2个枯草芽孢杆菌源纤维素酶基因的克隆、融合表达及其酶学性质分析     

丁轲  邱静静  罗伟光  李旺  李元晓  曹平华  何万领  赵龙妹  王玉琴  张春杰 《动物营养学报》2017,29(8)

本试验旨在构建不同纤维素酶的融合表达系统及探讨融合纤维素酶的酶学性质。利用PCR技术从实验室前期分离的枯草芽孢杆菌中分别扩增2个纤维素酶基因Cel42和Cel22,设计一段柔性接头(GSGGGS),通过酶切连接将2个纤维素酶基因构建在一个开放阅读框(ORF)内,插入到pET32a(+)中构建重组表达载体pET32a(+)-Cel42-Cel22,转化大肠杆菌BL21(DE3)进行诱导表达,并对其酶学性质进行研究。结果表明:本试验成功克隆了2个纤维素酶基因Cel42和Cel22,并构建了重组表达系统BL21(DE3)/pET32a(+)-Cel42-Cel22,十二烷基硫酸钠聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)估计其分子质量约为101 ku,粗酶液中葡聚糖内切酶活性为57.62 U/mL,葡聚糖外切酶活性为32.57 U/mL。试验所得融合纤维素酶Cel42-Cel22的最适反应温度为50℃,最适反应pH为6.0,温度在30~70℃范围内时可维持70%以上的纤维素酶活性,pH在4.0~9.0范围内时可保持75%以上的纤维素酶活性,除Mn~(2+)外的其他金属离子对纤维素酶的活性均具有一定的抑制作用,其中Hg~(2+)和Cu~(2+)对的抑制作用较明显。由此可见,本试验在大肠杆菌BL21(DE3)中成功表达出了融合纤维素酶Cel42-Cel22,且该酶具有一定的活性,可适应较宽广的温度和pH范围,对金属离子敏感。  相似文献   

湖羊肌肉营养特点及肌纤维组织学特性   总被引：2，自引：0，他引：2  

王玉琴  田志龙  施会彬  钟甲丽  任国艳  李元晓  刘玉梅  吴秋珏  王建平  张自强  丁轲  余祖华  赵战勤 《动物营养学报》2017,29(8)

为了研究湖羊肌肉营养特点及肌纤维组织学特性,分别测定了不同年龄(初生、断奶、成年)湖羊肌肉中常规营养成分(水分、粗蛋白质、粗脂肪、粗灰分、钙、磷)、18种氨基酸的含量以及不同年龄湖羊不同部位肌肉(臂三头肌、股二头肌、背最长肌)的肌纤维组织学特性(肌纤维直径、肌纤维密度)。结果表明:随着年龄的增长,肌肉中水分含量显著降低(P0.05),粗脂肪、粗蛋白质、粗灰分、钙和磷的含量逐渐增加,且成年羊与初生羔羊和断奶羔羊之间差异显著(P0.05)。湖羊肌肉中苏氨酸、缬氨酸、蛋氨酸、异亮氨酸、亮氨酸、苯丙氨酸、赖氨酸、组氨酸和精氨酸的含量随着年龄的增长而显著增加(P0.05),非必需氨基酸含量随着年龄的增长大致呈增加趋势。在湖羊肌肉的所有氨基酸中含量最高的是谷氨酸,其次是天冬氨酸。不同年龄湖羊的肌纤维直径均表现为背最长肌股二头肌臂三头肌,肌纤维密度均表现为背最长肌股二头肌臂三头肌,且同龄湖羊3个部位之间的肌纤维密度均差异显著(P0.05)。相同部位的肌肉,其肌纤维直径随年龄的增长而增大,肌纤维密度随年龄的增长而减小,且不同年龄间差异显著(初生羔羊与断奶羔羊的臂三头肌除外)(P0.05)。综上可知,湖羊肌肉营养丰富,氨基酸种类齐全,肌纤维组织学特性在不同年龄和不同部位间存在差异,断奶羔羊肉营养更丰富,更具香、嫩等特点。  相似文献   

乳酸杆菌和中草药合生元添加剂对艾维因肉鸡生长性能影响的研究     

丁轲  余祖华  倪学勤 《饲料广角》2007,(19):25-27,41

试验以艾维因肉鸡为代表,研究乳酸杆菌与中草药合生元对1～35日龄艾维因肉鸡生长性能的影响。试验结果表明:合生元组在整个试验周期的平均体重均较对照组极显著提高(P<0.01),但周增重和日增重仅在0～3周差异极显著(P<0.01)。合生元组的周增重和日增重仅在第2周龄较乳酸杆菌组极显著提高(P<0.01),在0～3周龄,均较乳酸杆菌组和中草药组差异显著(P<0.05)或极显著(P<0.01)。在料肉比方面,0～5周龄合生元组均比对照组、乳酸杆菌组、中草药组极显著降低(P<0.01),但各周龄合生元组与乳酸杆菌组无明显差异(P>0.05),合生元组与中草药组在3周龄和4周龄差异显著(P<0.05)或极显著(P<0.01)。  相似文献   

犬癫痫发作的病因及治疗   总被引：1，自引：0，他引：1  

林霖  丁轲 《现代农业科技》2009,(19):322-323

介绍了犬癫痫发病的病因、机制及临床症状,并对其病例进行分析,提出治疗措施,以期为犬癫痫病防治提供参考。  相似文献   

藏灵菇源嗜热链球菌Tx菌株胞外多糖的纯化研究     

王瑞琼  张红星  丁轲  郭倩华  刘慧 《勤云标准版测试》2009,29(14)

