牛抗菌肽Bac7-Bac5-β defense串联基因在昆虫杆状病毒系统中的表达及其产物的活性分析   总被引：2，自引：0，他引：2  

赵昆  刘思国  王春来  宫强  迟磊  刘建东  王勇  云孟克  刘慧芳  孙延鸣 《农业生物技术学报》2008,16(3)

根据GenBank中公布的牛抗菌肽bac7、bat5和βdefense(LAP基因)成熟肽基因序列,人工合成了抗菌肽融合基因Bac7-BacS-β defense,克隆到BAC-TO-BACTM重组杆状病毒表达系统的pFAST HTb载体中,构建了重组转座载体pFASTBac-Bac7-Bac5-βdefense,转化DH10Bac大肠杆菌(Escherichia coli)感受态细胞,PCR方法筛选阳性菌落,抽提大分子质粒DNA,获得重组杆状病毒穿梭载体Bacmid-Bac7-Bac5-βdefense,转染昆虫草地夜蛾(Bombyx mandarina)Sf9细胞出现病变后,收集含有重组病毒颗粒的培养上清,重新感染草地夜蛾St9单层细胞,收集Si9细胞超声破碎,12%SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳可见表达的融合蛋白带,分子量大小为20 kD,表达量约占细胞总蛋白的10.6%.体外抑菌实验表明重组的rBac7-Bac5-βdefense蛋白对大肠杆菌,具有抑菌活性.  相似文献   

传染性支气管炎病毒我国地方分离株病原性和基因分型的比较研究     

步志高  江国托  刘思国  王秀荣  康丽娟  祁贤  陈万芳  卢景良 《畜牧兽医学报》1999,30(1):50-56

对来自国内部分地区的６个分离株及３个参考株,以蛋白酶Ｋ－ＳＤＳ法提取其基因组ＲＮＡ,经反转录－聚合酶链式反应扩增了预期的１．７ｋｂ纤糖蛋白Ｓ１基因ｃＤＮＡ。  相似文献   

鸡传染性支气管炎病毒华南分离株核蛋白基因的序列测定及同源性分析     

刘思国  江国托  康丽娟  刘忠贵  卢景良  刘明春 《中国兽医学报》1999,(4)

根据国外已发表的鸡传染性支气管炎病毒（ Ｉ Ｂ Ｖ）核蛋白基因序列,设计并合成 １ 对引物。应用这对引物,以 Ｒ Ｔ Ｐ Ｃ Ｒ 特异性扩增出华南分离株（ Ｈ Ｎ 株）的核蛋白基因,基因产物大小为 １５ ｋｂ , 与设计相符。对 Ｈ Ｎ 株部分核蛋白基因进行序列测定,并与标准毒株 Ｈ５２、 Ｍ ４１、 Ｂｅａｕ 和 Ｇｒａｙ 的核蛋白基因进行同源性比较,结果表明, Ｈ Ｎ 株与 Ｈ５２、 Ｍ ４１、 Ｂｅａｕ 和 Ｇｒａｙ 株的核酸同源性分别为 ８５％ 、８４％ ８４％ 和 ８６％ 。由此可以看出, Ｈ Ｎ 株与标准毒株在核蛋白基因上存在一定的差异。  相似文献   

高表达GFP-PBP1b融合蛋白的猪链球菌菌株的构建及PBP1b蛋白细胞定位的研究     

武柳君  卫东  高广娟  陈平  刘思国  张跃灵 《中国预防兽医学报》2023,(11):1101-1107

为鉴定猪链球菌(Streptococcus suis) A型青霉素结合蛋白PBP1b在S.suis中的细胞定位,本研究经PCR扩增S.suis pbp1b基因融合位点上下游序列UP和DN、强启动子P_eno基因片段及绿色荧光蛋白(GFP) gfp基因片段,再通过重叠延伸PCR扩增构建融合片段UP-P_eno-GFP-DN。利用同源重组的方法将UP-P_eno-GFP-DN转化含反向筛选标记的PSS-pbp1b中间菌株,经含7%蔗糖的TSAS平板筛选,挑单菌落进行PCR及测序鉴定。PCR及测序鉴定结果显示,获得的重组菌株中P_eno-gfp片段替换了PSS-pbp1b中的PSS片段,表明融合强启动子P_eno、GFP及PBP1b (GFP-PBP1b)的重组菌株P-GFP-pbp1b正确构建。以S.suis 05ZYH33株和本实验室前期构建的GFP-pbp1b为对照,培养P-GFP-pbp1b菌株并测定OD_600nm值,绘制各菌株的生长曲线;采用western bl...  相似文献   

