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携带猪囊虫表位的嵌合蛋白疫苗的构建及其免疫学研究 总被引：2，自引：0，他引：2
用PCR法将猪囊虫抗原表位n1、n2插入乙肝病毒核心蛋白（HBc）序列的第78～79位之间，将猪囊虫抗原表位n3接在149位之后，再将该序列克隆入pET28a载体中，构建了重组表达质粒pET28a—△c-3n，在大肠杆菌中表达出融合蛋白。命名为PCCE。将PCCE纯化后免疫小鼠，以ELISA检测小鼠的体液免疫应答，Western blot检测抗体的特异性．Dot ELISA验证所选表位的保护性。另用绦虫卵攻击免疫小鼠，以观察疫苗的保护作用。测序结果表明，重组质粒构建成功；SDS—PAGE显示，融合蛋白表达正确，电镜证实有蛋白颗粒形成。对免疫小鼠应用ELISA检测到高滴度抗体；Western blot结果表明。免疫鼠体内诱导出了3种特异性抗体；Dot ELISA结果表明，所逸表位对宿主可能具有保护性。绦虫卵攻击免疫小鼠试验表明，疫苗PCCE的相对保护率为89％。结论：成功地表达和纯化了以HBc为载体的携带3个猪囊虫表位的融合蛋白（PCCE），以PCCE作为疫苗免疫小鼠，能诱导较强的特异性体液免疫反应，免疫小鼠对绦虫卵攻击具有较好的免疫保护作用。 相似文献
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以人工感染伊氏锥虫的小鼠血液涂片为抗原,建立了IFA试验检测马骡伊氏锥虫抗体的方法,并对伊氏锥虫病马、同群马、健康马、非伊氏锥虫病马血清作了检测。伊氏锥虫病马和无症状同群马的抗体阳性率分别为97％(33/34)和12％(18/150);25匹健康马血清伊氏锥虫抗体均为阴性;84份非伊氏锥虫病马血清的IFA试验均为阴性,未出现交叉反应。多数病马发病一周内的血清IFA试验即为阳性。3匹病马血清抗体消长动态观察结果表明,病马于治疗后110天,血清IFA试验仍为阳性。本试验表明,IFA试验检测马骡伊氏锥虫抗体,敏感性高、特异性强,对无症状的感染马也能检出,可用于本病的早期诊断和血清流行病学调查。 相似文献
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以猪囊虫DNA疫苗pPCV为研究对象,其生物安全性问题。将DNA疫苗pPCV以肌注方式免疫仔猪,分别于接种后1d、7d、4周、8周分离各组织,提取组织总DNA,利用PCR技术分析了质粒DNA在各组织的分布,以及与细胞基因组整合的可能性;同时采集环境样品,PCR法分析DNA疫苗上的CMV启动子基因、抗性基因和抗原基因在环境中发生转移和扩散的可能性。结果表明,在疫苗接种后第1天几乎所有组织都能检测到质粒DNA,随着时间的延续,仅在注射部位检测到质粒的存在,并且未发现质粒DNA整合入细胞基因组以及转化环境细菌。实验结果表明肌注DNA疫苗在注射部位以外组织中很快被清除,在注射部位组织及环境细菌中均未发现整合现象,因此认为该DNA疫苗对猪体和环境都是安全的。 相似文献
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传染性法氏囊病病毒VP2基因高变区序列分析 总被引：3，自引：0，他引：3
根据传染性法氏囊病病毒（ＩＢＤＶ）ＶＰ２基因ＣＤＮＡ序列,在ＶＰ２基因高变区设计一对引物,用ＲＴ－ＰＣＲ方法扩增ＩＢＤＶ分离株ＪＳ３和ＪＳ４。将扩增片段克隆后以双脱氧链末端终止法测定核苷酸旬。ＪＳ３和ＪＳ４的同源性最高达９８％。与已发表的ｖｖＩＢＤＶ,ＩＢＤＶ变异要ＢＤＶ经典株为ＩＢＤＶ弱毒株核苷酸序列的同尖拨天９２￣９８％之间,根据ＩＢＤＶ的大ＯＲＦ推导出该片段蛋白的氨基酸序更,ＪＳ３和ＪＳ４的 相似文献
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用ＩＢＤＶ特异引物对ＩＢＤＶＲＮＡ进行逆转录和ＰＣＲ扩增。以低触点琼脂糖凝胶电泳法回收ＰＣＲ扩增带，经酚－氯仿纯化后，用ＤＩＧ际记制备ＩＢＤＶＣＤＮＡ核酸探针．斑点杂交试验证明，该探针能与ＩＢＤＶ不同毒株（ＳＴＣ、Ｌｕｋｅｒｔ、Ｂ＿２和ＬＱ）发生阳性杂交反应，敏感度为１ｐｇ．本实验制备的ＩＢＤＶｃＤＮＡ核酸探针不仅为ＩＢＤＶ的流行病学研究和分子生物学鉴定提供了敏感可靠的手段，而且也是核酸探针制备方法的一次探索。 相似文献
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应用HRP—SPA—ELISA检测猪瘟病毒抗体的试验研究 总被引：2，自引：0，他引：2
应用猪瘟兔化弱毒PEG沉淀抗原、HRP—SPA建立了HRP—SPA—ELISA检测猪瘟病毒抗体的方法。通过对5份阴性血清和32头仔猪注苗前及注苗后不同时期256份系列血清的检测以及阻断试验,证明本法具有较高的敏感性和特异性。猪瘟抗体ELISA效价与兔体中和试验效价比较,二者呈显著的正相关(r=0.8072)。对32头仔猪系列血清的检测结果表明,免疫母猪(配种前45d左右注苗)所生的30～40日龄未注苗仔猪的母源抗体水平不很高,有1/3在阴性范围内,注苗后15d,ELISA抗体开始上升,90d达峰值;90～120d大部分猪的抗体水平迅速下跌到略高于60d时的抗体水平上,保持稳定约2个月左右,但也有一少部分猪90d后抗体水平下跌缓慢,一直保持相当高的水平。 相似文献
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５株已适应鸡胚细胞的ＡＶＡＶ在Ｖｅｒｏ细胞上传２～５代后各毒株均能产生明显的ＣＰＥ和较高的病毒滴度，而２株非鸡胚细胞适应株（分别为鸡胚毒和野外组织毒）在Ｖｅｒｏ细胞上盲传７代，仍无明显的ＣＰＥ出现。这一结果初步表明Ｖｅｒｏ细胞能用于已适应鸡胚细胞的毒株的增殖。而不能用于病毒的分离。吸附时间与冻融次数明显影响病毒的适应进程，以吸附１小时、冻融２次以上为佳。ＡＶＡＶＪＮ－１株能在Ｖｅｒｏ细胞上产生蚀斑，大小为２．７～４．４ｍｍ，出斑时间为接种后４～５天，Ｖｅｒｏ细胞用于中和试验，测得Ｓ（１１３３）株免疫鸡血清的小和效价为１：８０。 相似文献
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