具群体感应抑制作用短小芽孢杆菌F3-1菌株的诱变育种          下载免费PDF全文

彭孟凡  范斌  张庆华  宋增福 《南方农业学报》2018,49(7):1423-1431

[目的]获得群体感应(QS)信号分子降解能力更强的突变短小芽孢杆菌(Bacillus pumilus),增强其在水产细菌性病害防治中的效果,为水产养殖业利用细菌QS淬灭机制防治细菌性疾病提供借鉴.[方法]以具有降解QS信号分子特性的短小芽孢杆菌F3-1为出发菌株、紫外线和亚硝酸钠(NaNO2)为诱变剂进行诱变选育;以紫色杆菌(Chromobacteria violaceum ATCC12472)为报告菌株筛选正向突变,经连续传代25代后测定其遗传稳定性;采用单因素试验测定培养时间、pH、盐度和温度对突变菌株降解QS信号分子能力的影响,同时通过扩增QS抑制基因aiiA及SDS-PAGE分析验证突变菌株的蛋白表达情况.[结果]两种诱变方法共获得205株突变菌株,以紫色杆菌为报告菌株通过紫外诱变筛选出具有QS抑制作用的正向突变株4株,编号分别为FF1-2、FF3-2、FF3-3和FF4-1.其中,突变菌株FF1-2的蛋白产量达47.48±2.87μg/mL,约是出发菌株F3-1的3.12倍,对紫色杆菌的褪色圈直径是出发菌株F3-1的2.96倍,抑制紫色素的能力较出发菌株F3-1提高64%,说明该突变菌株具有很强的QS抑制能力;连续传代25代后,突变菌株FF1-2的产蛋白能力及对紫色素的抑制作用无显著变化(P>0.05).突变菌株FF1-2在培养时间为40 h、温度30℃、盐度0.5%、pH 7.0时,紫色素褪色效果最佳.从出发菌株F3-1和突变菌株FF1-2中均能扩增获得753 bp的aiiA基因,且通过SDS-PAGE分析验证二者在28 kD处均呈现出特异条带.[结论]采用诱变育种技术筛选得到的突变菌株FF1-2能显著提高QS抑制能力,且该抑制能力能稳定遗传,即通过诱变育种技术提高短小芽孢杆菌的产酶量及酶活力具有可行性.  相似文献   

不同杀菌剂对思州柚贮藏期间保鲜效果的影响     

李佳林  黄胜先  范斌  李星  王正文  谌金吾 《安徽农业科学》2019,47(20)

为提高思州柚果实的贮藏保鲜效果,减少贮藏病害的发生,提高种植户的经济效益,通过室内试验筛选5种用于思州柚保鲜的杀菌剂。结果表明,5种杀菌剂在常规剂量范围内对思州柚贮藏期间的抑制病害发生和保水效果均有一定作用,其中阿泰灵(寡糖·链蛋白)保鲜效果最佳,贮藏时间长,其次为精甲·咯·嘧菌和抑霉唑。因此,阿泰灵可作为思州柚贮藏保鲜的推选药剂。  相似文献   

HPLC法测定仔猪止痢口服液中葛根素的含量     

李勇军  卜仕金  于生兰  张成  范斌 《中兽医医药杂志》2008,27(1):41-43

仔猪止痢口服液为葛根、藿香、板蓝根等中药组成的复方制剂，具有解肌清热、化湿止泻功能。主治仔猪黄白痢及其他原因引起的腹泻。该法以仔猪止痢口服液中的君药葛根所含主要活性成分葛根素为指标。采用HPLC法对其含量进行测定。经稳定性、精密度、重现性、回收率等实验研究表明，本法不仅简便易行，且灵敏度高，重现性好。  相似文献   

西瓜设施栽培连作病害枯萎病防治技术研究     

蔡贞  姚春霞  周瑛  范斌  陆建忠  徐益章 《江苏农业科学》2005,(3):69-70,97

为防治西瓜连作病害枯萎病,在上海市唐镇农业示范基地3年西瓜重茬的大棚内,进行了西瓜连作障碍防治技术研究。结果表明,应用西瓜嫁接防病技术示范区未见枯萎病发生;选择目前市场上6种常用的土壤处理剂,对作物安全,保产效果显著;高温闷棚有一定效果,但不明显。  相似文献   

海藻提取物对茶树抗寒性的影响研究     

于敏  范斌  袁奇军  侯剑  于淑华  韩晓阳  黄晓琴 《茶叶通讯》2021,48(4):652-662

以海藻提取物为外源喷施物质,研究分析了海藻提取物可能含有的组分及低温下海藻提取物对茶树生理特性及相关基因的表达规律.结果表明,海藻提取物可能含有蛋白质、不饱和脂肪酸、甾体和糖类等物质;喷施海藻提取物,茶树叶片厚度、栅栏组织、海绵组织厚度均显著大于对照(p<0.01),栅栏组织和海绵组织比率增加.喷施海藻提取液20 d和40 d后叶绿素含量分别显著提高68.85％和97.88％,叶绿素降解缓慢,叶绿素荧光参数Fv/Fm、qP、NPQ、ETR显著大于清水(p<0.01),减轻了低温对叶片带来的光抑制破坏,同时刺激茶树体内SOD、POD和CAT酶活性的增强(p<0.01).低温胁迫下海藻提取物组处理涉及茶树体内糖代谢、脂肪酸代谢、转运蛋白以及冷诱导相关基因均显著上调表达.海藻提取物能够显著提高茶树的低温耐受能力,对降低低温逆境对茶树的危害具有实际的应用价值.  相似文献   

