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71.
新鲜奶酪因风味好、质地软、水分高及口感好,不但受到消费者的喜爱,在餐饮业和食品加工业也被广泛应用。对目前我国新鲜奶酪的研究进展进行了综述,旨在为乳品企业新鲜干酪的产业化生产提供参考。 相似文献
72.
【目的】利用重组β2肾上腺素能受体(β2AR)检测β2激动剂类药物,是弥补传统免疫学检测方法不足、实现该类违禁物多残留的快速检测手段。获得高纯度、高亲和力的重组受体是该技术的核心和难点。本文克隆猪β2 AR并构建其重组穿梭表达质粒,为筛选最适宜的受体表达系统和表达条件提供基础材料。【方法】克隆猪β2AR并进行序列分析,完成重组穿梭表达质粒构建。首先采集新鲜猪肝组织,提取总RNA,根据GenBank已登录的猪β2AR核苷酸序列(AF000134),设计1对引物并进行RT-PCR扩增。扩增产物切胶回收后与pMD-18T载体于4℃、T4连接酶作用下连接过夜。连接产物转化DH5α感受态细胞,经蓝白斑筛选后提取克隆质粒并对其作PCR鉴定、双酶切鉴定及测序分析。然后对所获得的基因及编码的氨基酸序列进行在线BLAST分析、系统进化树构建和疏水性分析。为了提高受体蛋白的表达量及受体配体间的亲和力,对该克隆基因作N端截短186个核苷酸改造;为使表达蛋白C端携带6×His标签,对克隆基因C端进行去除终止子改造。将改造后的克隆基因分别插入pTriEx-1.1 Hygro穿梭表达载体,连接产物转入NovaBlue感受态细胞,经Amp抗性筛选,挑取单菌落提取质粒并进行鉴定。【结果】经分光光度计检测及琼脂糖凝胶电泳分析,所提猪肝细胞总RNA的纯度、浓度及完整性可满足后续试验要求。RT-PCR产物电泳结果显示,在1 200 bp 左右出现1条特异性条带,与预期结果一致。克隆质粒pMD-18T-β2AR经鉴定,证实为阳性重组质粒。测序结果显示,所得猪β2AR基因cDNA序列全长1 257 bp,编码418个氨基酸。该序列已提交至GenBank,登录号为KF023571.1。Compute pI/Mw在线软件预测该蛋白分子质量为46.73 kD。与已发表的猪β2AR(AF000134)相比,基因序列一致性为99.68%,4处发生碱基突变,编码的氨基酸序列一致性为99.28%,3处发生突变,且配体与受体结合位点处的氨基酸均得到正确克隆。在线BLAST分析表明,猪与其它物种的β2AR及氨基酸序列一致性均在80%以上,具有较高的同源性。由系统进化树分析可知,所克隆的猪β2AR与领西猯Pecan tajacu(JN 633666.1)的亲缘性较近,与大仓鼠Tscherskia triton(AY683091.1)和草原田鼠Microtus ochrogaster(XM 005356183.1)的亲缘性较远。氨基酸疏水性分析表明,该受体蛋白N端以疏水性氨基酸为主,C端以亲水性氨基酸为主。经PCR和双酶切鉴定以及测序分析证明,成功构建重组穿梭表达质粒pTriEx-1.1Hygro-β2AR1-418和pTriEx-1.1Hygro-β2AR63-418。【结论】所获克隆基因与已发表猪β2AR高度一致,且活性位点处的氨基酸均得到正确克隆。此外,pTriEx-1.1 Hygro穿梭表达载体适宜用作大肠杆菌、昆虫细胞和哺乳动物细胞表达系统的启动子,是研究目标基因在不同表达系统表达效果的良好材料。本文所构建的穿梭表达质粒pTriEx-1.1Hygro-β2AR1-418和pTriEx-1.1Hygro-β2AR63-418均可用于以上3种表达系统中β2AR蛋白的表达纯化研究。 相似文献
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:研究枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis)泼洒对罗非鱼抗无乳链球菌病的影响,为枯草芽孢杆菌在罗非
鱼链球菌病综合防控中的应用提供研究基础。在尼罗罗非鱼(Oreochromis niloticus)养殖池塘水体中泼洒不同浓度
(对照组:0;试验组1:1.0×104 CFU/mL;试验组2:1.0×105 CFU/mL)的枯草芽孢杆菌,监测水质指标、鱼体免疫
及抗氧化指标,并用无乳链球菌(Streptococcus agalactiae)对罗非鱼进行人工攻毒。结果发现,试验组1 水体的氨
氮、亚硝酸盐氮、总磷均低于对照组,试验组2 水体在养殖后14 d 和21 d 的总磷含量及养殖后28 d 的氨氮含量
高于对照组,其他时间均低于对照组;亚硝酸盐氮含量在养殖后21 d 及35 d 低于对照组,其他时间均高于对照
组。试验组罗非鱼血清的溶菌酶(LZM)、过氧化物酶(POD)、碱性磷酸酶(AKP)、总超氧化物歧化酶(T-SOD)
活性及总抗氧化能力(T-AOC)和对照组相比均有不同程度的升高。试验组1 及试验组2 的累计死亡率分别为
42.22%、24.44%,显著低于对照组的81.90%。在养殖水体中泼洒适当浓度的枯草芽孢杆菌可以改善水质,提高罗
非鱼机体的免疫力、抗氧化能力,进而提高罗非鱼抗无乳链球菌病的能力。 相似文献
76.
