小尾寒羊SP1基因克隆及其对前体脂肪细胞分化的影响     

王凤  赵弼时  刘旭莹  梁煜  乔利英  刘文忠  刘建华 《中国畜牧兽医》2021,48(5):1544-1557

试验旨在对小尾寒羊特异性蛋白1（specificity protein 1,SP1）基因进行克隆和序列分析,并研究SP1基因对前体脂肪细胞分化的影响。选取1月龄小尾寒羊尾部脂肪组织进行前体脂肪细胞的分离、培养和诱导分化;用重叠PCR法克隆SP1基因编码区（coding DNA sequence,CDS）;用生物信息学软件分析SP1基因CDS,并对其编码蛋白的结构、功能结构域、亚细胞定位、翻译后修饰进行预测;用慢病毒包装SP1基因过表达、干扰及对照质粒转染293T细胞后,收取病毒液感染小尾寒羊前体脂肪细胞;用油红O染色检测脂滴沉积能力;用实时荧光定量PCR检测SP1基因和成脂标志基因的mRNA表达量。结果表明,小尾寒羊SP1基因CDS全长2 340 bp,编码779个氨基酸;序列相似性分析显示,小尾寒羊SP1基因CDS及其编码序列与绵羊、山羊的相似性最高,其次是牛、马、猪、人、小鼠、大鼠,与鸡的相似性最低,系统进化分析结果与之相符;SP1蛋白定位于细胞核,有109个磷酸化位点,其二级结构由α-螺旋、β-转角、无规则卷曲和延伸链4种结构组成,所占比例分别为16.94%、8.60%、54.17%和20.28%,二级结构和三级结构均存在3个锌指结构域;过表达、干扰及对照质粒转染293T细胞,每组细胞皆出现较强绿色荧光,载体成功转染至293T细胞;病毒液感染小尾寒羊前体脂肪细胞并分化12 d后,过表达组SP1基因表达量极显著高于对照组（P<0.01）,干扰组SP1基因表达量极显著低于对照组（P<0.01）;过表达SP1基因极显著上调成脂标志基因mRNA的表达量（P<0.01）,产生更多脂滴;干扰SP1基因则结果相反。因此,SP1基因对小尾寒羊尾部前体脂肪细胞分化具有正向调控的作用。  相似文献   

幼龄和成年太行山羊附睾头差异竞争性内源RNAs机制分析     

郭相前  董复成  黄鑫芸  刘文忠  乔利英  张春香  任有蛇 《畜牧兽医学报》2021,52(5):1293-1306

旨在筛选出幼龄和成年太行山羊附睾头中差异表达的长链非编码RNAs（lncRNAs）、微小RNAs（miRNAs）和mRNAs,构建太行山羊附睾头中免疫相关基因调控的竞争性内源RNAs（ceRNAs）网络。本研究选取健康状况良好、体重相近的幼龄（2月龄）和成年太行山羊（2周岁）公羊各3只,去势采集其附睾头组织进行全转录组测序,用DESeq2软件筛选出幼龄和成年太行山羊附睾头差异mRNAs、lncRNAs和miRNAs。利用miRanda软件和R-package（reshape2、dplyr、tidyr）,基于ceRNA-score原理分析得到差异ceRNAs表达谱,对预测所得具有ceRNAs关系的mRNAs进行GO和KEGG富集分析,并绘制得到太行山羊附睾头免疫相关ceRNAs网络。最后,各随机挑选8个mRNAs、miRNAs和lncRNAs,并通过qRT-PCR验证全转录组测序结果的准确性。根据分析结果,以幼龄太行山羊附睾头为对照,成年山羊附睾头差异表达mRNAs有6 461个,其中上调2 997个、下调3 464个;差异表达lncRNAs共有1 147个,其中703个上调、444个下调;差异表达miRNAs共有182个,其中81个上调、101个下调。共得到具有ceRNAs调控关系的lncRNAs 366个,其中上调213个,下调153个;mRNAs有3 131个,其中1 253个上调,1 878个下调;miRNAs有140个,其中48个上调,92个下调。分析具有ceRNAs机制的基因发现,表达量显著上调的与免疫相关的mRNAs：淋巴细胞抗原6复合位点蛋白G5B（LY6G5B）、脂质运载蛋白9（LCN9）、解整合素金属蛋白酶28（ADAM28）和粘蛋白15（MUC15）基因在成年太行山羊附睾头表达量高,且极显著高于幼龄太行山羊（P<0.01）。GO和KEGG富集分析表明,具有ceRNAs机制的差异表达基因富集在内质网蛋白加工通路、蛋白质输出通路、粘蛋白型O-聚糖生物合成通路、细胞外基质受体相互作用通路等。qRT-PCR验证结果表明,除chi-miR-320-3p外,其余差异表达的mRNAs、lncRNAs和miRNAs表达趋势与全转录组测序结果一致。附睾头免疫相关ceRNAs网络分析表明,lncRNA-MSTRG.22929.11、lncRNA-MSTRG.57822.5、lncRNA-MSTRG.26758.1、lncRNA-MSTRG.12113.3、lncRNA-MSTRG.59930.2等lncRNAs作为ceRNAs可以调控附睾头免疫相关基因表达。本研究筛选出了幼龄和成年太行山羊附睾头差异ceRNAs,挖掘并绘制了免疫相关的关键ceRNAs网络,这些lncRNAs作为ceRNAs可为太行山羊附睾头免疫调控机制研究提供参考依据。  相似文献   