猪瘟病毒E2蛋白抗原表位的研究   总被引：1，自引：0，他引：1  

刘思国于辉  涂长春 《中国动物检疫》2004,21(2):42-44

蛋白质抗原表位 (抗原决定簇 )是蛋白质抗原性的物质基础 ,一个蛋白质分子可带有多个不同的抗原决定簇 ,即抗原表位 (epitopes)。通常 ,抗原表位是指氨基酸序列已经清楚的抗原决定簇。蛋白质抗原表位的研究 ,对于设计具有免疫原性和中和活性的多肽、新型疫苗分子及新型诊断试剂具有较大意义。B细胞蛋白抗原表位的预测自从80年代Hopp和Woods提出亲水性参数对抗原表位预测的方法以来 ,已有许多参数、算法发表 [1～10],对B细胞蛋白抗原表位研究起到了巨大的推动作用。本文就猪瘟病毒(SFV)E2蛋白抗原表位的研究概况作一介绍。1猪瘟病毒E2抗…  相似文献   

猪瘟病毒保护性抗原E2蛋白单抗的制备及其抗原表位的初步分析   总被引：25，自引：3，他引：22  

马刚  李作生  余兴龙  刘思国  涂长春 《中国兽医学报》2002,22(2):121-124

应用大肠杆菌表达的猪瘟病毒主要保护性 E2抗原决定簇蛋白和全长 E2基因构建的 DNA疫苗免疫 BAL B/c小鼠。取免疫小鼠脾细胞与 SP2 /0骨髓瘤细胞进行融合 ,经克隆和间接 EL ISA筛选 ,获得了 A11、B2、E3、H6、D5、D86株稳定分泌抗猪瘟病毒 E2蛋白单克隆抗体 (Mc Ab)的杂交瘤细胞株。它们的腹水效价在 1∶ 80 0～ 1∶ 2 10 0 0 0之间。抗体类型鉴定结果表明 ,A11、E3、H6、D5和 D8为 Ig M类型 ,B2为 Ig G类型。随后用蛋白 A凝胶层析法和 PEG沉淀法分别纯化了 Ig G和 Ig M单抗。对纯化单抗进行的抗原识别表位研究结果初步表明 ,6株单抗可能识别 3种不同的E2抗原表位。  相似文献   

一起奶牛胎衣不下的治疗     

刘思国 《黑龙江畜牧兽医》1993,(12)

新疆石河子某奶牛户,饲养一头7岁黑白花杂交奶牛,1993年2月5日产犊,胎衣不下,5天后来院诊治,笔者临床检查后,子宫颈口已收缩,无法进行剥衣,试用药物治疗。2月10日用10％盐水输入子宫约1千克,与子宫阜充分接触,2月12日用三合激素10ml肌注,隔12小时后用催产素10ml肌注,5小时后完整胎衣和恶露排出。笔者认为10％盐水可促使胎衣与子宫阜间分离,可抑菌刺激子宫收缩,用三合激素激活子  相似文献   

DNA探针、粪检菌和ELISA三种方法在诊断副结核病中的比较研究     

刘思国  袁吉  刘明  陈奖励  童光志  李风彬  卢中冶  王洪图  侗成有  何昭阳 《中国预防兽医学报》1997,(5)

本研究在已构建的副结核分枝杆菌Ｃ２株ＤＮＡ基因文库的基础上，应用正、反向杂交试验从基因文库中筛选出特异性片段ＰＴＰ３１，以光敏生物素标记制成ＤＮＡ探针。用此ＤＮＡ探针以及粪检菌和ＥＬＩＳＡ三种方法分别对３２份副结核菌素（ＰＰＤ）变态反应阳性牛粪便及相应血清样品进行检测，其检出率分别为４７％（１５／３２）、５６％（１８／３２）和３４％（１１／３２）。对随机采集的２７６份牛粪便及血清样品，３种方法的检出率分别为１０％（２７／２７６）、１３％（３６／２７６）和７％（７９／２７６）。本研究结果表明，ＤＮＡ探针与粪检菌呈现正相关性，ＤＮＡ探针比ＥＬＩＳＡ方法能够检出更多的阳性数。  相似文献   

直接从粪便中提取副结核分枝杆菌DNA的方法及其应用     

刘思国  姜云垒  姜怀志  王福强  何昭阳 《中国预防兽医学报》1995,(5)

分枝杆菌病是严重危害畜禽的主要传染病。长期以来,对该病的诊断一直是人们感到棘手的问题,由于分枝杆菌之间存在许多共同抗原,故使常规的诊断方法均存在着假阳性和敏感性不高的缺点。为此,急需寻求一种特导的诊断方法。核酸探针诊断技术是近年  相似文献   

中国鸡传染性支气管炎病毒的变异     

江国托  刘思国  康丽娟  步志高  王秀荣  卢景良  王永坤 《中国预防兽医学报》1998,(6)

同ＩＢＶ参考株比较，中国ＩＢＶ流行株血清型内和血清型间在基因型和组织嗜性上均已发生变异；研究首次表明ＩＢＶ血清型、基因型及组织嗜性间存在有规律的相关性；病毒免疫原Ｓ１基因的点突变在一定程度上可影响病毒的免疫原性。  相似文献