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猪肌生成抑制素C末端80氨基酸编码基因的合成及其原核表达 总被引：1，自引：0，他引：1
将猪肌生成抑制素编码序列下游883-l126bp按大肠杆菌嗜好密码子进行优化，将优化后序列双链分成l2个单链片段(F1、F2、F3、R6、R5、R4、F4、F5、F7、R3、R2、R1)，采用化学合成方法合成，每对相邻互补片段之间有20bp序列交叉重叠。F1长38bp，Rl长36bp，其他片段均40bp长，Fl和R1片段两端分别加上限制性内切酶NcoI和XhoI的识别位点序列。经PCR扩增出254bp片段，该片段与pMDl8—T载体连接，转化JMl09感受态细胞，所得阳性克隆进行测序分析，得到的克隆序列与设计的序列完全一致，表明成功地获得了猪肌生成抑制素下游编码序列克隆载体。从阳性细菌中提取质粒，经NcoI和XhoI酶切，回收254bp目的片段，定向克隆到pET28a中，转化DH5α受体菌，提取质粒，再转化到BL2l(DE3)中，成功筛选出阳性克隆。阳性菌经IPTG诱导，通过SDS—PAGE，检测出猪肌生成抑制素的表达。 相似文献
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利用Ｄｉｆｆｅｒｅｎｔ Ｉｎｔｅｒｆｅｒｅ Ｃｏｎｔｒａｓｔ Ｍｉｃｒｏｓｃｏｐｅ（ＤＩＣＭ法）、ＤＮＡ染色法、Ｅｌｅｃｔｒｏｎ Ｍｉｃｒｏｓｃｏｐｅ（ＥＭ法）３种方法检测精子核空泡，观察牛精子核空泡的大小及出现的多发部位。结果表明，应用ＤＮＡ染色法检测牛精子核空泡是最有效的方法，同是地发现牛精子核空泡多出现在精子头部赤道板区和核项区。 相似文献
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SRY基因是哺乳动物性别分化与控制的主导基因,参与有序的、多层次调控性别分化和控制的过程。本研究从牛血中提取总RNA,设计特异性引物,利用RT-PCR技术扩增出SRY基因HMG box基因片段,将该片段与pMD18-T载体连接并转化到大肠杆菌(E.coliTop)10中,提取质粒并用EcoRⅠ、AvrⅡ酶消化,将消化后的目的基因纯化并回收,与经同样的酶消化后并纯化回收的载体pPIC9K连接并转化到E.coliTop10,获得重组表达质粒pPIC9K-SRYHMG box,经PCR、酶切、测序验证了此载体构建成功,为下一步使用毕赤酵母表达SRY蛋白打下基础。 相似文献
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吕文发 《吉林农业大学学报》2012,34(1):1-4
摘要:肌肉生成抑制素(Myostatin,MSTN)作为骨骼肌发育的负调控因子,其调控功能对畜牧生产具有重要的意义。从遗传选育、基因重组、免疫中和、MSTN结合蛋白以及受体结合与信号转导等方面综述了MSTN调控的最新研究进展。 相似文献
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肌生成抑制素（MSTN）是肌肉生长的一种负调控因子,隶属于TGF-β超家族,具有TGF-β超家族所有特点。MSTN突变产生的双肌现象给畜牧生产和医药业带来巨大影响。作者综述了近些年来用分子技术研究MSTN抑制剂的成果以及MSTN主要抑制剂的特点,并对MSTN在农业生产和医学领域的发展趋势和应用前景等进行了展望。 相似文献
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牛肌肉生成抑制素基因真核表达载体的构建及其在COS-7细胞中的表达 总被引：2，自引：1，他引：2
将构建的牛pMD 18-T-MSTN克隆载体与真核表达载体pef-dhfr1a酶切,回收牛MSTN目的片段及pef-dhfr1a载体,构建了牛MSTN基因的真核表达质粒pef-dhfr1a-MSTN,然后转染COS-7细胞,将牛MSTN成熟蛋白编码序列在COS-7细胞中进行了表达.提取转染细胞的总RNA,采用RT-PCR和Western-blotting方法,分别从mRNA水平和蛋白质水平上检测到了牛MSTN基因在COS-7细胞中的表达产物,证明已经成功构建出该基因的真核表达载体. 相似文献
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