伪狂犬病病毒在NF-κB家族p65基因敲除细胞系的复制规律研究     

常雯茹  段利芳  杨乐  马英先  王棋  翟云云  周鲁豫  张爽  明胜利  杨国宇  王江  褚贝贝 《中国畜牧兽医》2021,48(1):83-92

试验旨在研究伪狂犬病病毒（PRV）在NF-κB家族p65基因敲除细胞系中的复制规律。利用慢病毒介导的CRISPR/Cas9基因定点修饰技术构建猪肺泡巨噬细胞（3D4/21）p65基因稳定敲除细胞系。通过构建p65-sgRNA重组质粒,转染至HEK293T/17细胞,收取慢病毒,感染3D4/21细胞后利用嘌呤霉素筛选获得多克隆细胞系,T7核酸酶检测敲除效率,再通过有限稀释法获得3D4/21-p65^-/-的稳定细胞系。CCK-8试剂盒检测3D4/21细胞中敲除p65基因后对细胞增殖的影响;流式细胞术检测PRV-GFP感染3D4/21及3D4/21-p65^-/-细胞后病毒增殖的差异;实时定量PCR检测PRV感染3D4/21及3D4/21-p65^-/-细胞后PRV gB、TK基因mRNA表达水平及PRV感染细胞诱导的IL-1β和IL-6基因mRNA水平表达的变化;Western blotting检测PRV-QXX感染3D4/21及3D4/21-p65^-/-细胞后PRV gB、gE蛋白的表达;滴度测定检测PRV-QXX感染3D4/21及3D4/21-p65^-/-细胞后子代病毒滴度。结果表明,sgRNA2和sgRNA3的基因编辑效率较高,对其进行克隆化培养进而获得敲除p65基因的稳定表达细胞系;CCK-8试剂盒检测细胞活力表明,p65基因敲除对细胞活力无影响;流式细胞仪检测表明,同一时间点PRV-GFP在3D4/21-p65^-/-中的增殖显著高于对照细胞;实时荧光定量PCR表明在3D4/21细胞中敲除p65基因促进了PRV gB、TK基因的mRNA表达水平,而抑制了IL-1β、IL-6基因的mRNA表达;Western blotting结果表明,在3D4/21细胞中敲除p65基因促进了PRV gB、gE蛋白的表达;滴度测定结果表明,同一时间点PRV-QXX在3D4/21-p65^-/-细胞中子代病毒的复制显著高于对照细胞。以上结果均表明,p65基因敲除可促进PRV在3D4/21细胞中复制。  相似文献   

外源肌苷酸对种鸡产蛋性能、蛋品质及种蛋孵化性能的影响     

牛自康  吴乐  张鑫蕊  叶成智  宦海琳  张峰  魏明星  闫俊书 《中国畜牧兽医》2021,(1)

本试验通过在种鸡的基础饲粮中加入肌苷酸(IMP)来研究其对种鸡产蛋性能、蛋品质和种蛋孵化性能的影响。选择遗传背景相同、体重相近,产蛋率达到5%的20周龄健康AA种鸡864羽,随机分为2组(对照组饲喂基础饲粮;试验组饲喂基础饲粮+0.5%肌苷酸),每组6个重复,每个重复72羽,试验期30 d。测定试验期间所有种蛋的平均蛋重、产蛋率和合格蛋率;每组随机选取部分种蛋进行蛋品质测定;于孵化开始第17天,通过照蛋处理统计种蛋受精率,第21天出雏时,计算受精蛋孵化率、入孵蛋孵化率和健雏率。试验结果表明:与对照组相比,试验组种鸡的平均蛋重、产蛋率和合格蛋率均有升高的趋势,但差异不显著(P>0.05);蛋形指数显著升高(P<0.05),蛋壳强度、蛋壳厚度和蛋黄颜色显著降低(P<0.05);受精率、受精蛋孵化率和入孵蛋孵化率显著升高(P<0.05),健雏率和雏鸡体重有升高的趋势,但差异不显著(P>0.05)。综上,0.5%外源肌苷酸对种鸡的产蛋性能和种蛋孵化性能均有促进作用。  相似文献   

Influence of four soil maintenance practices on Collembola communities in a Mediterranean vineyard   总被引：1，自引：0，他引：1  

Anglique Renaud  Nicole Poinsot-Balaguer  Jrme Cortet  Jean Le Petit 《Pedobiologia》2004,48(5-6):623-630

We studied the influence of four soil maintenance practices on Collembola communities in the soil of a Mediterranean vineyard: (a) postemergence herbicide with glyphosate; (b) postemergence and pre-emergence herbicides with glyphosate, terbuthylazine, diuron and oryzalin; (c) natural flora and (d) tillage to a depth of 10–15 cm. Total Collembola abundance, species diversity and species richness significantly varied between the four practices. Notably, the practice using postemergence and pre-emergence herbicides had significantly lower values. Identification of Collembola at species level allowed an interspecies comparison and revealed significant differences for the most common species between the four practices, with each practice being characterized by a different set of species. None of the species were found to be significantly more abundant in the plots treated with postemergence and pre-emergence herbicides.  相似文献   

内蒙古红豆草黄萎病菌的分离鉴定及其生物学特性     

刘宇萱  王乐  张园园  徐林波  赵君 《中国草地学报》2021,(3)

