应用斑点酶联免疫吸附试验快速检测犬细小病毒的研究     

邹全明  刘作臣  殷震  夏咸柱 《中国兽医学报》1988,(1)

应用斑点酶联免疫吸附试验(Dot—ELISA,简称斑点试验)能检出少至0.58ng/ml的犬细小病毒的病毒抗原,比常规ELISA及HA试验分别敏感8及64倍,与犬腺病毒等5种对照病毒不发生交叉反应,与病毒分离试验的阳性符合率为94.44％(17/18),比常规ELISA及HA试验提前24～48h检出实验感染犬粪中排毒。采用斑点试验、常规ELISA、HA试验三种方法对316份犬粪标本进行了检测比较,阳性率分别为33.23％、27.85％、23.10％(P<0.05)。该法可在4h内报告结果。  相似文献   

犬冠状病毒YS1株在DK细胞上蚀斑形成方法的建立及其克隆纯化     

余春  夏咸柱  范泉水  何洪彬  邱薇  黄耕 《中国兽医杂志》2001,37(7):6-7

犬冠状病毒 ( CCV)是引起犬发生冠状病毒性肠炎的一种重要病原 ,由于该病毒在普通细胞上培养需较长时间 ( 3～ 6天 )才出现病变 ,且病变不明显 ,不易观察 ,难以广泛开展该病毒的鉴定、克隆、滴定及中和抗体的检测等研究工作。本实验以琼脂糖作为覆盖物 ,在 DK细胞上 ,对该病毒蚀斑的形成条件进行了摸索 ,建立了犬冠状病毒的蚀斑形成方法 ,并以该方法进行了 CCV YS1株的克隆纯化 ,结果较为理想 ,现报告如下。1　材料与方法1 .1　病毒株　犬冠状病毒 YS1株 ,从 CCV肠炎犬病料中分离获得 ,人工感染犬试验 [1]表明其为一株免疫原性良好的…  相似文献   

犬冠状病毒核酸探针的制备及其基因序列的测定与比较     

胡桂学夏咸柱  鲍志宏黄海龙 高云航 《兽医大学学报》2003,23(3):228-230

采用RT—PCR方法扩增犬冠状病毒(CCV)YSl、CI1和NL—18株5’端部分S基因序列，以随机插入DNA法对CCV YSl株纯化的PCR产物标记^32P同位素，制备核酸探针，并与3株CCV反转录产物杂交。用平端连接法将3株CCV PCR产物克隆于pUCl9 SmaI位点或pGEM—T载体中，经PCR鉴定为正确重组质粒。以双脱氧末端终止法测定了重组质粒的cDNA核苷酸序列，并用DNASIS计算机软件进行多重比较分析，绘制系统树。结果表明，所制备的核酸探针可与3株CCV反转录产物杂交，其核苷酸序列与多株CCV相应序列的同源性高达91．9％-99．1％，为CCV的保守区。由此说明，制备的酸破探针可用于犬CCV感染的分于流行病学研究。  相似文献   

猪瘟免疫失败原因概述   总被引：2，自引：0，他引：2  

王雷  卫广森  胡钧  夏咸柱 《中国兽药杂志》2001,35(6):48-51

针对近年我国时常发生的猪瘟免疫失败现象，从疫苗，对疫苗的使用方法，猪瘟病毒本身变异以及免疫程序免疫方法等几方面对发生免疫失败的原因进行分析。并对免疫失败的防制措施提出一些看法。  相似文献   

犬2型腺病毒SY株的致弱驯化   总被引：1，自引：1，他引：0  

范泉水  夏咸柱  邱薇  黄耕  何洪彬  余春  乔军  武银莲  殷震 《中国兽药杂志》2001,35(6):7-9

作者对分离和系统鉴定的一株犬传染性喉气管炎病毒（犬2型腺病毒）SY（沈阳）株，用犬肾传代细胞MDCK进行了致弱驯化，每驯化15代做一次初步的犬的安全性试验。用大剂量不同代次病毒对易感犬进行人工感染试验，每天观察犬的临床症状及白细胞总数，并于接毒后的第5d安乐死，作病理解剖学和病理组织学检查，易感犬的感染试验结果表明，SY株在犬贤细胞上传15代时对犬的致病力已降低，30代时对犬已不引起发烧，精神沉郁和厌食等症状，仅引起轻度的鼻炎，中度的咽炎，剖检肺表现正常，仅见支气管淋巴结肿大，45代时无临床症状，剖检除扁桃体肿大外没有见到其它症状，60代毒已完全失去致病力，未见任何临床症状及病理变化。  相似文献   

