兔肾上皮细胞cDNA表达文库的建立     

宋毅  陈柳  余斌  倪征  云涛  刘光清 《中国兽医寄生虫病》2010,18(2):23-27

  相似文献   

兔出血症病毒VP60蛋白单克隆抗体的制备及鉴定     

魏威  余斌  倪征  陈柳  云涛  华炯钢  吴润  刘光清 《甘肃农业大学学报》2009,44(1)

以纯化的重组兔出血症病毒核衣壳蛋白(VP60)为抗原,免疫BALB/c小鼠,采用杂交瘤细胞技术制备抗衣壳蛋白的单克隆抗体,获得了2株能稳定分泌抗VP60蛋白单克隆抗体的杂交瘤细胞株(AE11和AH4).分别利用Western blot、间接ELISA和间接免疫荧光(IFA)等方法对单抗的免疫活性和特异性进行检测,结果证明,此两株单抗均能识别重组的VP60和天然病毒的衣壳蛋白,而IFA结果显示只有AE11能和RHDV反应,可观察到强烈的特异性绿色荧光,表明成功制备了抗RHDV的VP60特异性单抗.  相似文献   

猪圆环病毒致病性的分子基础   总被引：3，自引：1，他引：3  

刘光清  云涛  倪征  梁华丽  华炯刚  李双茂  杜青云 《中国兽医学报》2006,26(4):457-459,464

猪圆环病毒（porcine circoviruses，PCV）因为被发现与断奶仔猪多系统衰竭综合征（postweaning multisystemic wasting syndrome，PMWS）、猪肾病综合征（PNDS）以及仔猪先天性震颤等多种疾病的发生有关联，才逐渐引起人们的关注。越来越多的证据表明，PCV在猪群中的高感染率已是严重威胁世界养猪业健康发展的重要因素之一。然而，迄今我们对该病毒致病性的分子机制以及免疫机理等仍不是很清楚，可喜的是国内、外学者已对之进行了多方面的研究，并取得了丰硕研究成果。下面作者对近年来有关PCV分子生物学及免疫学方面的研究成果进行了综述，以期能对我国有关PCV的研究提供帮助。  相似文献   

莫让驾驶人的"小动作"再害人     

云涛 《南方农机》2007,(3):48-48

据新华社报道,2007年1月13日8时30分,一辆由四川省宜宾市开往浙江温州的冀A-22599的双层卧铺客车,行驶至湘西土家族苗族  相似文献   

Ⅰ型鸭病毒性肝炎RT-PCR检测方法研究   总被引：1，自引：0，他引：1  

华炯钢  王非  刘光清  倪征  云涛  余斌  梁华丽  李双茂 《浙江农业学报》2007,19(6):409-412

根据Ⅰ型鸭病毒性肝炎ZJ/06强毒株的测序结果,在其基因组3D基因区设计合成一对可扩增238 bp的特异性引物,成功的建立了检测DHV-Ⅰ的RT-PCR方法,并确定了其特异性与敏感性,对DHV-Ⅰ分离毒株和临床病料进行RT-PCR检测均得到阳性扩增结果,而作为阴性对照的常见4种鸭病病原:鸭瘟病毒、鸭产蛋综合症病毒、鸭副粘病毒、鸭里默氏杆菌均未扩增到任何片断。利用BHK-21细胞、SPF鸡胚对DHV-Ⅰ临床病料进行病毒分离鉴定,结果表明建立的DHV-Ⅰ的RT-PCR检测方法具有快速、特异、敏感的特点。  相似文献   

植物精油微胶囊的制备方法及其在畜禽养殖业中的应用     

义拉勒特  刘威  云涛  李胜利  张春华  杨鼎  萨初拉  金鹿  张崇志  胡晓晓  孙海洲 《畜牧与饲料科学》2023,(3):33-41

植物精油具有良好的抑菌、抗炎、抗氧化特性,在畜禽饲料中添加使用具有安全、高效、毒副作用小、残留量低等优点,在成为饲用抗生素替代品方面有较高的开发潜力和研究价值。介绍了植物精油的理化特性,综述了植物精油微胶囊化工艺和制备方法及植物精油在畜禽养殖业中的应用研究进展,以期为畜禽用植物精油微胶囊制剂的研究与开发及植物精油在畜禽生产中的科学应用提供参考。  相似文献   