依照柯赫氏法则,利用形态学结合分子生物学的方法首次对内蒙古自治区呼和浩特市中国农科院草原研究所沙尔沁基地红豆草疑似黄萎病的病样进行分离和鉴定,利用蘸根接种法对病原菌的致病性进行测定。同时,首次在室内条件下对病菌的生物学特性,如生长最适温度、酸碱度以及碳源、氮源对病原菌生长速率和产孢量的影响进行了研究。结果表明,引起沙尔沁基地红豆草黄萎病的病原菌为大丽轮枝孢菌,菌株具有较宽的温度和酸碱度适应范围,最适于菌株生长和产孢的温度均为25℃,最适于菌株生长和产孢的pH值范围分别为7~10和5~6。在碳源选择上,大丽轮枝孢菌在可溶性淀粉上的生长速度最快,而蔗糖最有利于其产孢。在氮源选择上,大丽轮枝孢菌在牛肉膏和L-脯氨酸上的生长速度较快,且L-脯氨酸最有利于其产孢。  相似文献   

离心除精浆对提高冷冻精液品质的作用     

姬云涛屈长青  曹斌云 《中国农学通报》2005,21(11):9-12,32

采用离心洗涤法去除精浆后,对精液进行冷冻处理。发现:1、除精浆精子冻后的活率、Ⅰ类顶体率和精子畸形率与未除精浆组存在显著差异(P<0．05);2、除精浆使稀释后精液精浆中GOT和LDH活性明显升高(P<0．05)。从平衡后到解冻后各组GOT和LDH活性都呈上升趋势。但除精浆试验组比未除精浆试验组上升缓慢;3、除精浆试验组精子的穿卵率、卵内平均精子数都显著高于未除精浆试验组(P<0．05);4除精浆离心洗涤液用生理盐水和脱脂乳-卵柠液．两者之间无显著差异(P>0．05)。  相似文献   

以沼气为纽带的西藏农牧业清洁生产模式研究   总被引：1，自引：0，他引：1  

孙全平  刘国一  马瑞萍  杨素涛  曲航 《农机化研究》2015,(7):244-247

为了解决因长期不合理施用化肥导致的西藏土壤理化性状、营养元素、有机物质、生物学活性和重金属含量等问题,提出了以沼气为纽带的西藏农牧业清洁生产的3种模式,均以沼肥综合利用促进沼气发展为目标的,集养殖、沼气、种植为一体的循环农牧业清洁生产模式。同时,阐述了农牧业清洁生产的内涵和目标,以及西藏发展农牧业清洁生产的条件、模式、存在的问题及解决对策,为解决长期不合理施用化肥而导致的一系列问题提供思路。该研究有利于实现资源循环利用,实现生态农业与无公害农产品的生产,保护农牧区生态环境,促进西藏农牧业的可持续发展。  相似文献   

Production and Identification of Clone Sheep Using Bone Marrow Mesenchymal Stem Cells as Donor Cell     

GUO Yuan  LIU Zong-zheng  LIU Le  MENG Fan-hua  ZHANG Yan-ru  ZHOU Huan-min  LIU Chun-xia 《中国畜牧兽医》2016,43(11):3011-3018

In order to obtain the cloned sheep using bone marrow mesenchymal stem cells（BMSCs）as the donor cells,the BMSCs of sheep were chosen and reconstructed embryos were built to transfer.10 published microsatellite markers were chosen,and the DNA samples from clone sheep,donor cells and surrogate ewes were amplified,and the relationship of father-son（RCP）was analyzed using the Quantity One for genotyping.The results showed that the reconstructed embryos were successfully built for electric fusion using sheep BMSCs as nuclear donor,and making nuclear transplantation into enucleated mature oocytes of which the fusion rate was 80.62%.20 surrogate ewe were chosen to be implanted with the reconstructed embryos at morula stage by implant surgery,and 5 lambs were born and only 3 were survived.The genotype of cloned sheep was in line with the dornor cell and the RCP were more than 99.999%.In conclusion,the first clone sheep were obtained successfully by using BMSCs as a nuclear donor in this experiment.  相似文献   

Synthesis,insecticidal activity,and ensembled docking of nitroguanidines bearing S- and R-proline     

Alfredo Rodríguez-Hernández  Israel Bonilla-Landa  Abraham Vidal-Limon  Arturo Ibarra-Juárez  Felipe Barrera-Méndez  Francisco Javier Enríquez Medrano  Ramón E. Díaz de León  José Luis Olivares-Romero 《Pest management science》2023,79(5):1912-1921

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山东省沂南县动物强制免疫“先打后补”现状分析     

高凤华  马荣正  赵万兵  屈金涛  聂伟  李安宁  黄新强  谢有莲  王学新  宋善友  张世强 《中国动物检疫》2023,40(1):68-71

2021年,沂南县推进动物疫病强制免疫“先打后补”工作,依托“鲁牧云”信息平台,通过强化组织领导,加强政策宣贯,强化人员培训,放开强免疫苗经营渠道,提供抗体检测无偿服务等措施,提升了养殖场户“先打后补”的积极性、自主性、灵活性,强化了养殖场户动物防疫主体责任,满足了养殖场户疫苗多样化需求。但由于 “先打后补”补助金额少、社会化服务不规范、基层动物防疫体系弱化、缺少配套工作经费等原因,部分养殖场户实施“先打后补”的积极性不高。建议通过规范社会化服务组织,强化培训水平,提高补助标准,强化三级（县乡村）基础设施建设,升级“鲁牧云”等措施,确保“先打后补”政策惠及更多养殖场户。  相似文献   

[r,s,t] -Coloring of the Bipatite graph     

GONG Qu  ZHANG Xin-jun 《保鲜与加工》2007,(12):95-97

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