SIRT1基因在绵羊不同组织器官中的差异性表达研究     

潘洋洋  景炅婕  乔利英  贾夏丽  张静  张方  胡子乔  刘文忠 《山西农业大学学报(自然科学版)》2015,(2):113-118

SIRT1(silent mating type information regulation 2homolog1)是一种具有NAD+依赖性去乙酰化酶活性的转录调节因子,参与能量代谢的调节。利用实时荧光定量PCR技术,对10月龄山西肉用绵羊母本品系去势公羊内脏(肝、肾、脾、肺、心)、肌肉(背最长肌)和脂肪(大网膜、小网膜、肠系膜、腹膜后、皮下)等11种器官或组织中SIRT1基因mRNA的表达量进行检测,以探讨SIRT1基因的差异性表达规律。结果表明,绵羊SIRT1基因在所检测的器官或组织中均有表达,且差异极显著(P0.001)。主要表现在脾脏、肝脏和肾脏中的表达显著高于心脏和肺脏中的表达;深层脂肪组织中的表达高于浅层的皮下脂肪;在背最长肌中也有较高表达。这些差异与绵羊SIRT1基因调节脂质代谢及糖异生有关。有关结果为研究SIRT1基因的功能奠定了科学依据。  相似文献   

沙棘果渣对育肥羔羊生长性能、器官指数、血清生化指标和肌内脂肪酸组分的影响   总被引：1，自引：0，他引：1  

辛晓斌  赵俊星  金亚倩  刘文忠  任有蛇  张春香  张文佳  项斌伟  张建新 《动物营养学报》2017,29(10)

本试验旨在研究饲粮中添加沙棘果渣对育肥羔羊生长性能、器官指数、血清生化指标和肌内脂肪酸组分的影响。选取24只3月龄杜泊×小尾寒羊杂交公羔[(25±1)kg],随机分为4组,每组6只羊。各组分别饲喂含有0(对照)、10%、20%和30%沙棘果渣的试验饲粮。试验期50 d。结果表明:1)10%和20%水平组羔羊的宰前活重显著高于对照组和30%水平组(P0.05),10%水平组羔羊的平均日增重显著高于其他各组(P0.05),20%水平组羔羊的平均日采食量显著高于其他各组(P0.05),10%水平组羔羊的料重比显著低于其他各组(P0.05)。2)30%水平组羔羊的肝脏、脾脏指数显著高于其他各组(P0.05),网胃指数显著低于其他各组(P0.05)。10%、20%和30%水平组羔羊的大肠和小肠指数显著高于对照组(P0.05)。3)30%水平组羔羊的血清高密度脂蛋白(HDL)含量显著高于其他各组(P0.05),10%、20%和30%水平组羔羊的动脉粥样硬化指数(AI)显著低于对照组(P0.05),10%、20%和30%水平组羔羊的血清总抗氧化能力(T-AOC)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)和超氧化物歧化酶(SOD)活性显著高于对照组(P0.05),30%水平组羔羊的血清谷草转氨酶(AST)、谷丙转氨酶(ALT)、乳酸脱氢酶(LDH)活性及肌酐(CRE)和尿素氮(UN)含量显著高于其他各组(P0.05)。4)10%、20%和30%水平组羔羊的背最长肌中亚油酸、反油酸、花生四烯酸、总多不饱和脂肪酸(ΣMUFA)和总不饱和脂肪酸(ΣUFA)比例显著高于对照组(P0.05),油酸、总饱和脂肪酸(ΣSFA)和总单不饱和脂肪酸(ΣPUFA)比例显著低于对照组(P0.05)。由此可见,育肥羔羊饲粮中添加沙棘果渣有利于其生长发育和生长性能的提高,适宜添加水平为10%~20%。  相似文献   

广灵大尾羊HSD17B12基因克隆、生物信息学分析及表达规律的研究     

车雨彤  张锦美  侯文欣  赵祥  秦朋云  乔利英  刘文忠  刘建华 《中国畜牧杂志》2023,(3):102-110

本研究旨在克隆广灵大尾羊HSD17B12基因CDS，预测HSD17B12蛋白及其基因启动子区的结构和功能特性，探究HSD17B12基因在前体脂肪细胞分化过程中的表达。采用PCR法克隆HSD17B12基因CDS全长序列；生物信息学软件分析HSD17B12蛋白的理化性质、结构、功能位点和结构域，并进行亚细胞定位、序列相似性分析及其基因核心启动子区和转录因子潜在结合位点的预测；采用实时荧光定量PCR检测HSD17B12基因以及部分转录因子在前体脂肪细胞分化过程中的相对表达量。结果显示，广灵大尾羊HSD17B12基因CDS全长939bp，编码312个氨基酸；HSD17B12蛋白主要定位于内质网，有3个跨膜结构域和33个磷酸位点，二级结构主要由α-螺旋和无规则卷曲组成，其氨基酸序列与山羊相似性最高；HSD17B12基因有5个潜在的核心启动子区，存在SP1、ATF2和CREB1等10个转录因子的结合位点；在前体脂肪细胞分化过程中，SP1、ATF2和HSD17B12基因的mRNA表达均呈上升趋势，说明ATF2和SP1可能正向调控HSD17B12基因的表达，促进脂质沉积。本研究为进一步揭示HSD17B...  相似文献