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旨在初步探究非洲猪瘟病毒(African swine fever virus,ASFV)多基因家族MGF360-13L基因的功能。使用生物信息学软件对MGF360-13L基因进行分析;构建真核表达质粒pVAX1-MGF360-13L并转染至293T细胞进行表达;利用同源重组方法构建基因缺失毒株ASFV-ΔMGF360-13L,以相同的感染复数(MOI=0.01)在猪肺泡巨噬细胞(PAMs)中感染基因缺失毒株和亲本毒株(ASFV CN/GS/2018)后,利用红细胞吸附试验(HAD)计算病毒滴度并绘制体外生长曲线;以MOI=1将ASFV-ΔMGF360-13L和ASFV CN/GS/2018分别感染猪骨髓巨噬细胞(BMDM),利用qPCR和ELISA测定细胞炎性因子IL-1β、IL-6和TNF-α的表达水平。结果表明,MGF360-13L基因在ASFV基因Ⅱ型中相对保守,编码蛋白属于非分泌型、无跨膜区、亲水性好;构建的真核表达质粒pVAX1-MGF360-13L被293T细胞表达;成功获得MGF360-13L单基因缺失毒株ASFV-ΔMGF360-13L,与ASFV CN/GS/2018相比,其体外复制没有显著性差异;在ASFV-ΔMGF360-13L感染BMDM后,IL-1β、IL-6和TNF-α炎性细胞因子在转录和分泌水平都显著高于ASFV CN/GS/2018。本研究成功制备了ASFV的MGF360-13L基因缺失毒株,并证实了MGF360-13L基因作为ASFV复制非必需基因具有抑制炎性因子表达的功能,这为进一步注释ASFV MGF360-13L基因功能提供了线索。 相似文献
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旨在获得牛病毒性腹泻病毒(BVDV)特异性纳米抗体。通过用BVDV-E0重组蛋白对羊驼进行免疫,分离血液中的淋巴细胞。利用噬菌体展示技术,构建噬菌体展示文库,经过连续3次生物淘筛获得与BVDV-E0蛋白结合的噬菌体,对所得VHH序列进行测序和基因比对。用ELISA筛选出抗BVDV-E0的高亲和力纳米抗体,并验证纳米抗体的亲和力和活性。结果成功构建了插入率为86%、库容量为1.3×1011 cfu的噬菌体表达文库,经过筛选获得5个BVDV-E0阳性单克隆,将这些基因克隆至原核表达体系,表达和纯化后获得了高纯度的BVDV-E0纳米抗体,经亲和力的鉴定获得2个不同的高亲和力的VHH基因,并且能结合人工抗原E0,还能够被竞争抗体所阻断。研究结果为用于组装检测BVDV试剂盒和研制BVDV疫苗奠定了基础。 相似文献
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近日,按照国家下达的有关投资计划,国家电网公司对经营区域内无电户集中的西藏、新疆、青海 相似文献
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[目的]建立苦糖果再生体系,保存种质资源.[方法]以苦糖果种子诱导的幼嫩茎段为外植体,接种在附加6-BA、IBA等不同浓度植物激素和营养物质的培养基上,研究不同培养条件对愈伤组织诱导及不定芽分化的影响.[结果]在不同的培养基、激素种类和激素浓度条件下,愈伤组织的诱导形成有很大差异.相同浓度激素条件下,以MS为基本培养基可诱导出苦糖果愈伤组织,最佳配方为MS+6-BA 0.5 mg/L+IBA 1.0 mg/L,诱导率为76.26%,而1/2MS培养基上无愈伤组织出现.经过愈伤组织的增殖和分化培养,最佳分化培养基为MS+6-BA 1.0 mg/L+IBA 0.05 mg/L,芽分化率达67.40%.[结论]该研究实现了苦糖果愈伤组织诱导并获得再生植株,初步建立起苦糖果植株再生体系. 相似文献
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根据甘肃省农业技术推广总站安排,庄浪县在2010年组织实施了该试验,系统研究了硼肥、锌肥、锰肥和钼肥4个微肥对全膜覆土穴播小麦的增产效果。结果表明,增产量以锌肥处理最高,比对照增加8.69%;锰肥次之,增幅7.04%;硼肥第三,增长了5.48%;钼肥第四,增产4.73%。纯收益分别比对照增加606.67元/hm2、399.45元/hm2、303.89元/hm2、183.89元/hm2。 相似文献
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<正>本刊讯"一块短板决定一只木桶容量,一只马蹄铁可以导致整个战争失败。我们都不是‘矮子’,只是没有严谨的作风和强硬的执行力……"2014年2月26日,在江苏省新沂市供电公司"支部书记讲党课"活动中,该公司农 相似文献