鸭腺病毒A型Hexon基因克隆与序列分析     

万春和  刘荣昌  陈翠腾  程龙飞  傅光华  傅秋玲  施少华  陈红梅  黄瑜 《中国畜牧兽医》2017,44(10):3042-3048

为明确鸭腺病毒A型Hexon基因特征及其在腺病毒科病毒分类中的作用,本研究从前期分离鉴定的一株番鸭源鸭腺病毒A型分离株（JX2016株）中分段扩增获得其Hexon基因编码区。结果发现,鸭腺病毒A型JX2016株Hexon基因编码区为2 733 bp,编码910个氨基酸,与鸭腺病毒A型（FJ12025株）核苷酸同源性最高,达99.8%;与其他分离株Hexon基因核苷酸同源性均在99.4%以上;与鸭腺病毒2型（GR株,未明确分类地位）同源性仅为54.5%;与禽腺病毒A型Phelps株（鸡源）及P29株（鹅源）的核苷酸同源性分别为53.6%和55.2%。遗传进化树分析发现,所有鸭腺病毒A型分离株在遗传进化上均处于相同的亚分支,且与绵羊腺病毒D型（OAV287株）均处于富AT腺病毒属遗传进化分支。但鸭腺病毒2型（GR株）与禽腺病毒A型Phelps株（鸡源）、P29株（鹅源）却处于同一遗传进化分支,均属于禽腺病毒属遗传进化分支。基于Hexon蛋白的遗传进化分析,建议将鸭腺病毒A型重新命名为鸭源富AT腺病毒A型,将鸭腺病毒2型重新命名为鸭源禽腺病毒。  相似文献   

禽坦布苏病毒单克隆抗体的制备与初步分析     

施少华  程龙飞  傅光华  陈珍  傅秋玲  刘荣昌  万春和  陈红梅  黄瑜 《福建农业学报》2018,(6)

为进一步建立基于禽坦布苏病毒E囊膜蛋白的快速检测方法,本研究通过纯化的禽坦布苏病毒为抗原免疫BALB/c小鼠,获得2株杂交瘤细胞株(2F6和4E11),其分泌的单抗效价可达1∶64 000,并可有效识别禽坦布苏病毒感染的Vero细胞;原核表达的囊膜E经SDS-PAGE电泳后可与单抗进行Western-blot发生反应,初步表明制备的单克隆抗体为禽坦布苏病毒E蛋白单抗,为该病分子流行病学研究及新型诊断方法建立奠定基础。  相似文献   

雏番鸭感染禽副黏病毒1型的分离鉴定     

傅光华  黄瑜  程龙飞  施少华  彭春香  林芳  林建生 《江西农业大学学报》2005,27(5):769-772

从呼吸困难、肠道粘膜出血、胰腺大量白色坏死点为特征的7日龄病死雏番鸭的肝脏中分离到1株病毒。经电镜观察发现该病毒为多形性有囊膜病毒,表面有呈辐射状分布的纤突;血清学鉴定表明,能在4℃下凝集鸡和鸽红细胞,其血凝活性能被NDV标准阳性血清特异性抑制。该病毒对10日龄SPF鸡胚的半数致死量（ELD50）和平均致死时间（MDT）分别为10^-8.5／0．1mL和63．2h,对番鸭胚成纤维细胞的TCID。为10^-6／0．1mL。经静脉和腿部肌肉两种途径分别接种10日龄雏番鸭和非免疫雏鸡,均可引起发病死亡,并从死亡雏番鸭和雏鸡中可回收到原攻击病毒。依据以上结果表明所分离病毒为中等偏强毒力的禽副黏病毒1型。  相似文献   

