捻转血矛线虫Hc-FAR-4蛋白的表达特性及其与配体结合能力分析     

韦海典  陈学秋  黄艳  时恒枝  周静茹  吴飞  杜爱芳  杨怡 《中国农业科学》2019,52(17):3059-3068

【目的】捻转血矛线虫(Haemonchus contortus)寄生在牛羊等反刍动物的皱胃中,引起的捻转血矛线虫病在我国呈全国性流行。文章通过研究脂肪酸与视黄醇结合相关蛋白Hc-FAR-4的表达特性及配体结合能力,以了解其在捻转血矛线虫生长、发育、繁殖过程中的作用。【方法】对Hc-far-4进行克隆、并且构建原核表达载体pET-30a-Hc-far-4,pET-30a-Hc-far-4重组质粒经过PCR与双酶切鉴定准确无误之后转化到E. coli BL21感受态细胞中,用0.1 mmol·L ^-1IPTG(isopropyl-β-d-thiogalactoside)进行重组蛋白的诱导表达。收集重组蛋白rHc-FAR-4,利用荧光分析法,研究rHc-FAR-4蛋白与DAUDA、视黄醇、油酸的结合能力。配体结合试验是依据荧光物质retinol与脂肪酸类似物DAUDA在极性和非极性溶液中,在某一波长的激发光激发下,所发出的荧光光谱随之变化的特性,判断rHc-FAR-4蛋白是否具有与DAUDA、retinol结合的能力。再在体系中加入非荧光长链脂肪酸油酸,根据荧光光谱的变化情况判定油酸能否分别与DAUDA、retinol竞争目的蛋白的脂肪酸结合位点,间接说明目的蛋白能否与非荧光脂肪酸油酸结合。同时制备鼠源多克隆抗体,利用ELISA技术检验免疫后小鼠的抗体效价,抗体效价合适即可收集小鼠血清。收集的血清用于免疫组织荧光（IHF）试验,探究Hc-FAR-4的表达部位,从而推测其功能。该试验过程为：对捻转血矛线虫进行石蜡包埋,石蜡切片,抗原修复,3%的BSA 于4℃封闭过夜,自制鼠源多克隆抗体作为一抗孵育1 h; Alexa Fluor? 488 nm羊抗鼠IgG作为二抗避光孵育1 h,DAPI染色30 min,激光共聚焦显微镜检查染色情况。利用荧光定量PCR技术分析Hc-far-4在捻转血矛线虫各个主要阶段的表达特性。【结果】成功克隆目的基因Hc-far-4,测序结果与Sanger数据库中捻转血矛线虫far-4基因序列（>HCISE00908800.t1）相似度为 99.9%;重组质粒 pET-30a-Hc-far-4在E. coli BL21中成功表达,在诱导8 h后达到峰值。经过ELISA检测,结果显示制备的鼠源多克隆抗体效价达到1﹕1 024 000—1﹕2 048 000,可用于后续试验。Western Blot鉴定结果显示rHc-FAR-4重组蛋白带有His标签,并且条带大小为25 kD,结果符合预期。制备的鼠源多克隆抗体经过Western Blot鉴定,能够与天然Hc-FAR-4 蛋白结合,说明该抗体可用于IHF试验。配体结合试验结果表明 rHc-FAR-4蛋白具有结合脂肪酸与视黄醇的能力。荧光定量PCR分析表明,Hc-far-4在四期幼虫中的转录水平最高;IHF试验表明,Hc-FAR-4主要表达在捻转血矛线虫的肠壁、性腺中。综上推测Hc-FAR-4蛋白主要在寄生生活阶段参与了转运脂肪酸与视黄醇,为捻转血矛线虫的生长发育与生殖提供营养物质。【结论】捻转血矛线虫 FAR-4 蛋白能够结合脂肪酸类似物DAUDA和视黄醇,但是与油酸的结合能力较弱,主要表达在肠壁,在性腺、角皮中也有少量表达,其基因在进行营寄生生活阶段时表达量达到峰值。  相似文献   

牛口蹄疫诊断与防控     

吴飞 《养殖与饲料．饲料世界》2021,(4)

牛口蹄疫传染性强,危害性大,严重影响牛群的生长发育。由于牛口蹄疫属于烈性传染性疾病,发病后极易导致大规模的传播扩散,为减少损失,应对病牛进行扑杀处理。同时,为降低牛口蹄疫发病率,积极做好综合防控工作具有重要的现实意义。基于此,本文着重对牛口蹄疫的综合防控对策进行了研究分析。  相似文献   

隐孢子虫LAMP检测方法的建立及其在牦牛中的应用     

王丹  任玫  吴飞  常建军  李璐瑶  康明  林青 《动物医学进展》2018,(10)