为获得藏灵菇嗜热链球菌Tx菌株胞外多糖(EPS)的纯品,探索了EPS粗品的纯化方法.利用Sepharose CL-6B进行凝胶分级纯化,并对EPS纯品采用紫外全波长扫描、凝胶色谱鉴定及EPS纯度测定.结果表明:最佳纯化条件为:采用0.05～0.06 mol/L氯化钠溶液梯度洗脱,流速为0.25 ml/min,样品上样浓度为1.0 ms/ml,上样量为1.0 ml.在最佳纯化条件下得到的EPS纯度为98.01%,是纯化前的1.4倍,为今后进一步研究EPS结构与功能提供了实验基础.  相似文献   

藏灵菇源嗜热链球菌Tx菌株胞外多糖的纯化研究     

王瑞琼  张红星  丁轲  郭倩华  刘慧 《中国农学通报》2009,25(14):76-80

摘 要：【研究目的】本文为了获得藏灵菇嗜热链球菌Tx菌株胞外多糖(EPS)的纯品,探索了EPS粗品的纯化方法;【方法】利用Sepharose CL-6B进行凝胶分级纯化,并对EPS纯品采用紫外全波长扫描、凝胶色谱鉴定及EPS纯度测定;【结果】最佳纯化条件：采用0.05～0.06 mol/L氯化钠溶液梯度洗脱,流速为0.25 mL/min,样品上样浓度为1.0 mg/mL,上样量为1.0 mL;【结论】在最佳纯化条件下得到的EPS纯度为98.01%,是纯化前的1.4倍,为今后进一步研究EPS结构与功能提供了实验基础。  相似文献   

《动物安全生产》作为研究生课程的重要性与内容设计     

何万领  李晓丽  丁轲  李旺  李元晓  赵龙妹  曹平华 《家畜生态学报》2021,42(2)

2014年河南科技大学在研究生培养大纲中将《动物安全生产》增设为重要专业课程,旨在培养适应畜牧业发展需要的人才。目前,《动物安全生产》作为一门新课程尚无适用教材,其内容设置尚需进一步探讨和完善。该文就〈动物安全生产〉课程设置的背景、重要性和内容设计进行综述。  相似文献   

益生菌发酵饲料在母猪生产中的应用研究进展     

任强  李文希  曹平华  赵龙妹  丁轲  李旺 《饲料研究》2022,(3):157-160

饲料可在益生菌菌体的繁殖和代谢作用下改善营养特征,降低饲料原料中部分抗营养因子含量.母猪采食益生菌发酵饲料可提高其采食量及饲料消化率,改善泌乳母猪乳品质,提高繁殖性能,缓解妊娠母猪便秘等.文章综述了益生菌发酵饲料的相关概念、理化特性及益生菌发酵饲料对繁殖母猪生产性能的影响,分析了益生菌发酵饲料应用于繁殖母猪存在的问题,...  相似文献   

新城疫病毒洛阳分离株HN基因真核表达载体的构建     

余祖华  程相朝  丁轲  张春杰  李银聚  吴庭才  刘河冰 《河南农业科学》2008,(8)

采用逆转录聚合酶链式反应(RT-PCR)技术,从新城疫病毒洛阳分离株中扩增出HN基因片段,通过DNA重组技术将该基因片段重组于pcDNA3真核表达载体上,构建pcDNA3-HN重组质粒。通过用PCR扩增、酶切电泳分析的方法对重组DNA进行鉴定,成功构建了新城疫病毒洛阳分离株HN基因真核表达载体。  相似文献   

不同处理方法对豆粕中抗原蛋白和酸溶蛋白的影响     

李旺  何万领  丁轲 《西北农林科技大学学报(自然科学版)》2020,48(1):25-32

【目的】研究发酵、酶解和物理处理方式对豆粕大豆抗原蛋白分解和酸溶蛋白含量的影响,为筛选合适的豆粕加工处理方式提供依据。【方法】采用4因素3水平正交试验设计,研究菌种组合、发酵水分、发酵温度和发酵时间对豆粕抗原蛋白和酸溶蛋白含量的影响,确定最佳发酵方案。采用4因素3水平正交试验计,研究蛋白酶用量、酶解水分、酶解温度和酶解时间对豆粕抗原蛋白和酸溶蛋白含量的影响,确定最佳酶解方案。采用单因素试验研究烘焙(温度设置为160,200,240℃)、微波(火力设置为小火、中火、高火)和蒸汽蒸制(时间设置为15,20,25 min)对豆粕抗原蛋白和酸溶蛋白含量的影响。【结果】豆粕发酵最优方案:以枯草芽孢杆菌和产朊假丝酵母作为发酵菌种、发酵水分40%、35℃发酵72 h,该方案所得的发酵豆粕酸溶蛋白含量为17.36%,且抗原蛋白分解较好。豆粕酶解最优方案:蛋白酶添加量为0.3%、水分含量为60%,40℃酶解48 h,该方案所得酶解豆粕酸溶蛋白含量为8.76%,且抗原蛋白分解效果较好。与未经处理的对照相比,烘焙、微波和蒸汽处理的豆粕酸溶蛋白含量均显著升高(P0.05),且不同处理方式间差异显著(P0.05),但同一处理方式不同处理水平之间差异不显著(P0.05)。微波对豆粕抗原蛋白分解最好,烘焙和蒸汽对抗原蛋白也有一定的降解作用。【结论】发酵、酶解和物理处理均能提高豆粕酸溶蛋白含量,降低豆粕中的抗原蛋白。  相似文献