77.
最近,党中央,国务院又做出了《关于切实减轻农民负担的决定》,全省上下正在认真贯彻落实。那么,在减轻农民负担过程中,当前要把握好以下几个关系: 相似文献
78.
王淼 《农产品加工.学刊》2005,(6):49-51
近年来,农业部提出特色农业是西部地区农业发展的重要方向,并编制了有关规划。请问什么是特色农业?为什么现在要提出在西部发展特色农业? 相似文献
79.
【目的】为探明引起禽白血病病毒K亚型(ALV-K)两不同毒株之间致瘤性差异的原因,进一步探索ALV-K的致病机理,实现两株ALV-K重组病毒感染性克隆的构建及病毒拯救。【方法】以前期构建的ALV-K毒株HB2018003和HB2015032的感染性克隆为模板,PCR扩增分别获取两毒株单独的5'-端长末端重复序列(5'-LTR)基因片段和剩余目的基因片段。切胶回收目的片段后将两毒株的5'-LTR互换,通过同源重组的方法获得连接产物。将连接产物转化大肠杆菌DH5α感受态细胞后涂布Amp抗性平板过夜培养,挑取PCR鉴定为阳性的菌落提取重组质粒TOPO-003-032和TOPO-032-003并送检测序。将PCR和测序鉴定正确的重组质粒转染至易感细胞DF-1中盲传3代,使用群特异性抗原P27 ELISA、多重 PCR和间接免疫荧光等方法对拯救的病毒进行检测。【结果】测序和重组感染性克隆PCR鉴定的结果表明成功构建了5'-LTR互换的重组质粒,多重PCR结果显示在目的片段大小处出现ALV-K预期条带,未出现ALV-A和ALV-J条带,间接免疫荧光试验结果显示接种拯救病毒的DF-1细胞出现明显的亮绿荧光,阴性对照则没有出现荧光。综合以上结果,说明两株重组病毒拯救成功,并将其分别命名为rHB2022050(TOPO-032-003)和rHB2022051(TOPO-003-032)。【结论】本研究采用同源重组的方法构建了5'-LTR互换的感染性克隆TOPO-003-032和TOPO-032-003,并成功拯救出病毒rHB2022050(TOPO-032-003)和rHB2022051(TOPO-003-032)。 相似文献
80.
研究旨在探讨地膜覆盖在不同砧穗组合上的应用。以2年生苹果砧穗组合(华硕/M9-T337、瑞雪/M9-T337)为试验材料,研究不同砧穗组合苹果苗木地膜覆盖的效果。结果表明:(1)华硕/M9-T337地膜覆盖后苗木高度、粗度分别增加了14.41%、13.5%,分枝长度和分枝粗度分别提升了60.4%、22.6%,最低分枝高度上升了6.4%。(2)瑞雪/M9-T337地膜覆盖后苗木高度提升了6.9%,苗木粗度、分枝粗度和最低分枝高度均有升高,但总体生长与不覆膜相比差异不显著。(3)地膜覆盖可抑制杂草生长,降低苗木管理成本,减少费用948.5元/667m2。综合分析表明,地膜覆盖利于不同砧穗组合苗木生长,提高了苗木质量,建议苹果大苗培育过程采用地膜覆盖技术。 相似文献