为了探索和建立隐孢子虫LAMP检测方法,以便能快速、简便检测牦牛隐孢子虫的感染情况,基于GenBank中牦牛源隐孢子虫18SrRNA基因序列,设计1组LAMP引物,优化并建立LAMP反应体系。对所建立的LAMP方法进行特异性、重复性、敏感性试验,并用该方法对牦牛的临床样本进行检测。结果显示,建立的LAMP方法特异性、重复性良好,其敏感性是套式PCR的8倍。LAMP方法与套式PCR临床检出率对比,符合率100%。表明成功建立了隐孢子虫的LAMP检测方法,该方法特异性和灵敏性良好,可以应用于牦牛粪便临床样本的检测。  相似文献   

犬猫皮肤真菌病的综合防治     

吴飞  杨佳鑫 《兽医导刊》2019,(7)

正犬猫皮肤真菌病是犬猫较为常见的一种皮肤疾病,其病原为寄生于犬猫被毛、表皮以及趾爪角质蛋白中的真菌。犬猫皮肤真菌病主要发生于体弱多病的成年犬猫或者营养不良的幼龄犬猫。一旦患病,犬猫的皮肤表面会出现损伤、结痂以及脱毛的现象,不仅病程较长,同时治疗难度大,容易复发。近年来,随着宠物犬猫数量的不断增加,其皮肤真菌病给人类的健康造成了严重的威  相似文献   

扬州市河蟹产业发展状况与对策建议     

王曙光  杨显祥  吴飞  颜慧  韩珂珂  丁文岭 《河北渔业》2019,(10):54-56

扬州市是全国河蟹的重要产区,经过多年发展,河蟹产业已成为全市渔业经济的支柱产业、特色产业、拳头产业。本文阐述了扬州市河蟹发展历程、模式演变和产业特点,分析了河蟹产业面临的问题,提出了在农业供给侧结构性改革新形势下高质量发展河蟹产业的对策建议。  相似文献   

Fenton法对沼液中三种四环素类和三种磺胺类抗生素氧化去除的研究   总被引：1，自引：0，他引：1  

迟翔  周文兵  武林  吴飞  肖乃东  朱端卫 《农业环境科学学报》2018,37(11):2451-2455

近年来各类抗生素广泛地用于畜禽养殖,经动物代谢后随粪便和尿液排出体外。代谢物通过沼气工程处理后,得到的沼液又多用于灌溉,使得抗生素进入环境被农作物吸收,通过食物链的传递对人体产生危害。因而沼液中抗生素的去除尤为重要。采用Fenton氧化技术去除沼液中的三种四环素类和三种磺胺类抗生素,通过设置单因素实验考察了pH值、H_2O_2浓度、摩尔比n(H_2O_2)/n(Fe~(2+))对抗生素去除的影响。结果表明,最佳反应条件为pH=4,H_2O_2浓度为0.4 mol·L~(-1),n(H_2O_2)/n(Fe~(2+))=10∶1,在此条件下,四环素、土霉素、金霉素去除率分别为91.83%、92.38%、80.52%,磺胺甲恶唑、磺胺甲基嘧啶、磺胺嘧啶去除率分别为93.60%、91.97%、91.60%。同时TN、TP、TK的保留率分别为96.0%、97.7%、97.2%。可见,Fenton氧化法对沼液中抗生素的去除有良好的效果,同时又保证其养分的保留,为沼液中抗生素的去除提供了一条可能的途径。  相似文献   

珠江三角洲输变电线路工程水土保持设计探讨   总被引：1，自引：0，他引：1  

吴飞 《亚热带水土保持》2009,21(1):68-70

随着国民经济持续快速的发展,珠江三角洲电力市场的需求日益增加,但电力输电线路的建设会造成沿线地区的水土流失。本文通过广州富山220kV变电站线路扩建工程实例,介绍了一些切实可行的水土保持措施,为保证电力安全输送、减少水土流失、保护生态环境提供了科学依据。  相似文献   

断奶仔猪血清氨基酸含量和生化参数对不同蛋白质水平饲粮的动态响应     

王利剑  崔志杰  何流琴  姚继明  吴飞  韩慧  范文君  李铁军 《动物营养学报》2017,29(1)

