PLGA微球包裹生长抑素融合基因表达质粒对家兔生长的影响     

戴建威  章倩倩  王妍  刘松财  张永亮 《畜牧兽医学报》2008,39(10)

将HBsAg与Somatostatin（SS）融合基因克隆到真核表达载体pIRESlneo—CMV，构建了pIRESlneo—HBsAg／SSM。应用脂质体介导转染CHO细胞，96h提取细胞总RNA，RT-PCR鉴定融合基因表达；并收集细胞上清，ELISA法测定上清中HBsAg表达情况，结果为阳性。大量提取pIRESlneo—HBsAg／SSM质粒，用Poly D，L—lactide co—glycolicacid（PLGA）微球包裹，注射Vc獭兔后肢胫前肌，以注射生理盐水獭兔为对照。动物常规饲养45d，观察日增重并测定血清中IGF-Ⅰ、SS含量以及抗HBsAg抗体水平。结果显示注射后15～30d，质粒注射组日增重较对照组高106．8％（P〈0．01）；30d时，血清中IGF-Ⅰ浓度质粒组比对照组高29．2％（P〈0．05）；检测整个过程中血清中SS含量，发现注射后30d时明显低于对照组，且出现整个试验过程的最低值；质粒注射组血清中抗HBsAg抗体水平在注射后30d时出现峰值，这与SS含量出现最低值相吻合。本试验结果表明HBsAg与SS融合基因免疫獭兔，可以促进动物生长。  相似文献   

原生质介导的外源性GRF基因在小鼠体内表达时间的初探     

白忠彬  张永亮  田宝磊  刘松财  欧阳红生 《黑龙江畜牧兽医》2002,(11):1-2

将含GRF重组质粒的JM109菌株大量培养，制备原生质体，经1％的戊二醛处理后注射于小鼠肌肉，给予电刺激，提取DNA，进行PCR鉴定。结果表明，电镜观察到原生质体可以与小鼠肌肉细胞融合；电击可以促进原生质体与肌肉细胞的融合，但100V／cm，50ms的低压、短脉冲电击对GRF在动物体内的表达量上没有被观察到显著差异；可以确诊原生质体介导的GRF基因至少可以在小鼠体内滞留28d以上。  相似文献   

兽用干扰素的研究进展   总被引：4，自引：0，他引：4  

刘宇鹏  吴琼  任晓慧  刘松财 《现代农业科技》2007,(11):131-132

IFN是细胞和机体受到病毒感染,或者受核酸、细菌内毒素、促细胞分裂素等作用后,由受体细胞分泌的一种广谱抗病毒糖蛋白,具有种属特异性、作用广谱性及无害性等生物学性质。IFN不仅有免疫活性,而且还是体内一种递质和激素样物质,具有抗病毒繁殖、抗细胞分裂增殖及调节机体免疫三大基本功能。主要针对IFN的产生、信号转导路径、作用机制以及研究进展进行综述。  相似文献   

ERK1/2通路在VEGF促进绵羊卵泡颗粒细胞增殖中的作用     

曹颖楠  刘松财  郝林琳  姜怀志 《兽医大学学报》2012,(10):1532-1535,1559

选取10只1.5岁成年小尾寒羊母羊,分别取卵泡颗粒细胞并进行培养。设置5个试验组和1个空白对照组,试验组采用不同质量浓度血管内皮生长因子（VEGF）刺激,空白组不添加VEGF。并用MTT检测细胞增殖情况,Western-blotting检测细胞中P-ERK1/2表达水平。MTT比色结果表明,当VEGF质量浓度为5μg/L时对细胞增殖的促进作用最大,且试验组均高于对照组;Western-blotting结果显示,P-ERK1/2表达水平随VEGF的添加而显著增加,并在5μg/L时达到最大值（P〈0.05）。但在10、15、20μg/L质量浓度下其表达量差异不显著（P〉0.05）。这说明不同质量浓度VEGF对颗粒细胞增殖的促进作用各不相同,其中以5μg/L的VEGF效果最好。当颗粒细胞培养至48h时,P-ERK1/2表达水平较24h时略有提高,并在5μg/L VEGF刺激时达到最大值。VEGF可能是通过促进P-ERK1/2的表达进而促进颗粒细胞的增殖。  相似文献   

热应激条件对雄性小鼠精液顶体反应相关酶活力的影响     

赵珺  郝林琳  张莹  王佳  刘冰许  刘松财 《中国兽医学报》2011,31(5)

为探讨全球变暖和局部极端高温气候对雄性动物繁殖能力的影响,利用智能光照恒温培养箱模拟持续的热应激环境,建立小鼠热应激模型,设立了31,34,37℃3个不同的热应激温度组和22℃常温对照组,并在不同的温度下设置了热应激1,3,5,7,14 d 5个时间组,在不同的温度和时间下分别检测了小鼠精液的HYD、LDH、ACP和ACE等酶活性.结果显示,热应激条件下精子顶体反应相关酶活性均出现异常变化,从而影响精子的顶体反应及受精过程,对雄性小鼠的生殖机能产生影响.  相似文献   

部分小型猪与大型猪IGF-1基因的SNP分析     

郎松  邓景致  郝林琳  曾养志  王佳  李明谦  程美玲  刘松财 《中国兽医学报》2011,31(5)

