青霉素钠完全抗原制备及其抗体水平检测     

杜军  贾芳  张玉彦  周学章 《中国畜牧兽医》2011,38(2):193-196

利用戊二醛法偶联青霉素钠（Penicillin,PEN）与BSA和OVA,制备完全抗原PEN-BSA和PEN-OVA。经紫外扫描及SDS-PAGE电泳鉴定完全抗原PEN-BSA和PEN-OVA偶联成功,并进行动物免疫制备抗血清,建立间接ELISA法测定免疫血清效价,经测定抗原PEN-BSA和PEN-OVA均达到理想的免疫效价,为进一步制备青霉素钠单克隆抗体及其青霉素钠药物残留快速检测试剂盒奠定基础。  相似文献   

奶牛乳房炎白色念珠菌的分离鉴定及生物学特性研究     

何芳  卢金霞  冯峰  周学章 《中国畜牧兽医》2016,43(12):3356-3362

试验旨在了解宁夏地区奶牛真菌性乳房炎的发生情况,为诊断和治疗真菌性奶牛乳房炎提供有效依据。采集宁夏周边地区各奶牛场使用抗生素治疗无效的乳房炎奶样,对奶样中的真菌进行分离鉴定,并对分离菌进行生物学特性研究。通过选择性培养基从乳房炎奶样中获得真菌,进一步应用生物化学和分子生物学手段鉴定出样品中的真菌为白色念珠菌。通过溶血性、磷脂酶活性及产膜等方面的研究,证实其具有不同毒力,分离菌株对试验动物有较强的致病性。同时,采用药敏纸片法对分离株进行药敏试验,结果显示,菌株对临床常用抗生素耐药,对临床常用抗真菌药物敏感。结果表明,宁夏地区真菌性乳房炎奶样中分离出的致病菌均为白色念珠菌,感染率为43%,分离株具有较强的毒力,对常用抗生素耐药,对抗真菌药物和中药敏感。  相似文献   

禽源巴氏杆菌链霉素耐药基因StrA的克隆及原核表达     

高丰  金天明  喻华英  周学章  邓旭明  阎继业 《中国兽医学报》2004,24(3):245-247

根据巴氏杆菌链霉素耐药基因 Str A序列 ,设计合成 1对引物 ,以临床分离的禽源巴氏杆菌链霉素耐药菌株质粒DNA为模板 ,通过 PCR技术 ,扩增出禽源巴氏杆菌的 Str A基因片段。将长约 80 4 bp的 Str A目的基因克隆到 p GEM-T载体上 ,通过核苷酸序列测定 ,结果表明 ,克隆的 Str A基因长约 80 4 bp,与文献报道 (NC- 0 0 1774 )的同源性为99.8% ,只有 1个碱基不同 (6 9位 T→ C) ,但所编码的氨基酸没有改变。将 Str A基因按正确的阅读框架定向克隆到原核表达载体 p ET- 2 8c( )中 ,重组质粒酶切鉴定正确后 ,将构建好的原核表达质粒 p ET- 2 8c( ) - Str A转化到受体菌BL- 2 1(DE3)中 ,经 IPTG诱导后 ,进行 SDS- PAGE电泳 ,经检测 ,Str A外源基因的表达产物占菌体总蛋白的 12 %。蛋白表达形式为包涵体表达  相似文献   

水泡性口炎病毒核酸疫苗对BALB/c小鼠免疫原性研究     

周学章  高丰  李元刚  王玉炯 《中兽医医药杂志》2007,26(5):8-12

成功构建了pIRES-G1500基因的重组核酸疫苗质粒,用核酸疫苗免疫BALB/c小鼠,测定注射质粒的小鼠细胞免疫和体液免疫指标相关参数的变化,评价核酸疫苗在体内表达效果。  相似文献   

水泡性口炎病毒抗原决定簇单克隆抗体研究   总被引：2，自引：0，他引：2  

周学章  高丰  宋德光  李元刚 《中国预防兽医学报》2007,29(7):532-536

用RT-PCR的方法扩增水泡性口炎病毒G蛋白抗原决定簇部分基因片段,构建克隆质粒pMD18-T-G_(660)和表达质粒pET-28a-G_(660),转化宿主菌BL21(DE3),经IPTG诱导后得到高效表达,表达蛋白质的分子量为30 Ku,占总蛋白的20.745%。切胶回收蛋白测定蛋白含量,作为免疫BALB/c小鼠的免疫原,免疫BALB/c小鼠4次,按单克隆抗体制备技术,获得3株稳定分泌抗表达的G蛋白的单克隆抗体L细胞株,抗体类型鉴定属于IgG亚类。  相似文献   

水泡性口炎的的研究进展     

褚秀玲  成军  周学章  高丰 《吉林畜牧兽医》2004,(7):9-12

水泡性口炎(Vesicular Stomatitis,VS)是由水泡性口炎病毒(Vesicular Stomatitisvirus,VSV)引起马、牛和猪的一种重要的传染病。临床表现为口腔粘膜、乳房和蹄部冠状带皮肤出现水泡和溃疡。VSV感染牛和猪时,在临床症状上极易与口蹄疫(FMD)、猪水泡病(SVD)、猪水泡疹(VES)混淆。且能够感染人。被国际兽疫局(OIE)列为A类传染病。因此,对VSV致病机理的研究有着重要的社会经济和公共卫生意义。本文从病原及其分子生物学特点、分布与生态学以及致病机理三个方面对水泡性口炎的研究进展进行综述。  相似文献   

