锦鲤疱疹病春主要囊膜蛋白基因的PCR扩增与序列分析   总被引：1，自引：0，他引：1       下载免费PDF全文

谭爱萍  邹为民  赵飞  姜兰  陈信廉  劳海华  简清  陆小萏  罗理 《中国水产科学》2008,15(5)

为了进一步研究锦鲤疱疹病毒主要囊膜蛋白(KHV-MEP)的功能及锦鲤疱疹病毒(KHV)的感染机制,根据KHV-MEP基因序列设计并合成1对引物,从自然感染KHV发病的锦鲤(Cyprinus carpio Koi)肝组织总DNA中扩增获得特异性基因片段.将所得基因片段克隆到pMD18-T Simple Vector载体中,获得重组质粒T-KMEP;酶切鉴定后进行序列测定,并采用氨基酸亲水性分析软件Tmpred对其编码氨基酸序列进行分析;在对该片段所编码氨基酸可能抗原位点分析的基础上,进行PCR改造构建原核表达载体,获得重组表达载体pBV-KMEP1和pBV-KMEP2.所获得的基因片段大小为771 bp,该基因片段与GenBank中已登录的KHV-MEP基因(AB178537)的同源性为100%,是一个完整的开放阅读框,所编码的蛋白由256个氨基酸组成,分子量为28.2kD,等电点(PI)为8.65.该序列含有4个跨膜区,可构成主要抗原决定簇.结果显示所获得的目的基因片段就是锦鲤主要囊膜蛋白全基因.  相似文献   

草鱼线粒体细胞色素b基因的克隆与序列分析   总被引：8，自引：1，他引：8       下载免费PDF全文

叶星  白俊杰  劳海华  简清  罗建仁 《中国水产科学》2002,9(3):193-197

用DNAExtractionKit提取草鱼(Ctenopharyngodonidella)肝脏的总DNA,合成特异引物,进行PCR扩增。扩增产物经琼脂糖电泳检测、纯化后克隆到pGEM Teasyvectorsystem的T载体上,筛选转化子,提取质粒,酶切鉴定。重组质粒序列测定的结果显示克隆了草鱼线粒体细胞色素b(cytb)基因1140个碱基及两侧部分序列共1254bp。用DNA分析软件VectorNTI6.0比较草鱼与GenBank中18种鱼类cytb的序列,显示草鱼与它们的cytb基因具有较高的同源性;根据草鱼与这18种鱼的cytb基因序列同源性所建立的进化树,与传统的分类地位基本吻合。  相似文献   

剑尾鱼微卫星DNA的筛选   总被引：19，自引：4，他引：19       下载免费PDF全文

李霞  白俊杰  吴淑勤  叶星  劳海华  简清 《中国水产科学》2004,11(3):196-201

以剑尾鱼(Xiphophorus helleri)为材料,经MboⅠ限制性内切酶消化基因组DNA后,选取500～2 000 bp的片段连接到经BamHⅠ酶切的pUC18载体上,转化大肠杆菌DH5α构建部分基因组文库.采用设计合成的(AC)7、(GT)7重复序列为引物,PCR筛选部分基因组文库,对其中9个重组阳性克隆进行测序,结果共获得24个微卫星序列,其中Perfect(完美型)13个,占54.2%;Imperfect(非完美型)3个,占12.5%;Compound(混合型)8个,占33.3%.表明(AC/GT)n在剑尾鱼的基因组DNA中含量非常丰富.同时,根据其中3个克隆微卫星的侧翼序列设计引物,PCR扩增剑尾鱼基因组DNA,结果均扩增到目的片段.而且,这3对引物扩增出来的微卫星片段在非选育的剑尾鱼中显示出多态性,而在近交系19代则表现为单态,为剑尾鱼的实验动物化遗传研究提供了理论依据.  相似文献   

月鳢、斑鳢Cyt b基因序列分析与比较     

白俊杰  劳海华  叶星  简清  罗建仁 《农业生物技术学报》2003,11(3):325-326

Cyt b基因在进化过程中受到的选择压力较小，具有较快的进化速率，加上容易使用一些通用引物进行扩增和测序，非常适合进行种间系统进化的分析，近年来被广泛应用于鱼类的系统分化和分子分类的研究。月鳢和斑鳢均属鲈形目，鳢科鱼类，是我国南方名贵的水产养殖品种，有着类似的形态特征和相似的生活习性，在生产上人们常将它们统称为乌鱼。在分类上曾将月鳢和斑鳢分属在不同的属，月鳢为月鳢属(Channa)，斑鳢为鳢属(Ophiocephalus)。为了从分子水平研究这两种鱼的亲缘关系，本研究测定了月鳢和斑鳢线粒体Cyt b全基因测序，并进行了比较和分析。  相似文献   

8种随机引物扩增鳜鱼病毒核酸的初步研究   总被引：4，自引：0，他引：4  

李新辉  吴淑勤  李凯彬  白俊杰  潘厚军  罗建仁  简清 《大连水产学院学报》2001,16(1):57-60

从感染鳜鱼病毒（Siniperca chuatsi virus)的鳜鱼中分离病毒，提纯核酸作模板，用8种带酶切位点的引物，进行病毒酸随机扩增，探讨了在多聚酶链反应（RCR）过程中，引物长度，Mg^2 浓度和生温度对获得扩增带谱的影响。  相似文献   

罗非鱼β-肌动蛋白基因启动子的分离及其转录启动功能检测     

郁二蒙 叶星王海英  白俊杰夏仕玲  劳海华简清 《农业生物技术学报》2008,16(2)

采用高保真PCR技术从尼罗罗非鱼（Oreochromis niloticus）基因组中分离了β-肌动蛋白（β-actin）基因片段。序列分析显示该片段包括长为1643bp的β-肌动蛋白（β-actin）基因5,端侧翼区的启动调控区和90bp的部分转录区序列。启动调控区包括一段长为108bp的β-actin基因上游调控序列、β-actin基因不翻译的第一个外显子和第一个内含子。上游调控序列中含有与转录活性密切相关的作用元件：CAAT Box,TATA Box和CArG Box,分别位于转录起始位点上游的-92,-29,-62处。将尼罗罗非鱼β-actin基因的启动调控区定向克隆到不含启动子的红色荧光表达载体pDsRed2-1中,构建了重组荧光表达载体。重组载体经EcoRⅠ线性化后,采用显微注射技术将其注射到唐鱼的受精卵中,利用荧光显微镜观察外源基因增强型红色荧光蛋白基因（DsRed2）在唐鱼中的表达。结果表明在荧光显微镜下以及普通解剖镜下均可观察到红色荧光,说明本实验分离到的罗非鱼β-actin基因启动子序列具有有效的驱动功能。该实验为下一步进行转自源基因尼罗罗非鱼的研究奠定了基础。  相似文献   

鲑鱼生长激素cDNA在大肠杆菌中的表达及表达产物对罗非鱼促？…   总被引：5，自引：0，他引：5  

白俊杰  简清 《农业生物技术学报》1998,6(4):343-346

采用聚合酶链反应（ＰＣＲ）技术在对鲑鱼生长激素ｃＤＮＡ进行改造。将改造后的基因克隆到大肠杆菌表达质粒ｐＢＶ２２０,构建重组鲑鱼生长激素基因表达质粒ｐＢＶＧＨ１８,并在大肠杆菌中获得表达,表达量约占细胞可溶性总蛋白的１０％。表达产物经初步纯化和复性后作为饲料添加剂投喂罗非鱼,具有明显的促生长作用。  相似文献