)高于试验Ⅳ组。试验各组的屠宰指标无明显差异(P>0.05)。从上所述,肉鸡饲料中添加弗吉尼亚霉素或杆菌肽锌均能降低肉鸡死亡率,提高肉鸡增重、饲料转化率和经济效益,其中10mg·kg~(-1)和20mg·kg~(-1)弗吉尼亚霉素组的效果优于其它各组。建议在肉鸡生产中使用弗吉尼亚霉素的推荐剂量为10～20mg·kg~(-1)。  相似文献   

北京菊酯Ⅱ的亚慢性毒性研究     

陈西剑  沈建忠  朱蓓蕾 《农业环境科学学报》1989,(5)

本文研究了北京菊酯Ⅱ纯品对大鼠和小鼠的亚慢性毒性作用,分别以6.28mg/kg,1.26mg/kg和0.63mg/kg的剂量拌料饲喂大鼠和小鼠90天,结果表明,北京菊酯Ⅱ对大鼠和小鼠无明显毒性作用。其对大鼠和小鼠的最大无作用剂量大于6.28mg/kg。  相似文献   

兔排泄物中阿维菌类药物的高效液相色谱检测   总被引：2，自引：0，他引：2  

周德刚  李海燕  徐飞  李娜  江海洋  沈建忠  丁双阳 《中国农学通报》2008,24(3):35-39

建立了一种同时检测兔排泄物中阿维菌素、伊维菌素、多拉菌素、爱普菌素的高效液相色谱方法,样品用乙腈提取,Bond Elut C18柱净化,用三氟乙酸酐和1-甲基咪唑的乙腈溶液作衍生化试剂,然后加入冰乙酸和三乙胺进行衍生化反应30 min,用液相色谱荧光检测器检测,该方法检测兔排泄物在2～10 ng/g的添加范围内兔粪的平均回收率73.17%～101.30%,日内变异系数小于11.61%,日间变异系数小于11.31%,兔尿的的平均回收率在75.69%～101.84%,日内变异系数小于12.20%,日问变异系数小于10.880%.爱普菌素、阿维菌素、多拉菌素和伊维菌素在兔粪中的检出限为0.09～0.25ng.g-1,在兔尿中的检测限为0.04～0.28 ng·ml-1.4种药在兔t兔粪便和尿液中的定量限分别是2ng·g-1和2 ng·ml-1.该方法可靠、灵敏.可用于常规的残留检测.  相似文献   

中华PangPi Rhodeus sinensis繁殖习性的初步观察     

沈建忠 《华中农业大学学报》2000,19(5):494-496

  相似文献   

莫能菌素和盐霉素在鸡组织中的残留分析方法研究   总被引：9，自引：0，他引：9  

张素霞  沈建忠  吕亚滨  黄智珍 《畜牧兽医学报》2000,31(6):530-535

本文报道用高效液相色谱柱后衍生化检测肉鸡肌肉、肝脏和脂肪组织中莫能菌素和盐霉素的残留。肉鸡肌肉、肝脏和脂肪组织经异辛烷提取,用硅胶柱净化分离,洗脱液浓缩后用甲醇／水溶解。以甲醇／冰乙酸／水（943／30／30,v/v）作为流动相,香草醛为衍生剂,用RP－C18柱在可见波长520nm处检测。将莫能茵素和盐霉素分别以0．10,0．20,0．40和0．20,0．40,0．800644g/g分别添加到空白肉鸡组织中,测得莫能菌素和盐霉素在肌肉、肝脏和脂肪组织中的平均回收率分别为97．7％、91．1％、92．1％和94．1％、85．4％、90．7％,变异系数范围在2．7％－16．8％之间。用该方法测定肉鸡组织中莫能菌素和盐霉素残留的最低检测限分别为0．05μg/g0．1μg/g。  相似文献