甜味蛋白Brazzein基因酵母表达系统的建立     

史勇  张明军  张英  李莉  汤丹  刘松财 《吉林农业大学学报》2010,32(1):43-46

根据甜味蛋白Brazzein基因成熟区的氨基酸序列,结合毕赤酵母的密码子偏爱性以及Brazzein蛋白质结构的相关研究,对甜味蛋白Brazzein基因进行改造,使表达的目的蛋白中包含3个突变氨基酸(29Asp→Lys,31His→Ala,41Glu→Lys)。采用重叠PCR(SOE-PCR)合成目的基因并克隆到pMD18-T载体,经测序鉴定,序列正确的质粒用EcoRⅠ和XbaⅠ双酶切。将回收得到的目的基因连接到经同样双酶切处理的pGAPZαA载体上,经PCR、酶切和测序鉴定,证明已成功构建pGAPZαA-Bra真核表达载体。将构建好的重组载体pGAPZαA-Bra用AvrⅡ线性化,电转进入巴斯德毕赤酵母中。筛选ZeocinTM阳性克隆菌,进行蛋白表达,SDS-PAGE结果表明蛋白表达成功。  相似文献   

慢病毒介导的shRNA对MFC细胞生长抑素的沉默及对细胞增殖的影响   总被引：1，自引：1，他引：0  

马强  于浩  曹婧华  王楠  刘松财  张永亮  郝林琳 《中国农学通报》2011,27(11):50-53

SS能够抑制肿瘤细胞的增殖,其与肿瘤的关系已成为肿瘤学的研究热点。本研究将包装获得的靶向生长抑素的lv-shRNA病毒液感染肿瘤细胞MFC,同时,以pcDNA3.1-SS（pSS）转染细胞组作为SS过表达细胞对照,通过荧光显微镜观察到了GFP的高效表达,RIA检测发现49.55%（P<0.05）的SS受到了抑制。MTT法绘制细胞的生长曲线可知,pSS转染细胞的生长明显受到抑制,抑制效率为8.14%（P<0.05）;而LV-shRNA组细胞的生长密度比对照组细胞提高了19.27%（P<0.05）。表明SS对肿瘤细胞的增殖具有抑制作用。本研究首次采用SS过表达和低表达细胞表型同时验证SS对细胞的作用,为SS及其类似物在肿瘤方面的治疗提供了理论依据。  相似文献   

热应激对西门塔尔牛精液品质及顶体反应相关酶活力的影响   总被引：1，自引：0，他引：1  

张莹  郝林琳  李明谦  张嘉宝  刘松财 《内蒙古农业大学学报(自然科学版)》2011,32(1):13-16

为探讨夏季高温环境对西门塔尔种公牛精液品质和顶体反应相关酶活力的影响,选取年龄和健康状况相近,采精正常的西门塔尔成年种公牛30头,对其精液品质和顶体反应相关酶活力等指标按照春(3月-5月),夏(6月-8月),秋(9月-11月),冬(12月-2月)4个季节进行分组实验,并进行统计分析。结果表明:(1)夏季热应激可造成西门塔尔种公牛精液品质显著下降。采精量略有增加但随季节变化不明显(p>0.05);精子活力在夏季显著低于秋季(p<0.05),极显著低于春季和冬季(p<0.01);精液的密度夏季与秋、冬两季差异显著,极显著低于春季(p<0.01);夏季精子的顶体完整率和畸形率与春季、秋季和冬季存在显著差异,说明季节温度变化对西门塔尔种公牛精子顶体完整性和精子畸形有明显的影响。(2)夏季热应激可以使西门塔尔种公牛的几种重要顶体反应相关酶的活力降低。  相似文献   

创伤对小鼠热应激蛋白Bag家族基因表达的影响     

王佳  于浩  许无恨  马强  房希碧  官员  郝林琳  张英  刘松财 《扬州大学学报(农业与生命科学版)》2012,33(1):6-9

以小鼠为研究对象,探讨创伤条件下热应激蛋白Bag家族基因在创伤愈合组织中的表达情况。选用巴比西小鼠,建立创伤应激模型,提取创伤愈合组织RNA,经Real-Time PCR检测其表达情况。结果表明:创伤应激时Bag家族基因表达全部下调,其中Bag3、Bag4下调差异显著(P<0.05);对Bag家族各基因进行聚类分析结果显示Bag3与Bag4可聚为一类。说明Bag家族基因在创伤愈合过程中的表达差异可能与细胞凋亡与炎症反应存在一定的联系。  相似文献   

