肠炎宁对猪大肠杆菌肠道感染的保护作用     

于欢坤  彭增斌  孙艳  单虎  王新  吴帅成 《中国兽医杂志》2023,(8):121-126

为评价中药肠炎宁对猪大肠杆菌感染小鼠肠道的保护效果，并初步研究其机制，本试验将SPF级BALB/c小鼠随机分为空白对照组、大肠杆菌K88组和肠炎宁组3个组，大肠杆菌K88组和肠炎宁组小鼠通过口服产肠毒素性大肠杆菌K88诱导腹泻模型，12 h后分别灌服生理盐水和肠炎宁药液，连续给药3 d,检测不同组别小鼠的存活时间、体重变化、肠道病理变化、结肠长度变化、肠道通透性和炎症因子等指标变化，并分析炎症因子信号通路蛋白表达情况。结果显示，与空白对照组相比，大肠杆菌K88组小鼠出现死亡，存活时间显著缩短(P<0.05),体重显著下降(P<0.05),结肠显著缩短(P<0.05),肠道通透性和血清髓过氧化物酶(MPO)活性显著升高(P<0.05),血清和结肠组织中TNF-α和IL-1β水平显著升高(P<0.05);与大肠杆菌K88组相比，肠炎宁组小鼠存活时间显著延长(P<0.05),体重显著增加(P<0.05),结肠显著增长(P<0.05),肠道通透性和血清MPO活性显著下降(P<0.05),血清和结肠组织中TNF-α和IL-1β水平显著下降(P...  相似文献   

乙醇加热回流法提取构树叶总黄酮工艺优化研究     

秦志华  蔡晴霞  王建琳  王述柏  谭子超  张林林  郭沛  单虎 《中国农学通报》2022,38(17):110-114

本试验旨在研究加热回流法提取构树叶总黄酮的最优提取工艺。采用单因素试验设计研究加热回流法提取构树叶总黄酮的适宜反应时间、反应温度、液料比和乙醇浓度,上述4个因素均分别设置为5个水平,以总黄酮提取量为评价指标筛选最佳反应条件;在此基础上采用正交试验设计研究最优提取工艺,对筛选确定的最佳提取工艺进一步进行重复验证试验和工艺放大验证试验。结果表明：单因素试验筛选获得最佳乙醇浓度为70%,最佳反应时间为2.5 h,最佳料液比为1:30,最佳反应温度为70℃;正交试验确定加热回流法提取构树叶总黄酮的最优提取工艺为：乙醇浓度70%、反应时间2.5 h,料液比1:30,反应温度80℃;重复验证试验和工艺放大验证试验得率分别为23.11 mg/g和23.13 mg/g。本工艺稳定性和可操作性良好,适用于构树叶总黄酮的提取。  相似文献   

仔猪PRRSV和PCV2混合感染的诊断及病毒基因型分析     

于海丽  陶伟杰  刘佳卉  单虎  杨海燕  张传美 《动物医学进展》2022,43(6):119-124

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猪繁殖与呼吸综合征病毒GP5蛋白特异性纳米抗体的原核表达及鉴定          下载免费PDF全文

王鑫  张洪亮  秦志华  郑乾坤  黄娟  董绍明  杨瑞梅  曲光刚  单虎 《中国动物检疫》2023,(10):106-111

为获得针对猪繁殖与呼吸综合征病毒（porcine reproductive and respiratory syndrome virus,PRRSV）GP5蛋白的特异性纳米抗体,并鉴定其抗原结合活性,以本实验室前期获得的PRRSV GP5蛋白特异性纳米抗体VHHGP5基因片段为模板,使用PCR对目的片段进行扩增,将扩增的片段经双酶切处理后连接到pColdSUMO-FLAG载体上,随后转化至E.coli TOP 10感受态细胞。经菌液PCR鉴定,将构建成功的重组质粒转化至E.coli BL21 （DE3）感受态细胞,用IPTG作为诱导剂对目的蛋白进行诱导表达,表达产物通过Ni-NTA亲和层析柱纯化。通过SDA-PAGE凝胶电泳分析表达及纯化后的蛋白,同时使用ELISA方法检测纯化后的纳米抗体效价,并使用Western blot鉴定纯化后的蛋白。SDS-PAGE结果显示,成功获得了大小约36 kDa的重组蛋白,利用原核表达系统制备的PRRSV GP5特异性纳米抗体重组蛋白以可溶性形式表达;ELISA结果显示,该纳米抗体结合抗原的效价为1:50 000;Western blot结果显示,该纳...  相似文献   

现代楼房养猪现状以及面临的问题分析     

王冠静  王述柏  单虎 《猪业科学》2022,39(8):50-51

楼房养殖是在传统养殖模式上研究出的新模式，能有效解决我国土地资源紧缺与猪肉需求量增长之间的矛盾。最初简单的平层叠加模式，环境控制问题不能得到很好的解决，猪场生物安全体系存在很大风险，为进一步吸取经验，完善各方面问题，系统成熟的楼房养殖模式成为当今的研究热点。  相似文献   

非洲猪瘟病毒截短p54蛋白的原核表达与纯化     

伦玉潇  李桂梅  单虎 《动物医学进展》2023,(2):1-7

旨在高效表达可溶性的非洲猪瘟病毒(ASFV) p54蛋白。去除可能影响p54蛋白可溶性表达的前50个氨基酸(aa),根据GenBank收录的ASFV p54基因序列设计引物，从第51个aa对应的基因序列起用PCR扩增截短的p54基因，并用分子克隆方法插入到带有TF及His标签的冷休克表达载体pCold TF上，构建pCold TF-p54重组质粒。经菌液PCR及测序验证后将重组质粒转化到BL21感受态细胞中，IPTG诱导表达p54重组截短蛋白，对IPTG诱导浓度、诱导时间进行优化，并对纯化重组蛋白时所用洗脱液的咪唑浓度进行探索。Western blot鉴定p54重组截短蛋白的反应原性，并探究TF标签对于该蛋白反应原性的影响。结果表明，成功构建了pCold TF-p54重组质粒，经终浓度为1 mmol/L的IPTG于16℃诱导9 h时，p54重组截短蛋白的表达量最高，分子质量约为76 ku。经50 mmol/L咪唑洗脱液洗脱可得到较纯的p54重组截短蛋白，经人鼻病毒(Human rhinovirus, HRV)3C Protease切除TF及His标签后，再次纯化可得到无标签且高纯度的p...  相似文献