本文旨在研究断奶仔猪血清氨基酸含量和生化参数对不同蛋白质水平饲粮的动态响应。选取18头35日龄平均体重为(10.0±1.0)kg三元(杜×长×大)杂交断奶阉公猪,随机分为3组(每组6个重复,每个重复1头猪),并分别饲喂蛋白质水平为14%(LP)、17%(M P)和20%(HP)的饲粮。每头试验猪安装颈动脉血管插管,术后恢复5 d,于第6~8天正式试验。每天采食前,采食后30、60、120、180和300 min连续采集颈动脉血液10 m L,分别检测血清游离氨基酸含量和相关生化指标。结果表明:不同蛋白质水平饲粮对仔猪采食前后各时间点血清中游离赖氨酸(Lys)、蛋氨酸(Met)、苏氨酸(Thr)、色氨酸(Trp)、天冬氨酸(Asp)、丝氨酸(Ser)、甘氨酸(Gly)和谷氨酸(Glu)含量影响均不显著(P0.05)。但血清中Lys、Met、Thr、Trp含量随饲粮蛋白质水平的降低而升高。HP组仔猪采食前后各时间点血清游离氨基酸[缬氨酸(Val)、异亮氨酸(Ile)、精氨酸(Arg)]和尿素含量显著高于MP和LP组(P0.05)。采食后120~300 min HP组血清Leu含量显著高于LP组(P0.05)。采食后各时间点LP组血清总蛋白(TP)、白蛋白(ALB)含量及碱性磷酸酶(ALP)活性显著高于HP和MP组(P0.05)。各组仔猪采食后血清游离氨基酸含量和相关生化指标随时间变化无显著差异(P0.05)。综上所述,断奶仔猪饲粮在平衡4种氨基酸(Lys、Met、Thr、Trp)的基础上,常规饲粮蛋白质水平降低3个百分点,血清游离Val、Ile、Arg含量显著降低,但对血清中其他氨基酸和相关生化指标无显著影响;而蛋白质水平降低6个百分点,血清游离Leu和尿素含量显著降低,TP、ALB含量和ALP活性显著升高,但对血清中其他氨基酸和相关生化指标的影响不显著。  相似文献   

α-酮戊二酸和大蒜素对生长猪生长发育及养分表观消化率的影响     

刘少娟  陈家顺  康保聚  蒋谦  何流琴  吴飞  黄牛  李欢  印遇龙  姚康 《动物营养学报》2017,29(9)

本试验旨在研究α-酮戊二酸(AKG)和大蒜素对生长猪生长性能、养分表观消化率、血清生化指标以及肠道形态结构的影响。选用40头初始平均体重为(30.64±1.35)kg的健康三元(杜×长×大)杂交生长猪,按体重相近、性别比例相同原则随机分为5组,每组8个重复,每个重复1头猪。5组试验猪分别饲喂无抗基础饲粮(对照组)、无抗基础饲粮+25 mg/kg抗生素(Ⅰ组)、无抗基础饲粮+1%AKG(Ⅱ组)、无抗基础饲粮+0.5%大蒜素(Ⅲ组)、无抗基础饲粮+1%AKG+0.5%大蒜素(Ⅳ组)。预试期7d,正试期21d。结果表明:1)与对照组相比,Ⅰ组和Ⅳ组生长猪的平均日增重分别提高了10.80%和9.91%,但差异不显著(P0.05)。2)与对照组相比,Ⅱ组钙的表观消化率显著提高(P0.05),Ⅳ组粗蛋白质、钙和磷的表观消化率显著提高(P0.05),且Ⅳ组较Ⅰ组显著提高了磷的表观消化率(P0.05)。3)与对照组相比,Ⅱ组血清免疫球蛋白G(IgG)含量显著提高(P0.05);Ⅲ组血清甘油三酯(TG)含量显著降低(P0.05);Ⅳ组血清总胆固醇(TCHO)和TG含量显著降低(P0.05),血清碱性磷酸酶(AKP)、谷草转氨酶(AST)和谷丙转氨酶(ALT)活性及血清免疫球蛋白A(IgA)、IgG含量显著提高(P0.05)。与Ⅰ组相比,Ⅳ组血清TCHO和TG含量有降低趋势(P0.05),血清AST和ALT活性显著提高(P0.05)。4)与对照组相比,Ⅳ组回肠绒毛高度及空肠和回肠的绒毛高度/隐窝深度值显著提高(P0.05)。5)与对照组相比,Ⅳ组回肠中杯状细胞和淋巴细胞数目显著增加(P0.05)。综上,无抗饲粮中联合添加1%AKG和0.5%大蒜素可通过改善肠道形态结构,提高对粗蛋白质、钙和磷等养分的消化吸收能力,促进肠道健康,进而改善生长猪的生长性能。  相似文献   

低温胁迫对俄罗斯大果沙棘抗寒生理指标的影响   总被引：1，自引：0，他引：1  

吴飞  朱生秀  向江湖  李万栋 《安徽农业科学》2017,45(10)

[目的]探讨不同低温条件下,沙棘抗寒生理指标变化及与抗寒性的关系。[方法]以俄罗斯大果沙棘1年生枝条为试验材料,通过-30~-10℃低温胁迫处理,测定其含水量、渗透调节物质、保护酶活性指标与抗寒性的关系。[结果]沙棘在低温条件下,枝条中自由水/束缚水比值较小,丙二醛含量随温度的变化而呈规律性变化;可溶性糖、可溶性蛋白含量随温度呈相反的变化趋势;随着温度的降低,沙棘枝条中保护酶活性增强。[结论]沙棘应对低温能力较强,通过各生理指标调节系统稳定,具有较强的渗透调节能力。  相似文献