基于RNA复制子GHRH基因表达载体的构建及在293细胞中的表达     

任晓慧  乔继光  刘松财  张明军  章倩倩  侯峰  吕铁钢  周立光  吴琼  欧阳松应  张永亮 《畜牧兽医学报》2007,38(4):395-399

本研究将GHRH基因克隆到塞姆利基森林病毒(SFV)复制子质粒型表达载体pCMV-Rep-lacZ,构建了真核表达载体pCMV-Rep-GHRH。采用脂质体介导将表达质粒pCMV-Rep-GHRH转染293细胞,经RT-PCR、IFA、Tricine-SDS-PAGE和Western Blot检测,证明表达质粒pCMV-Rep-GHRH在293细胞中正确地表达了GH-RH多肽分子。本研究还利用放免法检测质粒载体转染细胞培养上清中GHRH浓度,初步比较了RNA复制子载体pCMV-Rep-GHRH和普通载体(pIRES-GHRH和pcDNA3-GHRH)的表达效率,结果表明,转染48 h,RNA复制子载体表达GHRH的含量显著高于普通载体,分别比pIRES-GHRH和pcDNA3-GHRH高出36.12%(P<0.05)和67.94%(P<0.05)。结论:构建的真核表达载体pCMV-Rep-GHRH能够在真核细胞293中表达GHRH多肽分子,且表达水平显著高于普通载体,为下一步更好地调控动物生长以提高动物生产性能奠定基础。  相似文献   

生长抑素基因靶向siRNA表达载体的构建及对生长抑素基因表达的抑制作用     

吴琼  张永亮  赵志辉  刘宇鹏  周立光  任晓慧  侯锋  章倩倩  吕铁钢  郝林琳  刘松财 《中国兽医学报》2008,28(3):276-280

合成含靶向生长抑素（Somatostatin,SS）前体基因的siRNA转录模板的发夹结构,插入pSilencerTM2.1-U6载体构建重组质粒2.1-S。提取小鼠下丘脑组织总RNA,PCR扩增获得SS前体基因cDNA,构建真核表达载体pcDNA3.1-SS、pEGFP-SS。将2.1-S分别与pcDNA3.1-SS、pEGFP-SS共转染入细胞中瞬时表达,检测SS前体基因表达变化。结果显示,重组质粒在E.coli（DH5α）内扩增,酶切及测序鉴定证明siRNA转录模板完整,正确地插入到pSilencerTM2.1-U6质粒中,重组质粒pcDNA3.1-SS与pEGFP-SS经测序序列完全正确。转染细胞在mRNA水平及蛋白水平均检测到2.1-S对SS前体基因表达的抑制。这表明,SS基因靶向siRNA稳定表达载体能在哺乳动物细胞中表达,并对靶基因呈抑制作用。  相似文献   

多肽、蛋白质药物的微球缓释/控释系统     

任晓慧  郑伟  刘松财  张永亮 《吉林畜牧兽医》2004,(1):22-25

近年来多肽和蛋白质类药物的缓释或控释给药系统发展很快,尤其倾向于使用以生物可降解聚合物(biodegradable polymer)制成的毫微球剂、微球剂为载体来制备长效注射剂。本文综述了近年来多肽、蛋白质药物微球给药系统概况,生物降解型微球的制备方法,释药理论,各种多肽、蛋白质药物的进展和研究中存在的问题。  相似文献   

聚乳酸/乳酸乙醇酸共聚物微球的研究进展     

任晓慧  李莉  刘松财  张永亮 《吉林畜牧兽医》2005,(3):13-15

聚乳酸及其共聚物是一类可生物降解的高分子聚合材料,通过其自身降解来调节药物释放,具有良好的生物相容性。本文对微球的制备方法、释药机理、研究进展进行了概述。  相似文献   

热应激条件对雄性小鼠精液顶体反应相关酶活力的影响     

赵珺  郝林琳  张莹  王佳  刘冰许  刘松财 《中国兽医学报》2011,31(5)

为探讨全球变暖和局部极端高温气候对雄性动物繁殖能力的影响,利用智能光照恒温培养箱模拟持续的热应激环境,建立小鼠热应激模型,设立了31,34,37℃3个不同的热应激温度组和22℃常温对照组,并在不同的温度下设置了热应激1,3,5,7,14 d 5个时间组,在不同的温度和时间下分别检测了小鼠精液的HYD、LDH、ACP和ACE等酶活性.结果显示,热应激条件下精子顶体反应相关酶活性均出现异常变化,从而影响精子的顶体反应及受精过程,对雄性小鼠的生殖机能产生影响.  相似文献   

部分小型猪与大型猪IGF-1基因的SNP分析     

郎松  邓景致  郝林琳  曾养志  王佳  李明谦  程美玲  刘松财 《中国兽医学报》2011,31(5)

利用PCR-SSCP技术对版纳微型猪、西藏小型猪、军牧猪和大白猪4个品种的IGF-1基因进行了多态性分析.结果表明,在外显子3上存在1个SNP(G201A),在外显子4上存在2个SNPs(A440G和T455C).各SNP位点基因及基因型频率统计结果显示,在G201A位点,A为大型猪的优势等位基因;在A440G和T455C位点,AT为大型猪的优势等位基因,小型猪的上述2个位点均没有共同的总体特征;2个等位基因型分布差异极为显著(P＜0.01),西藏小型猪的多态信息含量最低,而军牧猪的杂合程度最高.  相似文献