口蹄疫病毒多基因片段的克隆及其杆状病毒表达载体的构建   总被引：10，自引：3，他引：7  

冷青文郭慧琛  云涛刘在新  谢庆阁张居农 《中国兽医科技》2004,34(6):16-20

根据定点突变原理获得了包含口蹄疫病毒P1、2A、3C、3D及部分2B编码区的目的基因片段，经SpeⅠ和HindⅢ双酶切后，与经相同方法处理的杆状病毒转移载体pFastBacHT连接，得到了重组质粒pFB-P12X3C3D。经酶切和测序鉴定后，将其转化入含穿梭载体Bacmid的感受态细胞DH10Bac，经抗性及蓝白斑筛选，得到了含P12X3C3D多基因的重组穿梭载体，将其命名为Bacmid-P12X3C3D；提取其DNA并转染Sf9昆虫细胞，最后获得含口蹄疫病毒P12X3C3D多基因的重组杆状病毒。  相似文献   

短期使用碘化酪蛋白对奶牛产量的影响     

孙延鸣  陆良  赵宗胜  云涛  李明强 《黑龙江畜牧兽医》2002,(7):18-19

选择 2 0头泌乳期相近中国荷斯坦奶牛 ,随机分成 5组 ,每组 4头 ,对照组饲喂基础日粮 ,试验组在喂基础日粮的基础上添加 15 g/头·d碘化酪蛋白 ,为期 30d。结果表明 ,试验组牛产奶量比对照组平均升高 10 .73% (P <0 .0 5 ) ,牛奶密度变化不大。不论是逐渐撤去还是突然撤去饲料中的碘化酪蛋白 ,都不能有效地阻止奶产量的迅速下降  相似文献   

布鲁氏菌病疫苗（S2株）免疫羊抗体消长规律的研究   总被引：1，自引：0，他引：1  

申捷  宝音达来  马立峰  戴晓光  马晓雪  苏胜杰  萨茹拉  云涛  双燕  郝璐  郭金贵  菊花  刘志伟  毛开荣  申之义  赵心力 《中国动物检疫》2015,32(1):68-73

为探讨羊经布鲁氏菌病疫苗免疫后的血清抗体消长规律,本研究分别对绵羊和山羊进行布鲁氏菌S2株疫苗不同剂量的灌服,于免疫前和免疫后不同时间采集血清样品,采用虎红平板凝集试验和试管凝集试验进行血清抗体检测。结果表明,绵羊及山羊均在免疫后20d时血清抗体阳性率达到最高峰,之后呈下降趋势,免疫后90天降至低点。免疫后90至360d,绵羊组抗体阳性率几乎一直维持在14%以下,各时段无显著性差异(P>0.05);山羊组抗体阳性率在免疫后90至360d期间时高时低,起伏较大,无明显规律。试验期间,山羊的抗体阳性率普遍高于绵羊,且降升幅度较大。同时,研究表明,同种羊100亿和200亿两个免疫剂量组的抗体阳性率差异不大。  相似文献   

引进生防制剂防治我国果树根癌病 Ⅰ.病害的基本调查和病原菌的分离鉴定     

王慧敏  梁亚杰  云涛  狄原渤 《中国农业大学学报》1991,(1):91-94

调查了我国部分地区农场、果园、苗圃、林场根癌病,得知根癌病(Agrobacteriumtumefacfens)普遍为害我国多种果树、林木,并且发病十分严重。几乎重茬苗圃土壤都带有根癌病菌。病菌的分离鉴定表明,葡萄的根癌土壤杆菌主要是生物3型,没有发现生物2型。鉴定中还发现苹果上也有生物3型的根癌土壤杆菌。  相似文献   

兔出血症病毒缺失突变体的构建及鉴定     

谢玉柱  倪征  云涛  陈柳  余斌  刘光清 《中国兽医寄生虫病》2010,18(3):21-25

为研究兔病毒性出血症病毒（Rabbit hemorrhagic disease virus,RHDV）衣壳蛋白与病毒侵染性的关系,在RHDV侵染性克隆的基础上,构建了缺失衣壳蛋白（VP60）部分编码基因（5 325-6931 nt）的全长cDNA分子克隆。然后,在体外转录合成RNA,转染RK-13细胞,观察RHDV缺失5 325-6 931 nt区域以后,病毒的侵染性以及病毒复制能力的变化情况。结果表明,5 325-6 931 nt区域缺失以后,病毒的侵染性没有明显改变,但是病毒的复制能力有所下降。可见,该区域含有与病毒复制有关的调控序列或元件。  相似文献   

