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多重RT-PCR检测猪流感病毒及血清亚型 总被引:3,自引:0,他引:3
根据GenBank登录的猪流感病毒各血清亚型NP基因,H1、H3亚型HA基因,N1、N2亚型NA基因核苷酸序列,经DNAstar软件类比选择保守区设计引物,sPCR筛选出引物对,用于扩增猪流感病毒NP基因、血凝素H1/H3亚型、神经氨酸酶N1/N2亚型基因片段。根据NP、H1N1、H3N2亚型引物扩增片段大小和反应条件的差异,将各引物配比组合,形成引物组合,建立多重RT-PCR体系。经对不同亚型模板的扩增、检验,建立的2个多重RT-PCR体系可用于猪流感病毒及H1/H3血凝素亚型、N1/N2神经氨酸酶亚型的快速鉴别、诊断。特异性试验检测多重RT-PCR不能扩增其他猪病毒核酸,核酸的最低检测量达0.2ng。采集临床具有呼吸道症状的猪肺、鼻腔棉试子等85份,与鸡胚分离及血凝/血凝抑制试验比较,阴性样品检测符合率达100%。 相似文献
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为研究大肠杆菌热敏性肠毒素(Escherichia coli heat-labile enterotoxin,LT)蛋白佐剂(野生型、突变型)对免疫小鼠体内细胞因子表达水平的影响,建立了检测干扰素(IFN-γ)的荧光定量PCR方法,并检测了经LT滴鼻免疫小鼠脾脏中IFN-γmRNA的表达水平。结果表明:野生型和突变型LT蛋白免疫小鼠脾脏中IFN-γ的mRNA水平呈时间依赖性升高,而PBS对照组没有明显变化。野生型LT蛋白免疫后48 h,小鼠脾脏IFN-γmmRNA的表达量与对照组相比显著上升并达到峰值,在60 h后开始下降;突变型LTRG蛋白免疫后60 h左右,IFN-γmRNA水平达到最高峰值,72 h后开始下降。本研究表明:野生型及突变型LT蛋白免疫小鼠均能增强小鼠脾脏中IFN-γ的转录表达,产生针对抗原的非特异性免疫应答。 相似文献
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本文选用10株NDV疫苗、10株NDV/IBV联苗,察接种2周龄雏鸡后对头部相关淋巴组织(HALT)的影响。通过对接种鸡进行一系列体内试验,检测了哈德氏腺(GH)对布氏杆菌灭活抗原滴眼的反应情况。根据这一结果,对HALT的几个部位和支气管进行组织学检查,并见到有微观变化。本研究表明:3种NDV/IBV联苗(1株B1/Mass&Conn、2株LaSota/Mass&Conn)可干扰GH对布氏抗原的反 相似文献
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金福源 《国外畜牧学(猪与禽)》2010,(3):23-24
关键点:需要养猪生产者和兽医协调一致共同努力清除PRRSv。减少稳定的猪群再次感染本病毒是面临的最大挑战。空气过滤技术是达到根除PRRSv这个最终目标的重要环节。 相似文献
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上海地区鸡传染性支气管炎病毒S2基因的检测及分析 总被引:1,自引:1,他引:0
参考GenBank发表的传染性支气管炎病毒(infectious bronchitis virus,IBV)S基因序列,设计合成了1对引物,模拟PCR表明,该引物能扩增现已发表的所有IBV的S2基因部分核酸序列,扩增片段493bp。建立的RT—PCR检洲体系检测灵敏度达10~50ELD50,检出限量为0.1ng。采集上海地区12个鸡场疑似IBV禽样品34份进行检洲,阳性为32份,序列分析表明均为肾变型IBV S2基因片段,S2基因同源性较高(≥99%),与其他地区肾变型IBV也有较高同源性,而与腺胃型和呼吸型相比较,序列差异较大。进化分析表明,尽管IBV S2片段变异率明显低于S1基因,但二者表现相同的进化趋势,S2基因亦可反映出IBV的分子变异及毒株间的亲缘关系。 相似文献
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新城疫病毒分子生物学研究现状 总被引:2,自引:0,他引:2
本文详尽地介绍了新城疫病毒近几年的研究进展,着重从病原因组特性,编码蛋白,致病机理以及基因工程活载体苗的研究上做了综述概述,为新城疫病毒的深入研究奠定了基础。 相似文献
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研究大肠杆菌热敏性肠毒素突变体蛋白(heat-labile enterotoxin,LTRG)对鸡新城疫(Newcastle disease virus,NDV)疫苗经不同途径接种效果的影响.以NDV LaSota株作为共免疫原,与LTRG重组蛋白经滴鼻、口服及肌肉注射三种途径接种雏鸡,通过血清IgG抗体、HI抗体及粘膜分泌型IgA抗体水平变化,评价不同途径接种LTRG对NDV疫苗的免疫效果的影响.结果显示:①三种途径接种,LTRG均能显著增强NDV疫苗的免疫抗体水平,免疫雏鸡血清抗体和粘膜抗体水平均高于NDV疫苗单独免疫组;②LTRG对NDV疫苗免疫增强作用,以滴鼻接种最显著:二、三免后LTRG+NDV滴鼻组与NDV组血清IgG、粘膜IgA差异均显著(P<0.01、P<0.05);LTRG+NDV口服与NDV组血清IgG差异不显著(P>0.05)、粘膜IgA差异板显著(P<0.01);LTRG+NDV肌注与NDV组IgG差异不显著(P>0.05)、粘膜IgA差异显著(P<0.05);③三种免疫途径比较:血清IgG抗体水平差异均不明显(P>0.05);滴鼻、口服免疫可诱导雏鸡产生较高的粘膜IgA抗体、血清HI抗体.由此可见:LTRG粘膜佐剂对NDV疫苗免疫增强作用,以粘膜(滴鼻、口服)途径接种效果最为显著,能诱导高水平的粘膜IgA抗体及血清抗体. 相似文献
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为研究猪流感病毒(SIV)感染后SIV在体内的分布规律,本研究设计针对SIV NP基因保守区引物,建立了SIV SYBR GreenⅠ荧光定量PCR方法。该方法对SIV核酸检测灵敏度为30TCID50,对健康猪肺组织cDNA、猪瘟病毒(CSFV)、猪蓝耳病病毒(PRRSV)核酸呈阴性反应。采用建立的荧光定量RT-PCR方法对人工感染A/swine/Shanghai/1/2007/H1N2(Sw/SH/1/2007)猪进行检测,结果显示:病毒在猪鼻腔粘膜持续存在至感染后第8d;肛门拭子在感染后2d~8d可持续检测到病毒核酸;喉头、气管在感染后第3d可检到病毒核酸,并持续至第10d;肺部淋巴结、脾脏在感染后5d~7d检测到病毒核酸阳性;其它脏器均未检测到病毒核酸,从而确定呼吸道系统及脾脏是SIV定殖的主要场所,SIV感染猪后向外排毒周期约为1周。 相似文献
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疾病的诊断可通过综合评价鸡群的病史、临床症状、血清学特征及病原分离和鉴定来完成。血清学监测在一定程度上有助于鉴别出野毒感染的时间和特性。。 相似文献