宽谱鸭疫里默氏菌噬菌体筛选及生物学特性研究     

程龙飞  廖维连  陈红梅  江南松  傅秋玲  万春和  刘荣昌  施少华  黄瑜  傅光华 《中国畜牧兽医》2023,(3):1169-1176

【目的】筛选宽谱鸭疫里默氏菌噬菌体,作为治疗用噬菌体组合的候选毒株。【方法】以不同含量的噬菌体进行噬斑分析测定35株噬菌体的噬菌谱;利用透射电镜观察、热与酸碱稳定性评估、最佳感染复数(MOI)测定、一步生长试验、杀菌试验分析噬菌体的形态结构和部分生物学特性。【结果】35株噬菌体中vB＿RanS＿202的裂解谱最宽,能裂解42%(42/100)的鸭疫里默氏菌,包括血清1、2、6、10、11和13型共6种血清型菌株。该噬菌体由直径约60 nm的截面为六边形的头部和长约220 nm的尾部组成,不耐热,效价为1.0×10⁷ PFU/mL的噬菌体,经50℃水浴80 min或60℃水浴20 min,即降为1.8×10⁵～2.6×10⁵ PFU/mL。在pH 5.0～9.0的环境中能维持活性。以RAf488为宿主菌测得其最佳MOI为0.01。一步生长曲线显示,其潜伏期和暴发期分别为60和75 min,平均裂解量约为150 PFU/cell。在宿主菌RAf488中的杀菌试验结果显示,MOI在0.004～0.016时,vB＿RanS＿20...  相似文献   

鸭圆环病毒和鹅圆环病毒三引物鉴别检测方法的建立     

王梦鸽  黄瑜  傅秋玲  程龙飞  万春和  刘荣昌  陈红梅  江南松  梁齐章  施少华  林建生  傅光华 《福建农业学报》2023,(1):7-11

【目的】建立一种可同时检测并鉴别鸭圆环病毒和鹅圆环病毒的PCR方法。【方法】根据已发布的鸭圆环病毒和鹅圆环病毒基因组分子特征设计3条引物，应用3条引物建立了一种在一个反应管中可检测并鉴别鸭圆环病毒和鹅圆环病毒的三引物PCR方法。【结果】该方法可特异性扩增鸭圆环病毒和鹅圆环病毒，并根据扩增片段大小鉴别病毒种类，检测最低限分别为110、80 pg·μL^-1。应用该方法对临床疑似病例样品进行检测，其结果与用2种病毒对应的单病毒PCR检测方法一致。【结论】建立的三引物PCR方法特异性强，敏感性高，丰富了水禽圆环病毒病的临床病例的诊断及流行病学监测的技术手段。  相似文献   

检测鸡血清多杀性巴氏杆菌抗体的胶体金试纸条的研制与应用     

程龙飞  陈红梅  江南松  傅光华  傅秋玲  万春和  黄瑜  刘荣昌  施少华 《中国预防兽医学报》2023,(4):374-378

为建立快速检测鸡血清多杀性巴氏杆菌(Pm)抗体的胶体金免疫层析技术，本研究采用胶体金标记兔抗鸡Ig G，制备金标垫，将重组脂蛋白B(rPlpB)和羊抗兔Ig G抗体分别包被于硝酸纤维膜作为检测线和质控线，优化条件后组装成胶体金试纸条(CGTS)。结果显示，胶体金标记兔抗鸡Ig G的最佳p H为8.5，最佳标记浓度为7μg/mL;r PlpB和羊抗兔Ig G抗体的最佳使用浓度均为0.2 mg/m L。利用该方法检测SPF鸡血清，鸡Pm、鸡大肠杆菌、鸡沙门菌、鸡新城疫病毒和鸡传染性支气管炎病毒阳性血清，结果显示仅鸡Pm阳性血清检测为阳性，其他均为阴性，表明CGTS的特异性强。将琼脂扩散(AGP)效价为1∶16的鸡Pm阳性血清2倍倍比稀释后以CGTS检测，结果显示1∶320倍稀释仍检测为阳性，表明CGTS的敏感性较高。检测鸡Pm阳性血清和SPF鸡血清时，同批次不同试纸条之间、不同批次之间均无差异，表明该方法的重复性好。对89份鸡血清采用CGTS和间接ELISA检测，结果显示，二者阳性符合率为91.5%，阴性符合率为100%，总符合率为94.4%。禽霍乱灭活疫苗免疫后14 d,66.7%的鸡采...  相似文献