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为了分析血液外泌体miRNA对延边黄牛垂体细胞生长激素（GH）分泌的影响,试验选择在延边黄牛和韩延牛血液外泌体中存在显著差异表达的miR-93,分析其对延边黄牛垂体细胞GH分泌的影响机制。试验首先进行延边黄牛垂体细胞的原代培养,之后将miR-93的mimics（miR-93-mi组）、mimics对照品（NC对照组）、inhibitor（miR-93-in组）、inhibitor对照品（iNC组）转染给已建立的垂体原代细胞,48 h后收集细胞,提取总mRNA和总蛋白。试验利用targetscan和RNAhybrid分析软件对miR-93的靶基因进行预测,并利用双荧光素酶报告基因系统对miR-93的靶关系进行验证;利用实时荧光定量PCR和Western blotting技术分别检测靶基因mRNA转录和蛋白的表达情况,结果表明,miR-93靶向了生长激素释放激素受体（GHRHR）的3'UTR;与NC对照组比较,miR-93-mi组的延边黄牛垂体细胞中GH mRNA转录和蛋白表达均极显著低于NC对照组（P<0.01）;miR-93-mi组的GHRH mRNA转录和蛋白表达均极显著低于NC对照组（P<0.01）,而miR-93-in组的GHRHR蛋白表达显著高于iNC对照组（P<0.05）。说明miR-93可通过调节GHRHR的表达而调控延边黄牛垂体细胞GH的分泌,进而调控延边黄牛的生长发育。 相似文献
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通过对猪乳汁Exosome中总miRNA进行分离提取,以验证其对猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)的抑制作用。首先提取猪乳汁中的Exosome,并将提取的Exosome对感染PRRSV的MARC-145细胞进行初步处理,于24、48 h后进行病毒滴度测定,并在MARC-145细胞上接种PRRSV病毒96 h后对细胞形态进行观察;随后对猪乳Exosome中的总miRNA进行进一步提取,用提取的总miRNA处理感染PRRSV的Marc-145细胞,于24、48 h后进行病毒滴度测定,同时也在MARC-145细胞上接种PRRSV病毒96 h后对细胞形态进行观察。结果表明,转染猪乳Exosome和转染猪乳Exosome总miRNA细胞中的PRRSV滴度都显著低于转染PBS(阴性对照);同时相对于阴性对照组,转染猪乳Exosome和转染猪乳Exosome总miRNA的细胞形态排列较紧密,边缘较清晰整齐。说明猪乳Exosome中存在与抑制PRRSV复制有密切关系的miRNA,本研究将为PRRS的预防和治疗提供新的理论依据和途径。 相似文献
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用昆明种小白鼠对中药“壮阳促孕散”进行了微核试验、精子畸形试验．结果表明：小白鼠微核试验、精子畸形试验均呈阴性反应．说明中药“壮阳促孕散”对小白鼠无致突变作用． 相似文献
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[目的]从延边黄牛血液中分离并鉴定外胞体(Exosome).[方法]通过低速离心、高速离心、超滤及超高速离心等方法从延边黄牛血液中分离Exosome,用电子显微镜观察其形态特征,采用Lorry方法进行蛋白定量.[结果]延边黄牛血液中含有大量的Exosome,电镜下呈圆形或椭圆形的双层膜小囊泡,直径为30～100 nm,膜结构完整.蛋白定量为2 mg/ml.[结论]用离心的方法可以从延边黄牛血液中获得Exosome,为进一步研究Exosome对延边黄牛生长轴调控的分子机制奠定基础. 相似文献
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为了探究枯草芽孢杆菌对蛋鸡生产性能以及血清生化指标的影响,试验选取40周龄体型及健康状况相近的400只海兰褐蛋鸡随机分成4个处理,每个处理20个重复,每个重复5只。4个处理为在基础日粮中分别添加0(对照组)、50、100、150 g/吨枯草芽孢杆菌菌粉,菌粉的活菌数为1.0×1010 cfu/g。试验期56d。结果表明,添加枯草芽孢杆菌显著提高产蛋率(P<0.05),显著降低料蛋比及死淘率(P<0.05),显著提高血清中的总蛋白和球蛋白含量(P<0.05)。综上所述,枯草芽孢杆菌能提高蛋鸡生产性能及改善血清生化指标,但是最佳添加量需要进一步探究。 相似文献
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精子与慢病毒共孵育条件的优化以及转基因猪的制备 总被引：2，自引：0，他引：2
【目的】探索慢病毒与精子共孵育的方法,并制备转基因猪。【方法】采用正交试验分析精子密度、病毒量、精子与慢病毒共孵育时间、精子与慢病毒共孵育温度对精子活力的影响,采用PCR和Southern blotting检测转基因。【结果】①优化慢病毒与精子共孵育条件为：100 µL慢病毒原液（5×105cfu）与1.0×107个/mL精子在17℃下孵育30 min;②与病毒孵育后的精子（109个/mL）给母猪人工授精时,经PCR检测49头仔猪中有14头呈阳性;③Southern blotting结果表明,8头PCR阳性仔猪中,4头融合了外源基因。【结论】优化了精子与慢病毒共孵育的条件（100 µL慢病毒原液（5×105cfu）与1.0×107个/mL精子在17℃下孵育30 min）,成功制备了转基因猪,并检测有外源基因的融合。 相似文献
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[目的]从延边黄牛和韩延牛血液中分离Exosome(外胞体),研究2种外胞体对延边黄牛垂体细胞中GH含量的影响。[方法]通过超高速离心等方法,从延边黄牛和韩延牛血液中分离Exosome,并以100 ng/m L的浓度分别转染给原代培养的延边黄牛垂体细胞培养12、24和48 h,对细胞上清液中GH含量进行检测。[结果]电镜下延边黄牛与韩延牛血液Exosome均呈圆形或椭圆形的双层膜小囊泡,直径均为30~100 nm,膜结构完整。韩延牛Exosome处理组的延边黄牛垂体细胞GH mRNA表达显著高于延边黄牛Exosome处理组(P0.05)。韩延牛血液Exosome处理组垂体中GH的含量显著高于延边黄牛血液Exosome处理组(P0.05)。[结论]延边黄牛和韩延牛血液中的Exosome对延边黄牛垂体细胞中GH含量的影响有明显差异。 相似文献
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为研究血液外胞体中miRNA对延边黄牛垂体细胞中生长激素(GH)分泌的影响,本研究选择在延边黄牛和韩延牛血液外胞体中显著差异表达的miR-6523a,利用实时定量PCR(qPCR)和Western Blot技术,研究了miR-6523a对延边黄牛垂体细胞中GH分泌水平的影响及miR-6523a与靶基因间的调控机制。生物信息学分析和双荧光素酶报告基因系统结果显示,miR-6523a靶向了SSTR5的3′非翻译区(UTR);qPCR和Western Blot检测结果显示,与对照组相比,添加miR-6523a-mi能极显著提高延边黄牛垂体细胞中GH mRNA和蛋白的表达(P0.01),而添加miR-6523a-in,GH mRNA和蛋白的表达有所降低,但和对照组相比差异不显著(P0.05);与对照组相比,添加miR-6523a-mi能极显著抑制SSTR5 mRNA和蛋白的表达(P0.01),而添加miR-6523a-in,SSTR5 mRNA和蛋白的表达均有所提高,但和对照组相比差异不显著(P0.05)。本研究表明,miR-6523a可通过调节SSTR5基因的表达而调控垂体细胞中GH的分泌,本研究结果将为研究外胞体miRNA调控动物生长发育机制提供理论依据。 相似文献