新型鸭呼肠孤病毒一步法TaqMan-MGB荧光定量RT-PCR检测方法的建立与应用     

云涛  华炯钢  叶伟成  倪征  陈柳  张存 《浙江农业学报》2020,32(4):571

为建立一种快速、敏感和特异性检测新型鸭呼肠孤病毒(novel duck reovirus,NDRV)的方法,本研究根据GenBank数据库中NDRV S3基因保守序列设计1对特异性引物和1条MGB荧光探针,建立了一种检测NDRV的一步法MGB荧光定量RT-PCR方法,对其特异性、敏感性和重复性进行检验,并与普通RT-PCR进行比较。结果显示,扩增标准曲线相关系数为0.999,扩增产物的熔解曲线仅出现单特异峰。该方法对经典鸭呼肠孤病毒、H9N2禽流感病毒、鸭坦布苏病毒、A型鸭肝炎病毒、鸭新城疫病毒、鸭瘟病毒及番鸭细小病毒均未检测到信号,对NDRV的最小检出量为10拷贝·μL^-1。组内和组间变异系数均小于2%,重复性好。此外,利用该方法对239份疑似新型呼肠孤病毒病样品进行检测,常规RT-PCR检测时有75份为阳性,一步法TaqMan-MGB荧光定量RT-PCR方法检测时有100份为阳性,而且常规RT-PCR检测出的阳性样品用一步法TaqMan-MGB荧光定量RT-PCR检测时均为阳性,符合率为100%。该检测方法的建立为NDRV早期快速检测及定量分析提供新的方法。  相似文献   

鹅星状病毒基因Ⅰ型和Ⅱ型双重荧光定量RT-PCR检测方法的建立与应用     

王宏宇  朱寅初  云涛  张存  鲍恩东 《畜牧兽医学报》2023,(4):1616-1623

鹅星状病毒(goose astroviruses, GAstV)作为一种雏鹅新发病原，对养鹅业造成巨大经济损失，在尚无有效治疗手段情况下，加强疫病及时检测和防控十分重要。为建立快速、特异且灵敏的鉴别GAstVⅠ型和GAstVⅡ型的病毒检测方法，本研究根据GAstVⅠ和GAstVⅡ的保守区域RdRp基因序列，设计合成2对特异性引物和2种不同荧光基团标记的TaqMan探针，建立了一种双重荧光定量PCR检测方法，以达到在同一反应体系中同时定量检测GAstVⅠ和GAstVⅡ的目的。结果显示，GAstVⅠ和GAstVⅡ的最小检出量分别为43.3、6.49 copies·μL^-1;重复试验的变异系数不超过0.5%;该方法对DPV、GPV、GTMUV、GRV、AIV(H9N2)等病毒核酸无交叉反应。综上表明，本研究建立的可鉴别GAstVⅠ和GAstVⅡ的双重荧光定量PCR方法灵敏度高、特异性强、重复性好。可用于临床GAstVⅠ和GAstVⅡ的快速鉴别诊断，也可用于两种基因型GAstV的定量分析。  相似文献   

不同鸭坦布苏病毒病疫苗免疫效果的比较     

叶伟成  华炯钢  倪征  云涛  陈柳  朱寅初  张存 《浙江农业科学》2022,63(7):1542-1544

本研究选取鸭坦布苏病毒病弱毒疫苗(ZJ407-168株、WF100株)、灭活疫苗(ZJ407株、HB株)共4种疫苗,在实验室和鸭场对不同日龄的鸭进行免疫试验,并用间接ELISA法检测免疫后不同时期的抗体。抗体检测结果发现:弱毒疫苗免疫组在免疫后2周抗体阳性率就可达到100%,而灭活疫苗免疫组在免疫后4周抗体阳性率才达90%以上。但灭活疫苗免疫组抗体持续时间长,免疫后6个月抗体阳性率还能维持在90%以上,弱毒疫苗免疫组免疫后3个月抗体阳性率已下降至60%~70%。此外,灭活疫苗免疫组检测到的抗体D值离散差异小,而弱毒疫苗免疫组检测到的抗体D值参差不齐。本研究的结果表明,弱毒疫苗免疫组产生抗体比灭活疫苗免疫组要早14 d,但灭活疫苗免疫组检测到的抗体D值整齐,持续时间较长。上述结果可为临床防疫根据不同疫苗产生抗体的特点,合理使用疫苗,制定有效的免疫程序提供依据。  相似文献   

基于番鸭细小病毒VP3蛋白的间接ELISA方法建立     

叶伟成  云涛  朱寅初  倪征  陈柳  华炯钢  张存 《浙江农业科学》2022,63(11):2740-2745

本试验采用经原核表达并纯化的番鸭细小病毒VP3蛋白作为包被抗原，辛酸-硫酸铵沉淀法提取纯化制备的兔抗番鸭IgG酶标抗体作为二抗，经一系列试验，确定了间接ELISA检测番鸭细小病毒抗体的最佳抗原浓度为5 μg·mL^-1，血清的最佳稀释度为1∶100，血清样品稀释液为含10% FBS和10%脱脂奶粉的PBST，兔抗番鸭酶标抗体最适稀释度为1∶2 500。将建立的方法进行了特异性、敏感性、重复性与中和试验的符合性等试验。试验结果表明，阳性血清样品作1 600倍稀释还能检测到抗体；与其他常见鸭传染病的阳性血清无交叉反应；批内、批间重复性试验的变异系数小于8.7%；100份番鸭血清样品用ELISA方法与中和试验的总符合率达90%以上。说明本试验建立的检测方法敏感性高、特异性强、重复性与稳定性好，可用于番鸭细小病毒流行病学调查及鸭群免疫番鸭细小病毒疫苗后抗体监测。  相似文献