牛腺病毒载体研究进展     

邱薇  夏咸柱  范泉水  扈荣良  孙阳  杨美峰 《动物医学进展》2003,24(6):11-14

动物腺病毒与人腺病毒具有相似基因组结构 ,用其构建的动物腺病毒载体可将外源基因转移到人体细胞内表达 ,却又不能在其中复制繁殖 ,且人体内不存在针对它们的免疫应答 ,有望代替人腺病毒作为基因治疗和基因免疫的载体 ,目前已构建了多种动物腺病毒载体。文章综述了近年来牛腺病毒载体构建的一些研究进展。  相似文献   

一种改进的简单快速的多位点突变方法   总被引：2，自引：0，他引：2  

张守峰  扈荣良  夏咸柱 《中国兽医学报》2004,24(1):59-61

为了在 1个基因序列内同时实现多个位点突变 ,本试验以犬 2型腺病毒 E3区为突变目的基因 ,建立了一种以多个引物多聚酶链式反应为基础的简单快速的多位点突变方法。首先根据需要在 E3区不同位置设计了与同一条链互补的 4条突变引物 ,在 4条引物 (PBGL、PNCO、PBST、PNOT)中分别引入了 Bgl 、Nco 、Bst B 和 Not 位点 ,与模板链核苷酸序列相比 ,每条引物内均包含了 2～ 3个突变的碱基 ;然后以含 CAV- 2 E3区基因的质粒为模板 ,利用高保真 DNA聚合酶、d NTPs和 5′末端磷酸化的 4条引物 ,在同一个 PCR反应管内进行突变 PCR反应 ,最后以 Dpn 消化反应管内模板链 ,取少许电激转化 E.coli DH10 B感受态细胞获得转化子。经上述 4种内切酶对转化子 DNA的酶切鉴定 ,证明获得了存在多种突变组合的突变基因 ,为进一步研究 E3区不同缺失对外源基因表达的影响奠定了基础 ,也为其他类似研究提供了一种简单快速的突变方法  相似文献   

犬Ⅰ型腺病毒TN株的分离鉴定     

乔军  孟庆龄  夏咸柱  何宏彬  范泉水 《动物医学进展》2001,22(4):97-99

应用MDCK细胞采用单层吸附接毒和带毒传代的方法，从新疆阿克苏送检的犬粪便中分离出1株犬腺病毒，并对其进行了形态学、理化学、血清学、动物感染试验、分子生物学鉴定。结果证明所分离的TN株为1株CAV－I病毒的强毒株。  相似文献   

应用荧光抗体法快速检验乙脑病毒抗原的试验     

胡敬尧  许基龙  孙恩贵  武德丽  夏咸柱 《中国兽医学报》1981,(3)

乙型脑炎最可靠的诊断方法,是从患病动物体内获得乙型脑炎病毒。其方法通常是将被检材料经处理后,接种小白鼠、或鸡胚、单层细胞培养,然后再通过一些方法,鉴定它是否为乙型脑炎病毒。这种方法最快也需三周以上,而且费事、费钱。应用荧光抗  相似文献   

用反向间接血凝检测乙脑病毒抗原的试验     

夏咸柱  许基龙  胡敬尧  孙恩贵  武德丽 《中国兽医学报》1981,(3)

近年来,随着放射免疫、免疫荧光以及酶免疫测定技术的研究应用,以检测病毒抗原为主要目标的乙脑快诊研究,均取得了可喜的进展。但运用这些技术都需要有一定的条件,对于基层单位来说,目前应用还有困难。间接血凝技术也是目前研究应用较广的一种新技术,具有简便快速的优点,便于基层单位应用,我们进行了乙脑病毒抗原的反向间接血凝试验,现将试验情况报告如下。  相似文献