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用鼠红细胞膜纯化中华绒螯蟹血清凝集素的方法 总被引:1,自引:0,他引:1
本研究建立鼠红细胞膜吸附法纯化中华绒螯蟹(Eriocheir sinensis)血清凝集素的方法,并与硫酸铵盐析、凝胶过滤层析和离子交换层析等其他提取方法进行比较。实验结果表明,中华绒螯蟹血清经鼠红细胞膜吸附后,再由EDTA把结合的凝集素从膜上解离,可以获得纯化的高活性凝集素。该纯化物在PAGE中出现2个清晰的区带,一个是大分子的b带,另一个则是由3种大小相近的小分子组成的c区带;在SDS-PAGE中,则显示出3个分子量接近、约为100 000的条带。经50%饱和硫酸铵盐析或用Sephadex G200凝胶过滤层析法可浓缩但不能纯化中华绒螯蟹血清凝集素。经DEAE-Sephadex A50离子交换层析法可获得2个蛋白峰,其中只有1个峰有凝集活性,在PAGE中表现为a蛋白带。凝集活性较高、分子量较大的蛋白带。上述实验结果表明,应用鼠红细胞膜法可纯化中华绒螯蟹血清凝集素。 相似文献
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本研究旨在探明鸡恒定链跨膜区特定氨基酸在形成MHCⅡ-Ii复合物聚合中的作用特征.用大引物PCR定点突变法将鸡Ii链跨膜区2个氨基酸Gln47和Thr50分别突变为丙氨酸(Ala),再连接到pEGFP-C1载体中,构建含Ii-GFP融合基因的真核表达载体.同时还分别构建了含pDsRed2-N1-MHCⅡα、pDsRed2-N1-MHCⅡβ、pEG-FP-N1-MHCⅡa和pEGFP-N1-MHCⅡβ真核表达载体.用脂质体介导法将这些重组质粒单独或共转染至COS-7细胞,培养48 h后经荧光显微镜检测野生型Ii和突变型Ii与MHCⅡ类分子的细胞定位,并通过免疫共沉淀研究它们之间的相互关系.结果显示,野生型Ii链与MHCⅡα或MHCⅡβ之间存在细胞内的共定位,而突变型Ii与MHCⅡα或MHCⅡβ在细胞中共表达后未出现共定位现象.免疫共沉淀结果显示,在野生型Ii链与MHCⅡa或(和)MHCⅡβ单转染或三者共转染COS-7细胞后,均能检测到MHCⅡa-li、MHCⅡβ-Ii和MHCⅡ-Ii复合物,而突变型Ii链与MHCⅡα或(和)MHCⅡβ单转染或三者共转染COS-7细胞后,均检测不到MHCⅡα-Ii、MHCⅡβ-Ii和MHCⅡ-Ii复合物.因此Ii链跨膜区Gln47和Thr50 2个氨基酸对于MHCⅡ-Ii复合体的形成是至关重要的. 相似文献
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本试验通过研究日粮能量蛋白水平对4~6周龄肉仔鸡生产性能的影响,建立起体增重、耗料量和日粮能蛋水平之间的回归关系模型。根据市场行情和建立的模型,筛选具有最佳效益的能蛋水平。3周龄来源相同、体重均匀的AA肉仔鸡1440只,采用代谢能和粗蛋白3×4随机交叉试验设计,共分12个组,每组4个重复,每重复30只鸡。试验期为4~6周。玉米-豆粕型日粮,代谢能的3个水平分别为12.55、12.76、12.97MJ/kg;粗蛋白的4个水平分别为18%、19%、20%、21%。结果表明:1.日粮能量蛋白水平对肉仔鸡各周龄的体增重影响规律不一致,为了达到较大的体增重,按周龄配制日粮能更好地满足营养需要;2.体增重最大时的日粮营养水平不一定就是利润最大的营养水平,我们可根据市场行情以及体增重和耗料量与日粮能量蛋白水平之间的关系模型,选择具有最佳经济效益的能量蛋白水平。 相似文献
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