Ⅰ型鸭肝炎病毒基因组全长cDNA克隆的构建与分析     

云涛  倪征  刘光清 《西北农林科技大学学报(自然科学版)》2010,38(5):27-31

  相似文献   

杯状病毒受体研究进展     

陈柳  刘光清  宋毅  倪征  余斌  华炯钢  李双茂  云涛 《动物医学进展》2010,31(7):74-77

杯状病毒科(Caliciviridae)的病毒是一类多样性的病毒,具有广泛的宿主和组织趋向性。对于其受体的研究,近年来取得了一定的进展。鉴定的受体分子主要集中于两类,一类是碳水化合物,包括组织血型抗原(HBGAs)、唾液酸和硫酸乙酰肝素;另一类是细胞蛋白,如连接黏附分子-A(JAM-A),一种分子质量为105 ku的膜蛋白等。此外,病毒与宿主受体相互识别的分子机制也取得了进展,这些研究对于深入了解病毒与宿主间的相互关系及有针对性地进行抗病毒药物、疫苗的研制具有重大意义。  相似文献   

兔出血症病毒衣壳蛋白VP60在杆状病毒表达系统中的表达及细胞内定位     

陈柳  云涛  刘光清  倪征  余斌  宋毅 《浙江农业学报》2010,22(2)

为了探讨兔出血症病毒(RHDV)衣壳蛋白的细胞内定位,利用杆状病毒表达系统构建了表达RHDV结构蛋白(VP60)的重组杆状病毒。间接免疫荧光(IFA)和Western blot检测以及电子显微镜观察结果表明,VP60不仅能在昆虫细胞中正确表达,而且能自组装形成病毒样颗粒(VLPs)。进一步对表达蛋白进行细胞内定位观察发现,表达蛋白定位于Sf9细胞的细胞膜上。  相似文献   

大型家畜急腹症的中兽医治疗原则及方法     

和云涛 《新农业》2023,(22):52-53

<正>1大型家畜急腹症概述急腹症是指腹腔内、盆腔、腹膜后组织和脏器发生了急剧的病理变化,从而产生以腹部为主要症状和体征,同时伴有全身反应的临床综合征。在大型家畜急腹症中,大型家畜的具体表现常常为患病家畜难以正常站立,只能进行起卧动作,因此,大型家畜急腹症也叫做“起卧症”。  相似文献   

鸭呼肠孤病毒基因Ⅰ型与Ⅱ型鉴别诊断RT-PCR方法的建立与应用   总被引：1，自引：0，他引：1  

云涛  张存  华炯钢  余斌  叶伟成  陈柳  倪征 《农业生物技术学报》2016,(12):1964-1972

临床发病鸭(Anas platyrhynchos domestica)群中存在两种基因型鸭呼肠孤病毒(Duck reovirus,DRV)的感染.为建立一种能鉴别诊断DRV Ⅰ型(classical DRV,C-DRV)与Ⅱ型(novel DRV,N-DRV)的一步法RT-PCR检测方法,本研究通过对GenBank已公布的现有C-DRV和N-DRV S1和S4基因片段序列进行比对分析,设计合成两对特异性引物,并对引物浓度、退火温度和循环次数等扩增条件进行优化,建立一种能鉴别诊断C-DRV和N-DRV的一步法RT-PCR检测方法.结果表明,一步法RT-PCR最佳的反应体系为:PrimeScript 1 Step Enzyme Mix 1μL,2×1 Step Buffer 12.5μL,RNA模板1.5μμL,上下游引物(20μmol/L)各1μL,RNase Free dH2O补足25 μL;最佳反应条件:50℃反转录30 min;94℃预变性2 min;94℃变性30 s,55℃退火30 s,72℃延伸30 s,共30个循环.该方法可从C-DRV和N-DRV基因组中扩增出大小分别为249和505 bp单一特异性片段,从两种病毒基因组混合物中可同时扩增出两条特异性片段,而对鸭源常见病毒及正常细胞基因组在同等条件下检测均为阴性;该方法具有较高的敏感性,其最低病毒检出量分别为0.47和0.62个半数组织培养感染剂量(50％ tissue culture infective dose,TCID50);对不同代次、不同时间提取的病毒RNA样品重复检验3次,结果均一致.对浙江省2011～2015年采集的239份疑似临床病料进行检测,C-DRV与N-DRV的阳性率分别为2.5％(6/239)和31.4％(75/239);通过对阳性病料P10和P18扩增序列的测序也证实检测结果的准确性.本研究建立的双重一步法RT-PCR可以有效区分两种基因型DRV,且临床样品检测表明N-DRV是浙江省流行的优势基因型.本研究为鉴别诊断C-DRV与N-DRV提供了一个快速、灵敏性高及低成本的实验室诊断方法,该方法的建立可为DRV的分子流行病毒学调查提供有效的技术支持.  相似文献