犬细小病毒结构蛋白VP2基因的克隆和在毕赤酵母中表达     

贺英  史秋梅  潘素敏  张艳英  邵欣华 《兽医大学学报》2013,(11):1642-1646

表达犬细小病毒VP2蛋白（CPV—VP2）,用于重组蛋白免疫小鼠制备单克隆抗体,并为犬细小病毒病的诊断奠定基础。采用PCR方法对CPVVP2基因进行扩增,将CPVVP2基因克隆到毕赤酵母分泌表达载体pPICZAA中,构建真核重组表达载体pPICZAA-VP2,将该重组质粒线性化后,转化巴斯德毕赤酵母（Pichiapastoris）X-33中,甲醇诱导表达CPVVP2,SDs_PAGE和Westernblotting鉴定表达蛋白。结果,成功扩增了CPV—VP2基因,构建了真核重组表达载体pPICZAA—VP2,在毕赤酵母菌中表达出约68000蛋白。Western—blotting鉴定表明,表达蛋白为目的蛋白VP2。表达菌株扩大表达体系于培养基中培养,上清液用70％过硫酸铵4℃沉淀浓缩,采用His选择镍-亲和层析柱分离纯化获得重组的酵母表达的带组氨酸标签的VP2蛋白,表达量约3mg／L。结果表明,在毕赤酵母中成功地表达了CPV—VP2蛋白,且能被犬细小病毒VP2单克隆抗体特异识别。  相似文献   

牛细菌性呼吸道疾病研究进展     

朱利霞  王洪彬  赵希艳  王双月  高光平  史秋梅 《黑龙江畜牧兽医》2019,(7):63-66

  相似文献   

牛冠状病毒NS 32蛋白的原核表达及免疫原性分析     

王苗  杜万年  田占云  于秀剑  刘勃兴  吴同垒  史秋梅  张志强 《现代畜牧兽医》2020,(1):1-5

试验为了研究牛冠状病毒NS32蛋白的免疫原性,以NS32作为研究对象,通过原核表达分析其抗原性。首先,从牛冠状病毒基因组中克隆出NS32编码基因,进一步将其克隆到原核表达载体上;其次,通过纯化重组的His-NS32蛋白进一步免疫小鼠,测定其特异性抗体水平评估NS32蛋白免疫原性。本试验成功地利用反转录PCR克隆出NS32基因,其片段大小为837 bp,序列同源性分析结果显示,该基因在不同牛冠状病毒分离株间高度保守。通过原核表达系统纯化蛋白并成功获得目的蛋白HiS-NS32,SDS-PAGE显示其大小约为32 ku。将纯化的蛋白免疫小鼠,免疫小鼠能够产生针对NS32蛋白的高水平特异性抗体,证明牛冠状病毒非结构蛋白NS32同样具有较高的免疫原性。本试验通过表达NS32蛋白证实了其免疫原性,为后期的NS32蛋白研究奠定了基础。  相似文献   

貉源细小病毒和沙门氏杆菌混合感染的诊治     

肖丽荣  周琦  李巧玲  庞洪泽  贾青辉  张召兴  史秋梅 《黑龙江畜牧兽医》2019,(4)

为了研究秦皇岛某养殖场母貉死亡的原因,笔者无菌采集死亡貉的心血、肝脏、肠内容物等病料组织,采用胶体金试纸条法、PCR法、细菌分离鉴定、K-B纸片法等分别检测细小病毒、病原菌感染情况及病原菌的耐药性。结果表明:死亡貉细小病毒阳性,病原菌为沙门氏杆菌;分离到的沙门氏杆菌对头孢曲松、头孢拉啶、环丙沙星等5种药物敏感,对其他药物存在不同的耐药性。说明貉源细小病毒和沙门氏杆菌混合感染是引起母貉死亡的主要原因。临床上对细小病毒无特效治疗药物,接种疫苗是预防该病的主要方法。  相似文献   

20味中药对貉源绿脓杆菌地方流行株的体外抑菌活性研究     

周琦  肖丽荣  张召兴  李巧玲  贾青辉  史秋梅 《黑龙江畜牧兽医》2019,(2)

为了研究20种中药对貉源绿脓杆菌地方流行株HBP-G1的体外抑菌活性,试验采用管碟法和试管二倍稀释法分别测定20种中药对貉源绿脓杆菌地方流行株HBP-G1的抑菌圈直径大小和最小杀菌浓度(MBC)。结果表明:金银花、黄柏、板蓝根、诃子、五味子5种药物对貉源绿脓杆菌地方流行株HBP-G1体外抑菌效果好,抑菌圈直径在17. 4～19. 3 mm之间,MBC在7. 825～15. 65 mg/mL之间;其他药物存在不同程度的敏感性。说明此20种中药对貉源绿脓杆菌地方流行株有不同程度的抑菌活性。  相似文献   