苦参碱对金黄色葡萄球菌入侵BMECs的干预作用     

张想军  冯峰  周学章 《西北农林科技大学学报(自然科学版)》2020,48(9):17-23

【目的】研究苦参碱在金黄色葡萄球菌入侵奶牛乳腺上皮细胞(BMECs)过程中的干预作用及其原因,为苦参碱的临床应用奠定基础。【方法】用CCK-8法检测苦参碱对BMECs增殖的影响,用庆大霉素保护试验检测苦参碱对金黄色葡萄球菌入侵BMECs的影响;并在苦参碱干预金黄色葡萄球菌感染BMECs后,分别采用RT-qPCR检测BMECs中抗菌肽基因的表达,Greiss法检测NO的分泌,Western blot检测NF-κB通路蛋白p65的表达。【结果】25～100μg/mL苦参碱均能促进BMECs的增殖,并能抑制金黄色葡萄球菌入侵BMECs;苦参碱干预能显著下调BMECs中抗菌肽基因TAP和BNBD5 mRNA的表达,抑制NO的分泌和NF-κB的活化,并呈剂量依赖性。【结论】苦参碱通过抑制NF-κB的活化来抑制金黄色葡萄球菌入侵BMECs,并可显著下调金黄色葡萄球菌感染的BMECs中抗菌肽基因的表达。  相似文献   

金黄色葡萄球菌PV-杀白细胞素的表达及其对奶牛乳腺上皮细胞的损伤作用     

马维武  周学章 《畜牧兽医学报》2019,(10)

研究产PV-杀白细胞素(PVL)金黄色葡萄球菌ATCC49775、pvl缺陷株△pvl 49775和相应的回补株C-△pvl 49775以及体外重组的PVL(rPVL)对奶牛乳腺上皮细胞的损伤作用,为系统研究金黄色葡萄球菌感染奶牛乳腺上皮细胞的机制提供依据。采用原核表达的方法构建金黄色葡萄球菌LukS-PV和LukF-PV重组质粒并分别转化大肠杆菌BL21,诱导表达纯化后对其进行Western blot鉴定;用Live/Dead细胞荧光染色和Annexin V-FITC/PI双染法检测ATCC49775、△pvl 49775、C-△pvl 49775和rPVL对奶牛乳腺上皮细胞凋亡的影响。成功构建pET28a-LukS-PV、pET28a-LukF-PV重组表达载体,经诱导表达纯化后获得的LukS-PV浓度为0.6 mg·mL~(-1),LukF-PV浓度为1.15 mg·mL~(-1)。rPVL主要诱导奶牛乳腺上皮细胞凋亡(P0.01),金黄色葡萄球菌ATCC49775、△pvl 49775和C-△pvl 49775均能诱导奶牛乳腺上皮细胞明显凋亡和坏死,但pvl阳性菌株ATCC49775和C-△pvl 49775诱导的奶牛乳腺上皮细胞凋亡率和坏死率明显高于△pvl 49775(P0.05)。结果表明原核表达的rPVL对奶牛乳腺上皮细胞表现出较强的毒性;pvl缺陷株△pvl 49775诱导奶牛乳腺上皮细胞凋亡和坏死的能力比pvl阳性菌株ATCC49775和C-△pvl 49775低,说明PVL在金黄色葡萄球菌感染奶牛乳腺上皮细胞过程中有重要作用。  相似文献   

盐酸克林霉素(clindamycin)的应用研究进展     

王晓峰  周学章  郭艳清  完善春 《黑龙江八一农垦大学学报》2002,14(2):82-86

克林霉素属于洁霉素类抗生素，对革兰氏阳性菌作用较强，该药在人医临床应用广泛，兽医临床应用较少。本文对克林霉素的药理特征、制剂类型、药动学特点、不良反应、检测方法等方面进行了综述，旨在全面评估克林霉素，以便为在兽医临床上合理应用该药提供依据。  相似文献   

抗水泡性口炎病毒的单克隆抗体制备及生物学特性鉴定     

周学章  高丰  陈志宝 《黑龙江八一农垦大学学报》2006,18(4):58-61

纯化浓缩水泡性口炎病毒(VSV-IN)作为免疫原,免疫Balb/c小鼠,当免疫抗体效价达到融合要求时,在融合前3d尾静脉加强注射免疫原,取免疫的Balb/c小鼠的脾脏与SP2/0细胞在PEG4000作用下,融合、筛选、克隆获得5株稳定分泌抗VSV单克隆抗体的杂交瘤细胞株。Balb/c小鼠腹腔注射杂交瘤细胞株,收集腹水初步纯化,获5株单克隆抗体,亚类鉴定分属IgG2a和IgM型。  相似文献