核酸适体在乳及乳制品检测中的应用     

张亚丽  牛立沙  赵丽敏  范素芳  黄云霞  张岩  范斌 《乳业科学与技术》2020,43(5):43-48

核酸适体技术是新型检测技术，因其特异性、高亲和性、快速、低成本等众多优点被广泛应用于乳及乳制品等动物源食品安全检测领域。本文对核酸适体筛选技术的原理和类别进行介绍，并对其在乳及乳制品中添加剂、激素、抗生素残留、真菌毒素、病原微生物污染检测等方面的应用和研究进展进行综述。  相似文献   

思州柚园黑蚱蝉若虫羽化空间分布型及羽化过程     

黄胜先  李佳林  范斌  谌金吾  李星  王正文 《江苏农业科学》2020,48(10):121-124

黑蚱蝉是危害柚树的主要害虫之一,观察黑蚱蝉羽化过程并应用5个聚集指标及Iwao回归分析法、Taylor幂法则对黑蚱蝉羽化的空间格局进行研究,可为该虫的危害调查与防治提供理论依据。结果表明,黑蚱蝉若虫羽化垂直分布规律为柚树1～2 m处的羽化虫数占总羽化虫数的48.30%,2 m以上的占34.00%,1 m以下的占17.70%;羽化空间分布型格局的5个聚集指标分别表现为I(丛生指标)0,m~*/m(聚块性指标)1,C_A(聚集度指标)0,C(扩散系数)1,k(负二项分布指标)0,因此,黑蚱蝉若虫羽化在思州柚树上呈聚集分布,个体间相互吸引,分布的基本成分为个体群;黑蚱蝉羽化过程包括羽化地点选择、壳裂、出壳、展翅、晾翅等5个阶段,时间大约为4 h。  相似文献   

兰州市区地热水地球化学特征分析     

马宝强  张凌鹏  范斌  孟华  蒲万旭 《干旱区资源与环境》2019,33(9):125-132

兰州市区地处民和-兰州坳陷盆地东端的中生代断陷盆地内。盆地内断裂构造发育,为地热水的形成创造了有利条件。文中基于兰州城区地下热水的水化学基本特征,评价了地热水的结垢趋势与腐蚀性,以地球化学温标法估算了地热水热储温度,分析了地热水的同位素特征,探讨了水化学成因。兰州城区地热水的温度为37-74℃,矿化度3.89-45.93g/L,属于中低温高矿化度水热资源,水化学类型以Cl-Na型和Cl-Na·Ca型为主,且富含锶、偏硅酸等特殊组分。地热水来源于兰州市城区西南一带的早白垩系砂岩、砾岩等出露区的大气降水补给。  相似文献   

马疱疹病毒1型主要毒力基因分析及TK基因缺失载体的构建     

范斌  陈卓  刘建华  鲍子磊  胡月  贾钦瑞  王雪竹  冉多良 《中国畜牧兽医》2018,(10)

为了解新疆马疱疹病毒1型(EHV-1)主要毒力基因遗传进化情况并构建TK基因缺失株,本研究以EHV-1XJ2015株DNA为模板,对其主要毒力基因TK、gI和gE全长进行克隆、测序及生物信息学分析,并扩增TK基因左右重组臂TKL和TKR,构建质粒pUC-TKLR,将扩增后的增强绿色荧光蛋白(EGFP,含有CMV+polyA)插入pUC-TKLR质粒,构建TK基因缺失打靶质粒。TK、gI和gE基因同源性分析结果显示,XJ2015株与国外EHV-1分离株TK、gI和gE基因同源性均较高,分别为99.8%~100.0%、99.6%~100.0%和99.9%~100.0%;与EHV-3分离株同源性均最低,分别为72.9%、59.4%和62.1%;遗传进化分析显示,3个基因均与国外EHV-1同属于一个遗传进化分支,与EHV-9和EHV-4进化关系较近,但与EHV-3进化关系较远,表明XJ2015毒株与国外EHV-1毒株TK、gI、gE基因核苷酸上差异不明显,没有明显的地域性特征,功能基因保守且进化缓慢,同源基因功能相同或相近;经PCR扩增、酶切、测序及转染鉴定,本试验成功构建了用于TK基因缺失的打靶质粒pUC-TKLR-EGFP。通过对EHV-1主要毒力基因的分析及TK基因缺失打靶载体的构建,为新疆地区马鼻肺炎流行病学调查分析、TK基因缺失株的构建提供理论依据。  相似文献   

副溶血性弧菌7种保藏方法比较     

张永华  李怡  范斌  宋增福  张庆华 《江苏农业科学》2012,40(10)

采用7种不同方法对副溶血性弧菌的保藏效果进行研究,以菌种的保藏时间、存活率、生物学特性及毒力指标比较保藏效果.结果表明:保藏时间由长到短依次为:冷冻真空干燥保藏法＞-20℃脱脂牛奶保藏法＞室温液体石蜡保藏法＞4℃液体石蜡保藏法＞-20℃甘油保藏法＞室温斜面保藏法＞4℃斜面保藏法.7种方法保藏前后,副溶血性弧菌革兰氏染色,氧化酶,0 NaCl、4％ NaCl及10％ NaCl盐度生长试验,TCBS培养基上生长性状及溶血性试验等基本生物学特性均无影响.冷冻真空干燥法毒力稳定,其他保藏方法超过12个月后毒力出现不同程度的下降.采用室温斜面法保藏2个月,菌种生物学特性和毒力均稳定,操作最简便,适宜短期保藏;采用冷冻真空干燥法保藏24个月以上,或采用-20℃脱脂牛奶法保藏20个月,菌种生物学特性均稳定,这2种方法适宜长期保藏.  相似文献