一株致水貂流产的大肠杆菌的分离鉴定及耐药性检测     

肖丽荣  周琦  李巧玲  贾青辉  张艳英  高桂生  张召兴  史秋梅 《黑龙江畜牧兽医》2019,(6)

为检测唐山某水貂养殖场引起母貂流产的病原菌及其耐药情况,试验采用病原检测、细菌分离与形态观察、生化试验、16S rRNA PCR检测、致病性试验等方法对水貂致病原进行鉴定,并采用药敏试验测定其耐药情况。结果表明:水貂阿留申病毒、犬瘟热病毒、细小病毒、加德纳杆菌和布鲁氏杆菌等病原检测为阴性;从无菌采集的阴道分泌物及胎儿等病料组织中分离到1株病原菌,将其命名为HB-E2株,该株病原菌为两端钝圆、短小杆状的革兰氏阴性菌,通过PCR检测鉴定为大肠杆菌; HB-E2株大肠杆菌对小白鼠具有很强的致病性,对头孢曲松、头孢克肟、环丙沙星等5种药物高度敏感,对氟苯尼考、头孢拉定、阿米卡星等5种药物中度敏感,对氨苄西林、阿莫西林、新霉素等6种药物耐药。  相似文献   

蓝狐出血性肺炎病理组织学观察     

李国芳  石东东  杨彩然  史秋梅 《黑龙江畜牧兽医》2018,(14)

正由绿脓杆菌引起的出血性肺炎近几年在我国各地养殖场频繁发病,目前已经成为危害蓝狐、水貂等毛皮动物养殖产业的主要传染病之一。出血性肺炎又叫绿脓杆菌病,是铜绿假单胞菌感染所造成的一种急性、接触性传染病,经常发生于温暖潮湿的秋季,病变特征主要是出血性肺炎和败血症。该病发病急,病程短,死亡快,死亡率为6%～54%,毛皮动物中水貂  相似文献   

死胎流产的蓝狐体内检出致病性大肠杆菌     

李巧玲  张召兴  张志强  吴同垒  李蕴玉  史秋梅  张艳英  贾青辉  李佩国 《中国兽医学报》2018,(8)

2015年4月,唐山地区不同的养殖场蓝狐出现了死胎、流产,无菌采集流产蓝狐阴道分泌物、死胎等病料组织,PCR检测阿留申病毒、伪狂犬病病毒、犬瘟热病毒均为阴性,通过形态学观察、培养特性、生化试验和16SrRNA等方法,鉴定出5株大肠杆菌。对分离的5株大肠杆菌进行动物致病性试验、血清型及毒力基因检测。结果表明,5株大肠杆菌分离菌株均对怀孕的小鼠和蓝狐有致病性;分离的5株致病性大肠杆菌属于3个不同血清型(O89、O3、O38),其中O89为流行血清型;毒力基因fuyA、irp2、papC、fimC、iucDa、vat的检出率分别为100%,80%,60%,80%,60%,60%,其中,毒力基因iutA、Ler、eaeA均未检出,致病性大肠杆菌流行血清型O89分离菌株同时携带6个毒力基因。药敏试验结果显示,5株致病性大肠杆菌均对丁胺卡那霉素、大观霉素、氟苯尼考3种药物敏感,对环丙沙星、恩诺沙星、头孢曲松、庆大霉素、诺氟沙星等药物中度敏感,对其他的药物存在不同耐药性。本研究为河北唐山地区的蓝狐死胎流产的防治提供基础。  相似文献   

水貂出血性肺炎的诊治     

李国华  史秋梅 《中国兽医杂志》2010,46(7)

水貂出血性肺炎是由绿脓杆菌引起的貂的一种急性败血性传染病.绿脓杆菌又称铜绿假单孢杆菌,为假单胞菌属,为需氧的革兰阴性杆菌,不产生芽孢.触酶阳性,广泛存在于水、土壤、空气、动物的肠道和皮肤,为一种条件性致病菌.  相似文献   

动物性食品源大肠杆菌O血清型鉴定及其K88菌毛基因检测   总被引：1，自引：0，他引：1  

张艳英  高桂生  史秋梅  高光平  刘申 《中国畜牧兽医》2013,40(3):185-188

本研究对河北省冀东地区农贸市场和超市采集的生猪肉、生鸡蛋和生羊肉等分离得到的20株大肠杆菌进行大肠杆菌血清型鉴定;并检测不同血清型大肠杆菌的K88菌毛基因。采用常规方法进行大肠杆菌的O血清型鉴定,用PCR方法检测K88菌毛基因。分离鉴定的20株大肠杆菌有7种血清型,包括O38、O78、O88、O11、O107、O91、O9,其中O38、O78为优势血清型菌,均占分离菌株的25%(5/20)。在分离的动物性食品源大肠杆菌中有30%(6/20)的菌株K88菌毛基因扩增呈阳性。结果表明,O78、O38为冀东地区动物性食品源大肠杆菌常见血清型,30%(6/20)的菌株K88菌毛基因扩增阳性。  相似文献