利用PCR-SSCP技术对版纳微型猪、西藏小型猪、军牧猪和大白猪4个品种的IGF-1基因进行了多态性分析.结果表明,在外显子3上存在1个SNP(G201A),在外显子4上存在2个SNPs(A440G和T455C).各SNP位点基因及基因型频率统计结果显示,在G201A位点,A为大型猪的优势等位基因;在A440G和T455C位点,AT为大型猪的优势等位基因,小型猪的上述2个位点均没有共同的总体特征;2个等位基因型分布差异极为显著(P＜0.01),西藏小型猪的多态信息含量最低,而军牧猪的杂合程度最高.  相似文献   

家兔肌肉组织表达外源性生长激素释放因子对增重的影响   总被引：5，自引：0，他引：5  

张永亮  连继勤  刘松财  冯立文 《中国兽医学报》2003,23(1):56-58

用 Wicks法提取 pc DNA- GRF(1～ 32 )质粒并用 DNA Cacu L ator定量 ,同时制备原生质体。将 5 4只家兔随机分为 9组 ,分别注射质粒 pc DNA- GRF(1～ 32 ) 0 .4(用布比卡因处理 )、0 .4(含 10 %甘油 )、0 .4(含 2 5 %蔗糖 )、0 .2、0 .4、0 .6、0 .8mg及空质粒 0 .1mg和原生质体 1m L( ～ 组 )。分别于注射后 0、3、8、14、19、2 4、31d称重 ;于注射后 0、3、8、19、31d采血并分离血清 ,测定血清中 GH浓度 ,用 t检验进行统计学分析。结果表明 ,布比卡因处理组注射后 3d内GH浓度升高 6 5 %(P<0 .0 1) ,平均日增重 2 9g(P<0 .0 5 ) ;注射 0 .8mg组 31d平均日增重较对照组多 34 .6 2 %;注射原生质体组 31d平均日增重较对照组多 40 .5 7%(P<0 .0 5 )。 31d后将家兔屠宰 ,取注射部位肌肉提取 DNA和总RNA,用 PCR和 RT- PCR方法分别检测到了 GRF在肌肉中的存在和表达 ;用 EL ISA方法没能检测到血清中的 GRF抗体。  相似文献   

马鹿茸IGF-1基因5''端克隆及生物信息学分析     

郝林琳  刘松财  赵志辉  张明军  李敏  张永亮 《畜牧与兽医》2007,39(12):47-49

对鹿茸IGF-15’端调控序列进行生物信息学分析。提取鲜马鹿茸顶部组织基因组DNA，设计简并引物，利用PCR获得马鹿茸IGF-15’端调控序列及部分外显子（命名为CCS1074），用DNAMAN软件进行CCS1074与其他种属IGF-1基因的序列同源性分析；使用在线分析程序预测CCS1074的潜在转录因子结合位点并比较分析鹿茸区别于其他种属IGF-1的特有潜在转录因子，进行TATAbox、CpG岛、候选启动子区段及信号肽预测。结果获得了包含部分外显子的鹿茸IGF-1基因5’端（Genbank Accession No．DQ234266）；序列同源性分析表明鹿茸IGF-1与牛、羊IGF-1基因5’端存在差异；生物信息学分析表明：在CCS1074180～310base处存在CpG岛，在142～192、238—288、874～924、1359～1409base处可能存在启动子，存在253个潜在的转录因子结合位点；比较发现，ZF5F／ZF5．01和HAND／HAND2-E12．01是鹿茸IGF-1区别于牛、羊、人、猪、家鼠、斑马鱼IGF-1启动子区域的潜在转录因子，这些潜在转录因子与鹿茸生长的关系尚待进一步试验证实；综合分析表明CCS1074〈1～1580base为鹿茸IGF-15’端区域，1581—1966base为外显子1，1903—1966base为信号肽，1967～〉2087base为内含子1。  相似文献   

牛β—酪蛋白基因上游调控序列PCR扩增及克隆     

刘松财  张玉静 《中国兽医学报》1998,18(1):42-44

采用蛋白酶Ｋ法从母牛肝中提取染色体ＤＮＡ,将其纯化后作为ＰＣＲ扩增模板。以引物设计软件从牛β－酪蛋白基因上游６００ｂｐ至第１个外显子设计引物,引物长度１９ｎｔ,跨度６３７ｂｐ。扩增产物电泳结果显示,在分子量Ｍａｒｋｅｒ６５７ｂｐ带附近,出现一明显亮带,这一结果与设计产物大小基本一致。用低温冷冻法纯化ＰＣＲ产物,煮沸裂解法提取载体ｐＢｌｕｅｓｃｒｉｐｔⅡＫｓ＋质粒,ＥｃｏＲＶ酶切质粒ＤＮＡ,Ｔ４ＤＮＡ连接酶连接ＰＣＲ扩增片段和质粒ＤＮＡ。将重组质粒ＤＮＡ转化到ＪＭ１０１大肠杆菌中,经筛选、酶切、测序鉴定,结果表明所克隆的片段为牛β－酪蛋白基因上游调控序列。  相似文献   

垂体腺苷酸环化酶激活肽基因的合成及pIRES1-PACAP表达载体的构建     

刘松财  张永亮  任晓慧  戴建威  张玉静 《中国兽医学报》2004,24(5):460-462

根据文献报道的垂体腺苷酸环化酶激活肽 ( pituitary adenylate cyclase activating polypeptide,PACAP)基因序列和信号肽基因序列 ,设计 10条单链寡核苷酸片段 ,通过 5次 PCR扩增获得 PACAP基因片段 ,同时两端设有 Sm a 和 Xba 酶切位点 ,酶切后将其克隆至 p IRES1- neo质粒中 ,经 PCR、酶切和测序鉴定 ,证明已获得 PACAP基因并构建了 p IRES1- PACAP表达载体  相似文献