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罗氏沼虾野田村病毒（Macrobrachium rosenbergii nodavirus, MrNV）和双顺反子病毒（M. rosenbergii dicistrovirus, MrDV）是已报道对罗氏沼虾易感的主要致病性病毒,该研究通过建立双重RT PCR方法对MrDV和MrNV两种病毒同时进行检测。根据MrDV和MrNV基因组序列的保守区分别设计特异性引物,并对双重PCR的退火温度和引物浓度进行优化,在获得优化反应体系和反应条件后,对罗氏沼虾样品进行检测。结果表明,双重PCR最佳退火温度为60 ℃,反应体系最佳引物终浓度MrNV384为0.1 μmol/L,MrDV472为0.05μmol/L,对病样总RNA的最低检测限为360 fg。引物的特异性检测表明,该检测方法对TSV、WSSV、IHHNV和嗜水气单胞菌TPS 30基因组无交叉反应。对阳性样品的病毒扩增序列分析表明,MrDV RNA依赖性RNA聚合酶编码区序列无变异,MrNV RNA2序列存在较多变异,进化树结果表明2011年长三角的MrNV病毒主要来自于中国基因型和东南亚基因型。该方法的建立为罗氏沼虾病毒性疾病的预防和种苗的繁育奠定了基础。 相似文献
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从大黄鱼致病菌哈维氏弧菌(Vibrio harveyi)GYC1108-1株提取外膜蛋白(OMP)、脂多糖(LPS)和胞外产物(ECP),并进行毒性实验,以研究哈维氏弧菌的主要致病因子及其特征.结果表明:OMP、LPS致病性较弱,而ECP可导致鱼死亡,初步得出哈维氏弧菌GYC1108-1株的主要致病因子为胞外产物,其对鱼的半数致死量(LD50)为3.5 μg·g-1;该蛋白酶与底物偶氮酪蛋白(azocasein)作用的最适pH为8.0,最适温度28℃,对热敏感,分子质量为55 ku;该酶活性被碘乙酸抑制,也被SDS和HgCl2完全抑制,PMSF和ZnCl2能部分抑制该蛋白酶活性,而CuCl2、CaCl2、MgCl2对该酶活性影响不大,2-巯基乙醇、DTT、L-半胱氨酸、EDTA和EGTA对该酶活性有促进作用,表明其为半胱氨酸蛋白酶;研究发现ECP具有酪蛋白酶、明胶蛋白酶、淀粉酶、卵磷脂酶和脂肪酶活性,无脲酶活性;免疫印迹结果发现GYC1108-1的ECP能与大黄鱼抗GYC1108-1血清发生免疫发应,分子质量为55 ku的半胱氨酸蛋白酶是具有免疫原性的物质. 相似文献
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采用血清学试验和RT-PCR方法从华东地区家养水禽中分离鉴定出多株H10亚型禽流感病毒，对其中1株A／Duck／Yangzhou／502／2003（简称Dk／YZ／502／03）的血凝素（HA）基因进行了序列测定，并与GenBank中登录的其他序列进行了比较。结果显示，Dk／YZ／502／03株血凝素基因与哺乳动物水貂分离株A／Mink／Sweden／84（H10N4）的同源性最高；其推导的氨基酸剪切位点序列为P-E-I-M-Q-G-R，为典型低致病性禽流感病毒的特征序列，这与该毒株对SPF鸡和BALB／c小鼠的低致病特性相吻合。 相似文献
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为研究马口鱼不同生长阶段肠道菌群的结构差异,找出影响肠道菌群结构差异的因素。采用Illumina Hiseq2500高通量测序技术分析了2月龄、5月龄、9月龄的马口鱼肠道菌群结构,并对2月龄、5月龄、9月龄马口鱼的生长性能和养殖水质进行了检测。生长性能检测结果显示：从体重来看,2月龄、5月龄、9月龄马口鱼呈递增关系,但2月龄、5月龄存在显著性差异,5月龄、9月龄马口鱼无显著性差异;从体长来看,2月龄、5月龄、9月龄马口鱼也呈递增关系,2月龄、5月龄、9月龄马口鱼之间均存在显著性差异;从肥满度来看,5月龄与2月龄、9月龄马口鱼均存在显著性差异,2月龄、9月龄马口鱼无显著性差异,2月龄、5月龄、9月龄马口鱼呈先增长后下降关系。养殖水质检测结果显示：2月龄、5月龄、9月龄马口鱼养殖水质pH值和养殖水温均有显著性差异,2月龄、5月龄马口鱼的溶解氧无显著性差异;2月龄、9月龄马口鱼溶解氧存在显著性差异,5月龄、9月龄马口鱼溶解氧存在显著性差异。微生物分析描述物种丰富度的指标中,从ACE来看,2月龄、5月龄马口鱼存在显著性差异,而9月龄和2月龄、5月龄马口鱼均无显著性差异;从Chaol指数来看,2... 相似文献
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2008年6月从湖州某患病草鱼池塘采集草鱼出血病疑似病样,将除菌过滤后的患病鱼肝、脾、肾组织滤液,注射健康的8～10 cm的草鱼鱼种.5d后草鱼开始发病,且症状与原发病症状一样,死亡率为57%,对照组未有死亡.将无菌处理的病样滤液接种草鱼肾细胞(CIK),连续接5代均出现明显的细胞病变(CPE),并与草鱼呼肠孤病毒参考株所产生的CPE一致.该株病毒的TCID50为10-8/0.1ml.内脏组织经超薄切片,电子显微镜观察,发现组织内有大量的病毒颗粒,大小均一,近似球形,直径约70～75 nm.理化鉴定表明,氯仿、乙醚处理组病毒的感染力和对照组相比并没有多大变化,说明该株病毒对氯仿和乙醚有一定的抗性.经草鱼呼肠孤病毒特异性的RT-PCR检测,获得阳性的目的片段,测序的结果与草鱼呼肠孤病毒相应序列的同源性达99%以上.上述鉴定结果表明所分离的病毒为草鱼呼肠孤病毒,将其命名为HZ2008. 相似文献
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中华鳖爱德华菌病病原菌的分离鉴定及致病因子研究 总被引：1，自引：0，他引：1
采用API 20E系列生化鉴定及16S rDNA和gyrB基因序列同源性分析方法,对从患病中华鳖(Trionyx sinen-sis)肝脏中分离到的一株细菌TL5m进行了鉴定,并通过人工感染试验,对该菌株进行了毒力检测;此外分别提取该TL5m株的主要致病因子外膜蛋白、脂多糖和胞外产物,对中华鳖进行毒力和免疫保护率试验。结果显示:菌株TL5m的API 20E鉴定编码为4544000,99.9%为迟钝爱德华氏菌(Edwardsiella tarda);其16SrDNA序列和gyrB基因序列(GenBank登录号分别:EF121756和GU563803)与迟钝爱德华氏菌的同源性最高(分别为94%和98%);菌株TL5m对中华鳖的半数致死量LD50为2.45×106 CFU/ind。药敏感结果显示菌株对磷霉素、菌必治、头孢孟多、头孢噻吩、壮观霉素高度敏感。外膜蛋白攻毒剂量60μg/ind和脂多糖攻毒剂量400μg/ind时,对中华鳖的致死率都为33.3%,胞外产物对中华鳖的LD50为31.73μg/ind;全菌灭活苗、胞外产物、外膜蛋白和脂多糖的免疫保护率分别为75%、62.5%、25%和87.5%。结果表明,发病中华鳖的病原菌为迟钝爱德华氏菌,其分泌的胞外产物对中华鳖具有较高毒力;提取的脂多糖对中华鳖遭受迟钝爱德华氏菌攻击具有较高免疫保护率。 相似文献